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中級(jí)會(huì)員 | 第10年
胰酶的配置方法你知道嗎?2022/10/11
胰酶配置方法:1、培養(yǎng)液配制,方便好用,對(duì)細(xì)胞影響小,并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配制,要先調(diào)ph值7.2到7.4(①胰酶(1:250)2.5克②EDTA-Na0.3克③NaCl8.0克④KCl0.4克⑤Glucose1.0克⑥PhenolRed0.005克⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時(shí),調(diào)pH7.8-8.0,過(guò)濾除菌。)3、pbs(0.1%胰酶溶液的配制:稱取胰酶粉末0.1g,先用少許滅菌過(guò)的PBS調(diào)成糊狀,然后補(bǔ)足到100ml。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過(guò)夜
胰酶使用的注意事項(xiàng)2022/10/10
胰酶使用注意:1、在使用胰酶細(xì)胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。2、胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。貼壁細(xì)胞的消化:1、吸去培養(yǎng)液,用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清2、加入少量胰酶細(xì)胞消化液,略蓋過(guò)細(xì)胞即可,根據(jù)胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鐘(不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同)3、顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)
新生牛血清蛋白檢測(cè)指標(biāo)2022/10/09
新生牛血清(NewbornCalfSerum)是來(lái)自剛出生~出生后2周內(nèi)的新生牛靜脈取血。經(jīng)大規(guī)?;旌虾蟪^(guò)濾制成成品,主要用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),是醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品的重要原材料之一,其質(zhì)量好壞直接影響細(xì)胞生長(zhǎng)情況??偟鞍缀渴切律Q逍枰獧z查的指標(biāo)。它屬于化學(xué)成分的初步分析。有人統(tǒng)計(jì)過(guò)國(guó)產(chǎn)新生牛血清的蛋白含量1,在比較各產(chǎn)區(qū)各年份后,發(fā)現(xiàn)其含量在3.7%~4.4%之間。進(jìn)口新生牛血清并不與之*一致。因?yàn)閲?guó)內(nèi)的血清常采自奶牛,而國(guó)外的血清常采自肉牛。蛋白質(zhì)是新生牛血清的主要成分,在細(xì)胞培養(yǎng)中起著維
血清融化后有沉淀怎么辦?影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎?2022/09/29
血清沉淀主要是纖維蛋白等蛋白、磷酸鹽、脂類等經(jīng)凍融后析出,導(dǎo)致血清內(nèi)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象,該現(xiàn)象與血清品質(zhì)無(wú)關(guān),大部分品牌的血清都會(huì)有這種情況,不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng),只是培養(yǎng)時(shí)可能偶爾觀察到血清沉淀,注意區(qū)分血清沉淀和細(xì)胞污染即可。血清沉淀較多時(shí)可以將血清靜置后,盡量吸走上清,下部有大量沉淀的血清可以2000rpm離心5min后取上清與之前取的上清混合使用。血清反復(fù)凍融、高溫融化、融化不均、滅活等因素均有可能導(dǎo)致沉淀增多,血清融化時(shí)應(yīng)盡量在4℃融化,每隔一段時(shí)間搖晃一下。HAKATA胎牛血清產(chǎn)品特點(diǎn)1、內(nèi)毒
動(dòng)物血清的正確熱滅活方法2022/09/28
動(dòng)物血清的熱滅活非常容易造成蛋白析出增多,若非必要,可以無(wú)需做此操作。若必須做動(dòng)物血清的熱滅活,請(qǐng)嚴(yán)格遵守以下步驟:1、保證血清*融化狀態(tài),溫度接近常溫。2、保證水浴溫度56℃、30分鐘的原則,在水浴過(guò)程中每隔2-3分鐘搖晃瓶子,使血清內(nèi)部受熱均勻,直至滅活時(shí)間結(jié)束。注意事項(xiàng):溫度過(guò)高、時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多,甚至嚴(yán)重影響血清的品質(zhì)。在56℃水浴中,持續(xù)恒溫30分鐘。在此過(guò)程中每隔2-3分鐘搖晃瓶子,使其受熱均勻,減少蛋白的析出。為什么要熱滅活血清?加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活
細(xì)胞培養(yǎng)中常用培養(yǎng)基介紹2022/09/26
