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蛋白酶K的使用方法、作用及配制2021/01/26

蛋白酶K是一種從白色念珠菌分離出來的強力蛋白溶解酶，具有很高的比活性，是DNA提取的關鍵試劑。該酶在較廣的pH范圍（4?12.5)內(nèi)及高溫(50?70°C)均有活性，用于質(zhì)?；蚧蚪MDNA、RNA的分離。在DNA提取中，主要作用是酶解與核酸結合的組蛋白，使DNA游離在溶液中，隨后用不同方法進行抽提，除去雜質(zhì)，收集DNA。EDTA等螯合劑或SDS等去垢劑均不能使之失活。蛋白酶K貯存液一般為10mg/ml或20mg/ml。貯存于一20°C。蛋白酶K溶液為無色透明，如出現(xiàn)沉淀就不能再使用。蛋白酶K，是

科研實驗須知“三三四”2021/01/25

一、實驗設計的“三要素”1、實驗對象實驗所用的材料即為實驗對象。如用小鼠做實驗，小鼠就是本次實驗的實驗對象，或稱為受試對象。實驗對象選擇的合適與否直接關系到實驗實施的難度，以及別人對實驗新穎性和創(chuàng)新性的評價。一個完整的實驗設計中所需實驗材料的總數(shù)稱為樣本含量。根據(jù)特定的設計類型估計出較合適的樣本含量。樣本過大或過小都有弊端。2、實驗因素所有影響實驗結果的條件都稱為影響因素，實驗研究的目的不同，對實驗的要求也不同。影響因素有客觀與主觀，主要與次要因素之分。研究者希望通過研究設計進行有計劃的安排，從

美國檢測試劑無效，核酸試劑到底有多復雜？2021/01/18

近期刷屏的XG疫情新聞里，核酸試劑是一個高頻詞。許多剛開始爆發(fā)疫情的國家的XGBD核酸試劑儲備不足。比如，我國近期向缺乏XGBD核酸試劑的日本國立傳染病研究所（NIID）捐贈了12500套核酸試劑。而美國匆忙上馬的XGBD核酸試劑卻被證明是一堆廢品。在今年2月12號和26號的新聞發(fā)布會上，美國疾病控制與預防中心（CDC）承認由于一個成分出錯，*給美國國內(nèi)外的公共衛(wèi)生實驗室分發(fā)的400份試劑給出了不準確的測試結果，是無效的。于是乎，CDC只能重新研發(fā)新的新/冠/肺/炎檢測試劑。在2月26號的新聞發(fā)

PCR反應條件如何選擇？2021/01/15

PCR反應條件為溫度、時間和循環(huán)次數(shù)。溫度與時間的設置：基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對于較短靶基因(長度為100～300bp時)可采用二溫度點法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般采用94℃變性，65℃左右退火與延伸(此溫度TaqDNA酶仍有較高的催化活性)。①變性溫度與時間

細胞培養(yǎng)常見問題及其解決方法2021/01/12

1.如何正確地保存培養(yǎng)基？普通的培養(yǎng)基放置在2-8℃冰箱避光保存，若已開封建議3周內(nèi)使用。未開封的培養(yǎng)基，一般可穩(wěn)定保存1年。2.培養(yǎng)基中酚紅的作用是什么？導致培養(yǎng)基顏色變化的原因有哪些？酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。培養(yǎng)基顏色變黃，原因有：培養(yǎng)基中細胞代謝產(chǎn)物為酸性，培養(yǎng)瓶受污染，細菌代謝產(chǎn)酸等導致。培養(yǎng)基顏色偏暗紅色，原因有：培養(yǎng)基保存在4℃冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)的二氧化碳逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性，而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑酚紅會隨著堿性增加

凍融血清沉淀物是否影響血清品質(zhì)？2021/01/08

做細胞培養(yǎng)實驗經(jīng)常會用到血清，當血清用不完我們會凍起來下次再次使用。但你有沒有發(fā)現(xiàn)有時候在融化血清過程中會出現(xiàn)白色的沉淀物質(zhì)，出現(xiàn)這種情況是否血清出現(xiàn)問題了呢？首先我們要搞清楚血清中絮狀沉淀物是什么，沉淀物其實包含含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清（400g，1-2分鐘）或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里（一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾）。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產(chǎn)品

試劑快要過保質(zhì)期了怎么辦？如何處理？2020/12/29

試劑的有效日期是影響實驗結果準確性的重要因素。化學試劑不像食品和藥品有嚴格的保質(zhì)期，化學試劑一般沒有保質(zhì)期的具體要求和界限，這與化學試劑的保質(zhì)期受多方面因素影響有關；要根據(jù)化學性質(zhì)、保存條件等，再結合工作的實際情況判斷試劑是否出現(xiàn)變質(zhì)、能否繼續(xù)使用?！窕瘜W試劑性質(zhì)對有效期的影響●化學試劑一般沒有注明保質(zhì)期，確定試劑是否變質(zhì)主要是憑經(jīng)驗和做新舊試劑對比試驗?；瘜W試劑的有效期隨著化學品的化學性質(zhì)的改變，有著很大的區(qū)別。一般情況下，化學性質(zhì)穩(wěn)定的物質(zhì)，保存有效期就越長，保存條件也簡單。一般遵循以下幾個

