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蒂科(上海)生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第10年
蛋白質(zhì)樣品中蛋白類雜質(zhì)的檢測(cè)方法2022/07/19
本文圍繞蛋白質(zhì)純度的重要性,闡述了蛋白類雜質(zhì)的檢測(cè)方法,包括電泳法,色譜法,沉降速率測(cè)定法,質(zhì)譜法,光散射法。任何方法都不能直接定量蛋白質(zhì)樣品的純度。無(wú)論最終目的是為了解釋分析數(shù)據(jù)、驗(yàn)證過(guò)程質(zhì)量,還是為了確保生物制劑產(chǎn)品的安全性,樣品純度的測(cè)定都是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。隨著蛋白類生物制品的發(fā)展,蛋白質(zhì)純度已經(jīng)成為藥品管理的重大問(wèn)題。在生物制品的質(zhì)量指導(dǎo)原則中指出:除了評(píng)價(jià)原料藥和藥物產(chǎn)品的純度,可能由預(yù)期產(chǎn)品和多種產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)組成之外,還應(yīng)評(píng)價(jià)可能出現(xiàn)的雜質(zhì)成份。這些雜質(zhì)可能是在生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的或者是
血清儲(chǔ)存的小常識(shí)2022/07/18
Q1:血清儲(chǔ)存條件是什么?血清在生產(chǎn)后,運(yùn)送至市場(chǎng)上銷售,整個(gè)過(guò)程中,儲(chǔ)存溫度應(yīng)嚴(yán)格保證在-20℃,避免反復(fù)凍融影響血清活性。因此,實(shí)驗(yàn)人員在收到血清,檢查完好后,及時(shí)將血清送至-20℃冰箱中儲(chǔ)存,用時(shí)再取出采用三步法解凍。第一次解凍后,將血清分裝,儲(chǔ)存在-20℃冰箱中,盡可能減少血清凍融次數(shù)。解凍好的血清也應(yīng)及時(shí)配制成培養(yǎng)基,盡快用完。Q2:血清解凍后可在4℃冰箱中放多久?一般來(lái)說(shuō),解凍了的血清,無(wú)論是否配制成培養(yǎng)基,都不建議在4℃冰箱中久放。血清本身是沒(méi)有外源抗菌成分添加的,4℃冰箱使用頻率
試驗(yàn)中培養(yǎng)基的融化方法2022/07/15
將培養(yǎng)基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法使之融化。經(jīng)過(guò)高壓的培養(yǎng)基應(yīng)盡量減少重新加熱時(shí)間,融化后避免過(guò)度加熱。融化后應(yīng)短暫置于室溫中以避免玻璃瓶破碎。融化后的培養(yǎng)基放入47℃~50℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫,直至使用。融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用,放置時(shí)間一般不應(yīng)超過(guò)4h。未用完的培養(yǎng)基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培養(yǎng)基尤應(yīng)注意,融化后保溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,如有特定要求可參考的標(biāo)準(zhǔn)。傾注到樣品中的培養(yǎng)基溫度應(yīng)控制在約45℃左右。一般產(chǎn)品在受熱、吸潮后,易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì),因此一般情況必須防潮、
蛋白質(zhì)的表達(dá)、分離、純化實(shí)驗(yàn)2022/07/13
基因重組—層析法實(shí)驗(yàn)方法原理攜帶有目標(biāo)蛋白基因的質(zhì)粒在大腸桿菌BL21中,在37℃,IPTG誘導(dǎo)下,超量表達(dá)攜帶有6個(gè)連續(xù)組氨酸殘基的重組氯霉素?;D(zhuǎn)移酶蛋白,該蛋白可用一種通過(guò)共價(jià)偶連的次氨基三乙酸(NTA)使鎳離子(Ni2+)固相化的層析介質(zhì)加以提純,實(shí)為金屬熬合親和層析(MCAC)。蛋白質(zhì)的純化程度可通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)材料大腸桿菌BL21試劑、試劑盒LB液體培養(yǎng)基氨芐青霉素WashingBufferElutionBufferIPTG蒸餾水胰蛋白胨酵母粉氯化鈉儀器、耗材搖床
細(xì)菌培養(yǎng)鑒定操作規(guī)程2022/07/12
1.檢驗(yàn)?zāi)康淖黾膊〉牟≡瓕W(xué)診斷,查找于疾病有關(guān)的病原菌以及了解與疾病的關(guān)系,指導(dǎo)臨床治療及預(yù)后和流行病學(xué)的調(diào)查。2.原理人體很多部位與外界相通,存在棲息菌群,但不致病,當(dāng)菌群失調(diào)或分離到致病菌則具有臨床意義;另外機(jī)體某些部位是無(wú)菌的,如檢出則視為致病菌。并排除采樣及操作污染。3.標(biāo)本要求(1)標(biāo)本類型:,骨髓,腦脊液,胸水,腹水,尿液,等;痰液,前列腺液,膿液,組織分泌物或穿刺液等。(2)標(biāo)本采集:見(jiàn)標(biāo)本采集手冊(cè)(3)標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸:室溫放置,室溫運(yùn)輸并立即送檢。人泌尿生殖道標(biāo)本如白帶前列腺液等