1、RPMI-1640MediumRPMI-1640廣泛應(yīng)用于哺乳動(dòng)物、特殊造血細(xì)胞、正常或惡性增生的白細(xì)胞,雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng),是目前應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基。主要用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以及HCT-15上皮細(xì)胞等均可參考使用。2、MinimumEssentialMedium(MEM)也稱zui低必需培養(yǎng)基,它僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素。成分簡(jiǎn)單,可廣泛適應(yīng)各種已建成細(xì)胞系和不同地方的哺乳動(dòng)物細(xì)
培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)菌污染怎么判斷?2022/09/23
培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)菌污染怎么判斷?細(xì)菌污染的細(xì)胞過(guò)夜培養(yǎng)后,培養(yǎng)基會(huì)顯著變黃,培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)肉眼可見(jiàn)細(xì)菌沉淀,晃動(dòng)培養(yǎng)基會(huì)有渾濁現(xiàn)象,顯微鏡下觀察細(xì)胞可以看到很細(xì)的沙狀物覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底部。細(xì)胞碎片與污染的分辨可以通過(guò)過(guò)夜培養(yǎng)判斷,過(guò)夜不會(huì)渾濁的主要是細(xì)胞碎片及代謝產(chǎn)物,過(guò)夜會(huì)明顯變黃渾濁的可以判斷為污染。細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)菌污染一般1-2天即會(huì)爆發(fā)至肉眼可見(jiàn)狀態(tài),細(xì)菌污染一般不會(huì)交叉污染,及時(shí)處理掉污染的細(xì)胞即可。培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)菌污染怎么判斷?細(xì)菌污染的細(xì)胞過(guò)夜培養(yǎng)后,培養(yǎng)基會(huì)顯著變黃,培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)肉眼可見(jiàn)細(xì)菌
細(xì)胞凍存時(shí),培養(yǎng)基、血清、DMSO按什么比例配制?2022/09/22
DMSO是目前常用的細(xì)胞凍存保護(hù)劑,一般使用時(shí)終濃度控制在5~10%,最佳濃度取決于細(xì)胞類型。一般來(lái)說(shuō),存活率比較高的細(xì)胞系,培養(yǎng)基、血清、DMSO按照7:2:1的比例新鮮配制使用。細(xì)胞計(jì)數(shù)后,用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞,至5×10^6~1×10^7cells/mL,然后1~1.5mL/管分裝凍存。對(duì)于存活率較低的細(xì)胞系,或者需要長(zhǎng)時(shí)間保存的細(xì)胞系,可以增加凍存液中的血清濃度,血清和DMSO按9:1的比例配制。另外,還有商品化的無(wú)血清凍存液可以選擇,不需要預(yù)先配制。一般會(huì)含有多種保護(hù)劑成分,適
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的使用方法2022/09/21
細(xì)胞培養(yǎng)瓶使用方法:1.擰開蓋子,用傾斜或者泵打的方式將培養(yǎng)基注入細(xì)胞工廠內(nèi),細(xì)胞懸液緩慢流入細(xì)胞工廠各層中。蓋上蓋子,靜止。2.緩慢將細(xì)胞工廠測(cè)立,有加液口的一側(cè)背向自己,靜置使細(xì)胞懸液緩慢均勻流入各層中。3.側(cè)向旋轉(zhuǎn)90度,保持進(jìn)液口朝上,靜置使細(xì)胞懸液緩慢均勻流入各層中。4.雙手握住進(jìn)液口的一面,緩慢放平,避免液體大幅度晃動(dòng)。5.移致合適的細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。6.培養(yǎng)結(jié)束后,將培養(yǎng)基倒入收集容器。細(xì)胞培養(yǎng)瓶的性能特點(diǎn):省時(shí)省空間,1個(gè)10層細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)面積相當(dāng)于36個(gè)T-175細(xì)胞培養(yǎng)
ELISA實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)“花板”怎么解決?2022/09/20
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)于1971年分別由瑞典學(xué)者和荷蘭學(xué)者報(bào)道,開創(chuàng)了運(yùn)用酶標(biāo)記免疫技術(shù)進(jìn)行液體標(biāo)本中微量物質(zhì)測(cè)定的實(shí)驗(yàn)方法。其原理是抗原或抗體的固相化及抗原抗體的酶標(biāo)記。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),由此進(jìn)行定性或定量分析。該實(shí)驗(yàn)因其靈敏度較高,特異性較好,操作較簡(jiǎn)單,可大批量操作而廣泛應(yīng)用于多種傳染性疾病的篩查工作中。然而,“花板"現(xiàn)象的出現(xiàn),往往會(huì)給實(shí)驗(yàn)者判讀結(jié)果帶來(lái)