胎牛血清與新生牛血清的三大區(qū)別2020/12/25

胎牛血清和新生牛血清同為牛血清那么為什么人們一定要用胎牛血清而不用新生牛血清呢？想知道兩者之間都有哪些區(qū)別？1、來源不同胎牛顧名思義就是指還在母牛身體里的小牛，所以胎牛血清的采集工作，便是先從懷孕中的母牛身體里取出胎牛（通常5-8個月胎齡），之后對未發(fā)育*的胎牛的心臟穿刺取血，完成采血的工作以后便再通過一系列的工藝處理獲得胎牛血清。而新生牛血清主要是采集已出生10天內(nèi)的小牛，而且它們的發(fā)育相對于胎牛而言更加*。國產(chǎn)血清因為原料供應等原因，通常會選8個月以上，或足月剛出生的小牛取血，把它定義為類胎

化學試劑常用分類，您知道嗎？2020/12/21

試劑分類的方法較多。如按狀態(tài)可分為固體試劑、液體試劑。按用途可分為通用試劑、試劑。按類別可分為無機試劑、有機試劑。按性能可分為危險試劑、非危險試劑等?；瘜W試劑又叫化學藥品，簡稱試劑?；瘜W試劑是指具有一定純度標準的各種單質(zhì)和化合物（也可以是混合物)。要進行任何實驗都離不了試劑，試劑不僅有各種狀態(tài)，而且不同的試劑其性能差異很大。有的常溫非常安定、有的通常就很活潑，有的受高溫也不變質(zhì)、有的卻易燃易爆：有的香氣濃烈，有的則劇毒……。只有對化學試劑的有關知識深入了解，才能安全、順利進行各項實驗。既可保證達

配制培養(yǎng)基的四大原則2020/12/15

1.目的明確培養(yǎng)不同的微生物必須采用不同的培養(yǎng)條件；培養(yǎng)目的不同，原料的選擇和配比不同；例如枯草芽孢桿菌：一般培養(yǎng)：肉湯培養(yǎng)基或LB培養(yǎng)基；自然轉(zhuǎn)化：基礎培養(yǎng)基；觀察芽孢：生孢子培養(yǎng)基；產(chǎn)蛋白酶：以玉米粉、黃豆餅粉為主的產(chǎn)酶培養(yǎng)基；根據(jù)不同的工作目的，微生物不同的營養(yǎng)需要，運用自己豐富的生物化學和微生物學知識來配制z佳的培養(yǎng)基。2.營養(yǎng)協(xié)調(diào)微生物細胞組成元素的調(diào)查或分析，是設計培養(yǎng)基時的重要參考依據(jù)。微生物細胞內(nèi)各種成分間有一較穩(wěn)定的比例。在大多數(shù)化能異養(yǎng)菌的培養(yǎng)基中，各營養(yǎng)要素間在量上的比例大

PCR實驗中一聽到就令人 犯愁的PCR異常曲線2020/12/14

在PCR實驗過程中，我們經(jīng)常會遇到各種奇特的擴增曲線，如何正確解讀這些曲線并且做出恰當?shù)慕鉀Q方案是我們一線實驗者需要練就的基本功。今兒，將多年累積的功力編成“武功秘籍”奉上，助你PK掉那些令人犯暈的異常曲線。異常曲線1：PCR擴增抑制原因分析：H07存在擴增抑制解決方案：將樣本稀釋后進行擴增（抑制物的影響可通過稀釋樣本消除異常曲線2：自動基線設置問題原因分析：自動基線問題解決方案：手動設置基線。將BaselineEnd設置為“擴增信號出現(xiàn)的前一個循環(huán)”即，圖片展原始為26，將其設置為20，點擊O

ELISA試劑盒的操作方法、注意事項和優(yōu)勢2020/12/11

ELISAKit通稱為ELISA試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種靈敏度高，特異性強，重復性好的實驗方法，且因其試劑穩(wěn)定，易保存，耗時短，操作簡便，結果判斷客觀等優(yōu)點，已被廣泛應用于免疫學檢驗的各領域中，得到*科研工作者的認可。ELISA是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術。酶聯(lián)免疫吸附試驗的標準程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（captureAb）固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體（primarydetectionAb），形成一個