培養(yǎng)細(xì)胞需要注意什么?2022/07/11
1、選擇正確的培養(yǎng)基在養(yǎng)細(xì)胞之,就要了解,你所養(yǎng)細(xì)胞的來(lái)源以及種類和名稱,查閱一定量的文獻(xiàn),確定所需培養(yǎng)液種類以及是否需要添加特殊成分,常用的細(xì)胞培養(yǎng)液有DMEM、RPMI1640、F12等等,一些常見(jiàn)的細(xì)胞基本可以使用這幾種培養(yǎng)基中的一種來(lái)培養(yǎng),有的需要加入一定其他成分,這需要根據(jù)不同的細(xì)胞類型,查ATCC細(xì)胞庫(kù)或者查文獻(xiàn),才能找到所需合適培養(yǎng)液。選擇正確的培養(yǎng)液是養(yǎng)好細(xì)胞的步。2、了解細(xì)胞的生長(zhǎng)習(xí)性不同的細(xì)胞生長(zhǎng)習(xí)性不同。如成纖維細(xì)胞是貼壁生長(zhǎng),有一定的密度依賴性,密度小可能會(huì)出現(xiàn)不增殖,狀
菌株和菌種的區(qū)別你知道嗎?2022/07/08
菌種是指用于發(fā)酵過(guò)程中作為活細(xì)胞催化劑的微生物,其中包括細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌四大類。菌種是從事微生物學(xué)及生命科學(xué)研究的基本材料,在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中,診斷制品的制備,菌苗的生產(chǎn)、微生物致病性研究、藥物的抑菌試驗(yàn)、藥品微生物檢驗(yàn)等方面都有一套完整的菌種,菌種又分為母種、原種以及栽培種三級(jí)。菌株和菌種的區(qū)別1、菌株:菌株是一種菌類系列中一個(gè)品種,又叫品系,表示同種微生物不同來(lái)源的純種培養(yǎng),從自然界中分離得到的每一個(gè)微生物純培養(yǎng)都可稱一個(gè)菌株。2、菌種:菌種則是用于繁殖的種子,是指食用菌、工業(yè)菌、農(nóng)用菌
ELISA試劑盒的應(yīng)用和類型2022/07/07
一、ELISA是什么?ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)的簡(jiǎn)稱。它是在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新型的免疫測(cè)定技術(shù)。ELISA是一種廣泛應(yīng)用在測(cè)定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(captureAb)固定在固相載體上,再加入一級(jí)檢測(cè)抗體(primarydetectionAb),形成一個(gè)抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶
科研用細(xì)胞系鑒定的6大要求2022/07/06
一種新細(xì)胞系,不論是從原代培養(yǎng)衍生或是從已有的細(xì)胞系衍生,很難估計(jì)它未來(lái)的價(jià)值。通常要經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的應(yīng)用、傳播以后,該細(xì)胞系真正的重要性才體現(xiàn)出來(lái)。這時(shí),需要有關(guān)其起源的詳細(xì)信息,然而已經(jīng)為時(shí)太晚,無(wú)法回顧性的收集信息。因此,從組織分離或得到一種新的細(xì)胞系開始,充分記錄有關(guān)細(xì)胞系的起源和處理的詳細(xì)資料,是至關(guān)重要的。這些記錄形成該細(xì)胞系的“身世”,記錄越詳細(xì),價(jià)值越大。隨著細(xì)胞系通過(guò)細(xì)胞庫(kù)和私人聯(lián)系廣泛傳播到已遠(yuǎn)離其起源的各研究室及商業(yè)公司,細(xì)胞培養(yǎng)工作中細(xì)胞系起源方面的問(wèn)題也變得尤其重要,特別
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC) 的培養(yǎng)方法2022/07/05
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)是從臍帶靜脈中分離出來(lái)的原代細(xì)胞。這種細(xì)胞是研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞的模型系統(tǒng),研究相關(guān)的低氧、炎癥、氧化應(yīng)激、感染反應(yīng)以及正常和腫瘤相關(guān)血管生成等應(yīng)用。TNF-α和IFN-γ等細(xì)胞因子會(huì)誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞激活(一種炎性反應(yīng)),并導(dǎo)致VCAM-1/CD106等細(xì)胞黏附分子上調(diào),這些上調(diào)可使用熒光標(biāo)記抗體和細(xì)胞成像進(jìn)行定量,以下是人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)培養(yǎng)操作方法。一、實(shí)驗(yàn)方法原理本實(shí)驗(yàn)采用新鮮的健康產(chǎn)婦新生兒臍帶,采用膠原酶Ⅰ型用消化分離得到臍靜脈內(nèi)皮原代細(xì)胞。膠原酶是理想的