溶液的顏色與澄清度如何比對(duì)2022/09/16
溶液顏色顏色是通過(guò)眼、腦和我們的生活經(jīng)驗(yàn)所產(chǎn)生的一種對(duì)光的視覺(jué)效應(yīng)。人對(duì)顏色的感覺(jué)不僅僅由光的物理性質(zhì)所決定,比如人類對(duì)顏色的感覺(jué)往往受到周圍顏色的影響。有時(shí)人們也將物質(zhì)產(chǎn)生不同顏色的物理特性直接稱為顏色。濁度是指溶液對(duì)光線通過(guò)時(shí)所產(chǎn)生的阻礙程度,它包括懸浮物對(duì)光的散射和溶質(zhì)分子對(duì)光的吸收。水的濁度不僅與水中懸浮物質(zhì)的含量有關(guān),而且與它們的大小、形狀及折射系數(shù)等有關(guān)。個(gè)人的理解是濁度是顏色的一種特殊表現(xiàn)形式。顏色:定性分析,檢測(cè)場(chǎng)景應(yīng)在均勻的自然光下,標(biāo)準(zhǔn)的白平衡為背景,(標(biāo)準(zhǔn)白平衡背景的面積應(yīng)
ELISA競(jìng)爭(zhēng)檢測(cè)法原理介紹2022/09/14
競(jìng)爭(zhēng)法一般分為直接競(jìng)爭(zhēng)法和間接競(jìng)爭(zhēng)法,這里我們以直接競(jìng)爭(zhēng)法為例進(jìn)行原理講解。直接競(jìng)爭(zhēng)法,其基本原理是:將合適濃度的包被抗體包被于微孔板中,加入無(wú)關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點(diǎn),加入標(biāo)準(zhǔn)品(樣本)和生物素標(biāo)記的抗原物質(zhì)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,經(jīng)合適的溫度和一定時(shí)間的孵育,洗滌后,加入HRP標(biāo)記的鏈霉親和素進(jìn)行反應(yīng),TMB顯色,微孔板中顏色的深淺與待測(cè)物的濃度呈負(fù)相關(guān)。該方法一般用來(lái)檢測(cè)具有較少表位的小分子物質(zhì),當(dāng)然,這種方法也可以用來(lái)檢測(cè)大分子抗原物質(zhì)甚至是抗體。檢測(cè)大分子抗原物質(zhì)時(shí),由于空間位阻的影響,使得該檢
ELISA載體的形狀主要有三種2022/09/13
固相載體在ELISA測(cè)定過(guò)程中作為吸附劑和容器,不參與化學(xué)反應(yīng)??勺鱁LISA中載體的材料很多,*常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來(lái)的免疫學(xué)活性,加之它的價(jià)格低廉,所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。ELISA載體的形狀主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板最為常用,專用于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板,上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè),有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與
細(xì)菌培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)2022/09/08
細(xì)菌培養(yǎng)是一種用人工方法使細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的技術(shù)。細(xì)菌在自然界中分布極廣,數(shù)量大,種類多,它可以造福人類,也可以成為致病的原因。大多數(shù)細(xì)菌可用人工方法培養(yǎng),即將其接種于培養(yǎng)基上,使其生長(zhǎng)繁殖。培養(yǎng)出來(lái)的細(xì)菌用于研究、鑒定和應(yīng)用。細(xì)菌培養(yǎng)是一個(gè)復(fù)雜的技術(shù)。一、培養(yǎng)條件編輯培養(yǎng)時(shí)應(yīng)根據(jù)細(xì)菌種類和目的等選擇培養(yǎng)方法、培養(yǎng)基,制定培養(yǎng)條件(溫度、pH值、時(shí)間,對(duì)氧的需求與否等)。一般操作步驟為先將標(biāo)本接種于固體培養(yǎng)基上,做分離培養(yǎng)。再進(jìn)一步對(duì)所得單個(gè)菌落進(jìn)行形態(tài)、生化及血清學(xué)反應(yīng)鑒定。培養(yǎng)基常用牛肉湯、蛋白
細(xì)胞因子的作用你知道嗎?2022/09/07
細(xì)胞因子(CK)是由活化免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞(如某些基質(zhì)細(xì)胞)合成分泌的能調(diào)節(jié)細(xì)胞生理功能、參與免疫應(yīng)答和介導(dǎo)炎癥反應(yīng)等多種生物學(xué)效應(yīng)的小分子多肽或糖蛋白,是不同于免疫球蛋白和補(bǔ)體的又一類免疫分子。根據(jù)來(lái)源最初將活化淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子稱為淋巴因子(LK),將單核-吞噬細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子稱為單核因子(MK)。目前根據(jù)功能,細(xì)胞因子大致分為以下六類:白細(xì)胞介素;干擾素(IFN);腫瘤壞死因子(TNF);集落刺激因子(CSF);生長(zhǎng)因子和趨化因子。細(xì)胞因子生物學(xué)功能1.介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答2.參與炎
