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成纖維細胞的培養(yǎng)方法分享2023/06/12

分離培養(yǎng)成纖維細胞的分離培養(yǎng)一開始并不涉及成骨作用，而主要是用于研究細胞的老化、各種外來因子對細胞的損傷、細胞在體外條件下的惡性轉(zhuǎn)化、以及某些先天性代謝異常、酶缺陷等。由于皮膚成纖維細胞易于獲取，又易于在體外生長，皮膚成纖維細胞培養(yǎng)已在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究中得到較廣泛的運用，其分離培養(yǎng)技術(shù)已相對成熟，對其體外生長規(guī)律也有了較全面的認識。原代培養(yǎng)成纖維細胞的原代培養(yǎng)可用酶消化法或組織塊法，其中組織塊法又因其操作簡便、條件易于控制而應(yīng)用更為普遍。通常，以酶消化法獲得的成纖維細胞懸液在接種后5～10

幾種原代細胞傳代方法2023/06/05

原代細胞是指從機體的組織（如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等）經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞并在體外進行模擬機體培養(yǎng)的細胞，稱為原代細胞。一股認為，培養(yǎng)的原代的第1代細胞和傳代到第10代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細抱培養(yǎng)。在人工條件下使其原代細胞生存、生長、繁殖和傳代，進行細胞生命過程、細胞瘍變、細胞工程等問題的研究。那么關(guān)于原代細胞的傳代培養(yǎng)，我們應(yīng)該怎么做呢?一股有以下兩種方法：一、貼壁細胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。2、加入1ml左右消化液（胰蛋白鱷或與EDTA混合液）輕輕接動

如何保證血清活性？2023/05/29

常規(guī)儲存首先，剛到貨的血清，趁著它還凍手，趕緊放進-20℃冰箱中，避免反復(fù)凍融。當(dāng)然，如果你的課題組不差錢，-80℃冰箱空間充足，把血清儲存進去也是沒有問題的。如何解凍放4℃過夜直接在4℃冰箱里過夜融化的方法，雖然很多人在這么用，但還是有一些潛在的風(fēng)險的。我們都知道，在血清這種混合物中，融化速度：蛋白質(zhì)等干物質(zhì)水這類溶劑，所以蛋白質(zhì)會先溶解析出，而水還是結(jié)成冰的狀態(tài)，導(dǎo)致瓶子中間會出現(xiàn)一根透明的冰柱，而周圍則會呈現(xiàn)上黃下紅的分層渾濁液的狀態(tài)，在使用過程中很容易引起沉淀、混合不均勻、局部濃度過高等

細胞轉(zhuǎn)染實驗中常見問題2023/05/15

一、轉(zhuǎn)染效率低影響轉(zhuǎn)染效率因素很多，主要因素有細胞培養(yǎng)物、血清、載體構(gòu)建、DNA質(zhì)量以及轉(zhuǎn)染技術(shù)等。1.沒有使用優(yōu)化條件：優(yōu)化陽離子脂質(zhì)體試劑和DNA的量。2.DNA-陽離子脂質(zhì)體試劑復(fù)合物在存在血清條件下形成。3.存在抑制劑：不要在用于制備DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物的培養(yǎng)基中使用抗生素，EDTA，檸檬酸鹽，磷酸鹽，RPMI，硫酸軟骨素。透明質(zhì)酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白多糖。4.不恰當(dāng)?shù)募毎芏龋恨D(zhuǎn)染時融合度應(yīng)為70%-90%。5.陽離子脂質(zhì)體試劑凍結(jié)：不要使用凍結(jié)的或儲存溫度低于4℃的陽離子

血清的具體實驗作用你了解多少？2023/05/08

①有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。②是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。③提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。④起酸堿度緩沖液作用。⑤提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。⑥提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。血清性狀、外觀：淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。血清指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指