如何正確提取胎牛血清白蛋白?2022/07/04
胎牛血清白蛋白(BSA),又稱第五組分,是牛血清中的一種白蛋白,包含583個(gè)氨基酸殘基,分子量為66.430kDa,等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用,例如在westernblot中作為Blockingagent;在酶切反應(yīng)緩沖液中加入BSA,通過(guò)提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度,對(duì)酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附,能減輕有些酶的變性,能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱,表面張力及化學(xué)因素引起的變性。是胎牛血清中的一種球蛋白,一般獲取胎牛血清白蛋白,常常運(yùn)用的方法是加熱法。下面一起來(lái)看
支原體的相關(guān)知識(shí)您了解嗎?2022/06/30
支原體早發(fā)現(xiàn)于1898年,1956年Robinson等從細(xì)胞培養(yǎng)物中分離出支原體,之后國(guó)內(nèi)外關(guān)于支原體污染細(xì)胞的報(bào)道屢見(jiàn)不鮮。它廣泛存在于自然界中,有80余種,污染細(xì)胞常見(jiàn)的支原體包括發(fā)酵支原體(M.fementans)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)、口腔支原體(M.orale)、精氨酸支原體(M.arginina)、梨支原體(M.pirum)、唾液支原體(M.salivarium)和人型支原體(M.hominis)。支原體通常附著在細(xì)胞的表面,并影響其宿主細(xì)胞的生理、遺傳等多方面的正常
怎么測(cè)定培養(yǎng)基的pH值才更準(zhǔn)確?2022/06/29
校準(zhǔn)首/先在測(cè)量pH值時(shí),我們都會(huì)對(duì)pH計(jì)進(jìn)行一個(gè)校準(zhǔn)工作,它的校準(zhǔn)準(zhǔn)確率對(duì)后續(xù)的測(cè)量有很大影響。pH電極需要有規(guī)律的進(jìn)行校準(zhǔn)。每天至少校準(zhǔn)一次,是最恰當(dāng)?shù)?。由于每支電極都有其特征性的零點(diǎn)和斜率,為了得到可靠和精確的結(jié)果,最少兩點(diǎn)校準(zhǔn)是bi不可少的。當(dāng)要測(cè)量大范圍的pH值時(shí),則需要進(jìn)行至少3點(diǎn)校準(zhǔn)。大多數(shù)的pH儀表可以進(jìn)行3-5點(diǎn)校準(zhǔn)。同時(shí)所測(cè)量的樣品pH值落在所選擇標(biāo)準(zhǔn)液范圍之內(nèi)也是非常重要的。在電極進(jìn)行校準(zhǔn)時(shí),最好等待緩沖液溫度在標(biāo)示溫度下校準(zhǔn),這樣測(cè)出的pH值才是緩沖液標(biāo)示的值,比如pH6
碰到血清沉淀怎么辦?2022/06/28
血清沉淀是什么?血清中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀,其成分有多種類型,產(chǎn)生的原因有很多,主要有纖維蛋白、磷酸鈣還有一些其它成分。1.纖維蛋白(Fibrin)血清中肉眼可見(jiàn)的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過(guò)程中,血清采集、過(guò)濾(3次0.1μm過(guò)濾)和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成,此時(shí)血清中纖維蛋白原(Fibrinogen)處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后,血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集,形成肉眼可見(jiàn)的沉淀。2.磷酸鈣(CalciumPhosphate)這是一種常見(jiàn)的沉淀成分,通常會(huì)造成血清出現(xiàn)云霧狀
細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的兩大根本原因2022/06/27
一、培養(yǎng)體系出現(xiàn)問(wèn)題1.檢查你所培養(yǎng)的細(xì)胞是否存在污染。(1)如果培養(yǎng)細(xì)胞未添加抗生素,細(xì)胞污染則是不可避免的。①用肉眼和顯微鏡進(jìn)行檢查。②如果細(xì)胞被污染則要棄掉。(2)由于支原體污染不容易覺(jué)察到,因此必須定期檢測(cè)。(3)檢測(cè)可能污染的途徑和原因。2.檢查你用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基和血清(例如:是否批次不同或廠商不同)。如果你常規(guī)使用的是粉劑或10×儲(chǔ)存液,而現(xiàn)在購(gòu)買的培養(yǎng)基更換為1×液體,而隨后證明問(wèn)題就出自于此。3.如果問(wèn)題與培養(yǎng)基無(wú)關(guān),那么很可能還是細(xì)胞的問(wèn)題。(1)復(fù)蘇另一支凍存的細(xì)胞,并且