聯(lián)碩生物：了解離心管的作用，選好離心管，輕而易舉2020/12/07

名稱由來1963年，*只有eppendorf微型離心管誕生于德國eppendorf公司，為分子生物學微量操作實驗提供了一種新的工具。今天eppendorf（ep管）已經(jīng)成為實驗室*的小管子的代稱。大小分類根據(jù)其大小，又分為1.5ml、2ml、5ml、10ml、15ml、50ml等，如果您的離心機是配30ml或者其他規(guī)格的離心管時，就要考慮進口的了。另外，離心管還有圓底和尖底，以及螺旋蓋和插蓋之分。螺旋蓋的離心管帶有較精細的刻度，插蓋的只有一個總體的容量標示。材質(zhì)分類實驗室常用的離心管有塑料的和玻

保存管我們該如何去選擇，只需這幾步2020/12/03

疫情以來，火了XG試劑，連帶著還提攜了一個小兄弟——XG病毒的保存液?！昂鋈缫灰勾猴L來”，保存液也心花怒放了。然而，“亂花漸欲迷人眼”，面對幾百款產(chǎn)品，選擇確實有些無從下手。到底應該看哪些點呢？其實，配方都是尋常物事，大差不差。有廠家干脆采取一直沿用多年的傳統(tǒng)配方——“鹽水”，為之作出了的詮釋。保存液價格，早已經(jīng)“飛流直下三千尺”，甚至是“貼地飛行”了。所以，這不是問題。我們往往關注核酸降解，但這可能是一個偽命題或者偽需求?，F(xiàn)如今，發(fā)熱門診要求6小時甚至4小時出檢測結果，。即便“愿檢盡檢”的樣本

一步解決細胞培養(yǎng)板選擇困擾全程干貨2020/11/30

細胞培養(yǎng)板作為培養(yǎng)細胞的一種常用和重要的工具，形狀、規(guī)格、用途多樣，你是否也為如何選擇適合的培養(yǎng)板而迷茫？你是否正為如何方便、正確的使用培養(yǎng)板而苦惱？你對如何處理培養(yǎng)板是否也有困惑？對不同的培養(yǎng)板各有什么妙用你又有何體會？細胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底（U型和V型）；培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536孔等；根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細胞培養(yǎng)板。具體選擇時根據(jù)培養(yǎng)細胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實驗目的而定。平底和圓底（U型和V型）培養(yǎng)板的區(qū)別和選

細胞培養(yǎng)瓶的作用及分類2020/11/30

細胞培養(yǎng)瓶，顧名思義就是用來培養(yǎng)細胞的。根據(jù)材質(zhì)可以分為玻璃的和塑料的，底部形狀有正方形、長方形、三角形等，根據(jù)瓶子容積有5至500ml供選擇。另外，表面經(jīng)過特殊改性處理后，可以讓細胞更好的進行貼壁培養(yǎng)，這樣根據(jù)細胞貼壁面積又可以分為25～175cm2多種。細胞和組織的體外培養(yǎng)已成為生命研究和實踐的*內(nèi)容。培養(yǎng)的細胞類型繁多,從病毒到細菌和真菌,從人體細胞到動物細胞和植物細胞。一些細胞和組織可在懸浮狀態(tài)下生長,但相當一部分哺乳動物細胞需要表面貼壁。因此,用于提供細胞體外培養(yǎng)環(huán)境的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板和

96孔深孔板的種類和特點2020/09/25

分類：1、按孔數(shù)分類，較常見的可分為96孔板、384孔板。2、按孔型分類，96孔板主要可分為圓孔型和方孔型。其中384孔板全部為方孔型。3、按孔底形狀分類，常見主要有U型和V型兩種。使用范圍：①儲存樣品：可以替代常規(guī)的1.5ml離心管儲存樣品，并且儲存時擺放整潔，節(jié)省空間，儲存量大，可耐受-80℃冰箱。故又被叫做儲存塊。②處理樣品：可以結合排槍、高通量自動液體操作儀器和軟件，實現(xiàn)對生物樣品的高通量操作，比如沉淀蛋白，液液萃取。大大提高樣品處理的效率。PP材質(zhì)更可以耐受121℃高溫高壓滅菌處理。③

聯(lián)碩生物：細胞培養(yǎng)2020/09/18

什么是細胞培養(yǎng)？有哪三種細胞培養(yǎng)？細胞培養(yǎng)的條件是什么？細胞培養(yǎng)的具體步驟是什么？定義:細胞培養(yǎng)（cellculture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術。不論對于整個生物工程技術，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養(yǎng)都是一個*的過程，細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)模克隆。細胞培養(yǎng)技術可以由一個細胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克

ELISA試劑盒的應用和4種類型2020/09/16

ELISA試劑盒的應用ELISA都有哪些類型？一、ELISA是什么？ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)的簡稱。它是在免疫酶技術的基礎上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術。ELISA是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術。酶聯(lián)免疫吸附試驗的標準程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（captureAb）固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體（primarydetectionAb）

胎牛血清使用中出現(xiàn)的常見問題2020/09/10

常見問題：1.如何儲存和解凍胎牛血清？2.胎牛血清中為什么會產(chǎn)生絮狀沉淀？如何避免？3.胎牛血清的熱滅活？4.細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點該怎么做？5.小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別?1、如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融