干細胞外泌體知多少？2023/04/24

2013年諾貝爾獎中，美國科學(xué)家詹姆斯·羅斯曼等三人發(fā)現(xiàn)了細胞的囊泡運輸調(diào)控機制，外泌體是囊泡的其中一種。外泌體(exosomes)是一種能被機體內(nèi)大多數(shù)細胞分泌的微小膜泡，具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)，直徑大約為30-150nm(頭發(fā)絲的1/1000)。外泌體廣泛存在并分布于各種體液中，攜帶和傳遞重要的信號分子，形成了一種全新的細胞-細胞間信息傳遞系統(tǒng)，影響細胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進程密切相關(guān)。其主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。干細胞

DMEM高糖、DMEM低糖、DMEM/F-12培養(yǎng)基到底啥差別？2023/04/18

DMEM高糖培養(yǎng)基DMEM高糖培養(yǎng)基是在MEM培養(yǎng)基基礎(chǔ)上改良而來，目前已廣泛應(yīng)用于各種細胞的培養(yǎng)。DMEM高糖培養(yǎng)基普遍應(yīng)用于生長快、粘附性低的細胞?？捎糜诙喾N哺乳動物原代細胞的培養(yǎng)，例如原代成纖維細胞、神經(jīng)細胞、神經(jīng)膠質(zhì)細胞、HUVEC、平滑肌細胞等，也可以用于一些細胞系的培養(yǎng)，例如Hela、293、Cos-7及PC-12等。DMEM低糖培養(yǎng)基DMEM低糖培養(yǎng)基是一種應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基，可用于許多哺乳動物細胞培養(yǎng)。DMEM低糖培養(yǎng)基適合代謝作用慢、依賴性貼壁細胞的培養(yǎng)。DMEM/F-12培

原代細胞與細胞系怎么選擇？2023/04/11

原代細胞生長緩慢，一般認為，原代細胞培養(yǎng)的第1代和傳代到第10代以內(nèi)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細胞的生長會出現(xiàn)停滯，大部分細胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機”而繼續(xù)傳下去，這些存活的細胞一般能夠傳到40-50代，這種傳代細胞叫做細胞株。當(dāng)細胞傳至50代以后又會出現(xiàn)“危機”，這時有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱為細胞系。細胞系因其容易培養(yǎng)、種類多、產(chǎn)量可觀的優(yōu)點一直是細胞水平研究的Shou選

細胞培養(yǎng)實驗中培養(yǎng)液渾濁原因分析2023/04/04

培養(yǎng)基變渾濁的原因可能有如下幾點：1、細胞存在污染，污染早期可以見到細胞生長；2、不排除傳代時細胞密度過大，或者操作不當(dāng)導(dǎo)致多數(shù)細胞不貼壁，大量細胞漂浮。3、細胞破碎。細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染.他們在細胞培養(yǎng)中污染的特點如下：1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據(jù)感染細菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯.2、支原體：黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會

在細胞實驗中血清熱滅活的作用和意義2023/03/31

一、血清滅活的目的是什么？1、血清熱滅活目的主要是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質(zhì)，但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。2、實驗員曾對商業(yè)胎牛血清中的補體成分進行測定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1、C6僅達成年動物血清的1-3%，而其它補體成分僅有成年動物的5-50%，至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補體固定實驗，也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。多數(shù)實驗室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進行預(yù)熱的過程，也對熱敏的補體有滅活的作用。3、熱滅活另一個目的是為了使支原體失活。二、血清使用前是

常規(guī)培養(yǎng)基的配制流程介紹2023/03/28

1、計算稱量根據(jù)待檢樣品屬性計算出所需的不同培養(yǎng)基的體積，根據(jù)說明書進行準確稱量；電子天平需開機預(yù)熱30min后使用，稱量過程中手要穩(wěn)，避免將培養(yǎng)基灑落在天平稱量盤中，若灑落，應(yīng)立即停止稱量，使用潔凈布擦干粉末，重新調(diào)“0”后稱量。2、溶化對于可溶性淀粉,先用少量冷水調(diào)成糊狀,再放入沸水中；不易溶解的培養(yǎng)基，先加入少量純化水振搖溶解后，二次加水配制；需分裝的培養(yǎng)基，需溶解，含瓊脂的培養(yǎng)基需加熱融化，溶解后，分裝至不同容器中進行滅菌。3、分裝如果要制作斜面培養(yǎng)基，須將培養(yǎng)基分裝于試管中。如果要制作