巨噬細(xì)胞在病毒感染后的作用研究2022/06/24
冠狀病毒(CoV)是自然界廣泛存在的一類病毒,因該病毒的形態(tài)在電鏡下觀察類似王冠而得名。其基因總長(zhǎng)約28~32kb,基因組大致可分成6到7個(gè)區(qū)域,每個(gè)區(qū)域均包含至少1條開放閱讀框(opten-readingframe,ORF)。CoV顆粒的直徑約60~200nm,平均直徑為100nm,呈球形或橢圓形,是目前發(fā)現(xiàn)最大的RNA類病毒。目前為止發(fā)現(xiàn)冠狀病毒僅感染脊椎動(dòng)物,可引起人和動(dòng)物呼吸道、消化道、泌尿生殖系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)疾病。2019新型guan狀病毒(COVID、19)是新發(fā)現(xiàn)的可以感染人和動(dòng)物的
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需要注意哪些細(xì)節(jié)?2022/06/22
1.細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源不同的細(xì)胞的培養(yǎng)基是不相同的,對(duì)于大多數(shù)腫瘤細(xì)胞來(lái)說(shuō),營(yíng)養(yǎng)配方一般為:90%合成培養(yǎng)基(DMEM、RPMI1640、MEM等)和10%胎牛血清(FBS);為了防止污染,可以適時(shí)加1%雙抗,抗生素的使用應(yīng)為短期。Q:細(xì)胞培養(yǎng)基配方如何選擇?A:一般購(gòu)買細(xì)胞時(shí),針對(duì)不同的細(xì)胞株,會(huì)有詳細(xì)的介紹,包括生長(zhǎng)的狀態(tài)圖、培養(yǎng)基的類型等。如人源肺癌細(xì)胞A549可用DMEM培養(yǎng)基,在胎牛血清的選擇上也可以選用品牌、來(lái)源可靠的胎牛血清,能提供較好的營(yíng)養(yǎng)成分,以滿足細(xì)胞株生長(zhǎng)的需要。Q:如果細(xì)
胰酶的使用注意事項(xiàng)及配制方法2022/06/21
胰酶使用注意:1、在使用胰酶細(xì)胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。2、胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。胰酶配制方法:1、培養(yǎng)液配制,方便好用,對(duì)細(xì)胞影響小,并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配制,要先調(diào)ph值7.2到7.4(①胰酶(1:250)2.5克②EDTA-Na0.3克③NaCl8.0克④KCl0.4克⑤Glucose1.0克⑥PhenolRed0.005克⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時(shí),調(diào)pH7.8-8.0,過(guò)濾
細(xì)胞凍存液的原理及配制方法2022/06/20
細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以zui大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中,及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分
細(xì)胞復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)操作步驟,你了解嗎?2022/06/17
細(xì)胞復(fù)蘇的原則:慢凍速融,必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對(duì)細(xì)胞造成損害。復(fù)蘇步驟一.實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:將水浴鍋預(yù)熱至37℃。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行常規(guī)消毒,用75%酒精擦拭并且使用紫外線照射40min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過(guò)毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等。二.取出凍存管:根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號(hào)。從液氮罐中取出細(xì)胞盒,取出所需的細(xì)胞,同時(shí)核對(duì)管外的編號(hào)。三.迅速解凍:迅速將凍存管投入到
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