牛血清白蛋白(BSA)在實(shí)驗(yàn)中的用處!2022/09/05
牛血清白蛋白(BSA),是牛血清中的一種球蛋白,包含607個(gè)氨基酸殘基,分子量為66.446KDa,等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用。主要成分蛋白質(zhì)——是牛血清中主要成份。除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外主要還有白蛋白,球蛋白。多肽——血小板促生長(zhǎng)因子能促細(xì)胞分裂,是多肽家庭的主要成員之一,是主要的促細(xì)胞增殖因子;成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)因子等,血清中含量雖很少,但對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)也有一定作用。激素——胰島素:促進(jìn)細(xì)胞攝取葡萄糖和氨基酸,與
細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑膠蟲污染怎么辦?2022/09/01
“黑膠蟲”可寄生于動(dòng)物細(xì)胞,也可以生存于培養(yǎng)基中,依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)為生,并隨細(xì)胞傳代而傳代??梢?jiàn)“黑膠蟲”是一種異養(yǎng)生物。我們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑膠蟲后污染怎么辦?下面有幾個(gè)處理建議,我們一起來(lái)了解下吧!1.換好一點(diǎn)的血清,這樣可以有效減少“小黑點(diǎn)”的形成。一般的血清都不要去滅活處理,為什么呢?因?yàn)榻?jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),或*沒(méi)有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱滅活
細(xì)胞培養(yǎng)遇到培養(yǎng)液渾濁是什么原因?2022/08/31
細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細(xì)胞污染.他們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)中污染的特點(diǎn)如下:1、細(xì)菌:細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯.2、支原體:黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁,原體感染,國(guó)內(nèi)血清很多都沒(méi)有做支原體陰性檢測(cè),而支原體是牛血清中最常見(jiàn)的微生物之一.而且它不能用過(guò)濾的辦法除去.支原體感染細(xì)胞以后,細(xì)胞病變不很明顯,只是慢慢si
細(xì)胞污染有哪些常見(jiàn)的原因你知道嗎?2022/08/29
細(xì)胞污染的常見(jiàn)原因細(xì)菌細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。真菌一般培養(yǎng)液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細(xì)胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細(xì)胞碎片分不清,慢慢的會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物。真菌生長(zhǎng)的比較慢,不像細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了,也很難救活了。支原體黑色的,培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁。國(guó)內(nèi)血清很多都沒(méi)有做支原體陰性檢測(cè),而支原體是牛血清中最常見(jiàn)的微生物之一。而且它
血清融化后有沉淀會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎?2022/08/26
血清沉淀主要是纖維蛋白等蛋白、磷酸鹽、脂類等經(jīng)凍融后析出,導(dǎo)致血清內(nèi)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象,該現(xiàn)象與血清品質(zhì)無(wú)關(guān)。大部分品牌的血清都會(huì)有這種情況,不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng),只是培養(yǎng)時(shí)可能偶爾觀察到血清沉淀,注意區(qū)分血清沉淀和細(xì)胞污染即可。血清沉淀較多時(shí)可以將血清靜置后,盡量吸走上清,下部有大量沉淀的血清可以2000rpm離心5min后取上清與之前取的上清混合使用。血清反復(fù)凍融、高溫融化、融化不均、滅活等因素均有可能導(dǎo)致沉淀增多,血清融化時(shí)應(yīng)盡量在4℃融化,每隔一段時(shí)間搖晃一下。
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