ECL化學(xué)化學(xué)發(fā)光底物（超敏）的操作步驟2023/03/22

ECL化學(xué)化學(xué)發(fā)光底物（超敏）可為使用辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)物的免疫印跡實驗提供明亮的信號和低皮克級檢測靈敏度。該ECL底物能夠兼容各種膜、封閉液和寬范圍抗體稀釋液，以出色性能、通用性和高性價比，滿足用戶的免疫印跡應(yīng)用需求。操作步驟：1、執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)模和WesternBlot步驟。注意用HRP標記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。2、WesternBlot最后一次洗模的同時配置發(fā)光工作液：分別取等體積的A液和B液，放入干凈容器中混合（注意吸取A液和B液的吸頭一定

什么是牛血清白蛋白？2023/03/20

牛血清白蛋白（BSA）是牛血清中的一種球蛋白，包含607個氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點為4.7。應(yīng)用：牛血清白蛋白（BSA）在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用，例如在WB實驗中加入BSA，通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對酶起保護作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性減輕不利環(huán)境因素，如加熱、表面張力及化學(xué)因素引起的變性。測定蛋白濃度按50：1配置BCA工作液。10ulC液（蛋白標準）+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標準液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、

細胞培養(yǎng)基需要更換哪些指標呢？2023/03/15

無論是原代培養(yǎng)還是細胞系的傳代培養(yǎng)，一旦培養(yǎng)開始，就要定期更換或補充培養(yǎng)基。如果細胞持續(xù)增殖，隨后遲早要進行傳代培養(yǎng)。對干不增殖的培養(yǎng)物，也需要定期更換培養(yǎng)基，因為細胞仍會代謝，培養(yǎng)基的某些成分會耗盡或自然降解，產(chǎn)生的代謝廢物也需要通過換液去除。細胞傳代間隔在不同細胞系中因生長速率和新陳代謝的不同而不同?？焖偕L的轉(zhuǎn)化細胞系，如HeLa細胞系，通常每周傳代一次，四天后換液。生長緩慢的細胞系，特別是非轉(zhuǎn)化的細胞系，可能每兩周、三周甚至四周傳代一次，兩次傳代之間每周換液。有四個指標表示需要更換培養(yǎng)基

動物細胞培養(yǎng)4大常用合成培養(yǎng)基2023/03/07

體外培養(yǎng)動物細胞已經(jīng)有近百年的歷史，但該技術(shù)真正得以廣泛應(yīng)用及各種類型組織細胞大量體外培養(yǎng)成功是由于適合細胞體外生長需要的合成培養(yǎng)基的問世。合成培養(yǎng)基是對細胞體內(nèi)生存環(huán)境中各種已知物質(zhì)在體外人工條件下的模擬。這種模擬不是被動的、不加選擇的，而是在體外反復(fù)實驗和篩選，進行強化和重新組合后形成的人工合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基種類很多，據(jù)報道已有數(shù)十種，每種合成培養(yǎng)基最初都是為培養(yǎng)某種細胞而設(shè)計的，但應(yīng)用后發(fā)現(xiàn)其他細胞也可以生長或經(jīng)改良也適合其他細胞的生長。01.199培養(yǎng)基199培養(yǎng)基是Morgan、M

pH緩沖液的使用方法和配制保存2023/03/02

pH緩沖液是確保pH測量值精確的重要因素。標準緩沖液用于校準pH傳感器和檢查其性能。pH緩沖液的緩沖能力是其重要的屬性。即使將外部物質(zhì)加入緩沖液中，這一屬性仍可使pH緩沖液保持恒定的pH值。pH緩沖液使用方法：首先取少量校正液潤洗小量杯，然后加入適量校正液（液面高度沒過電極的感應(yīng)探頭即可）。按照電子pH測試筆使用說明書進行校正。由于校正液是高精密的液體，是電子ph測試筆精確度的保障，因此用過的校正液不能再倒回瓶中，以免影響校正液精度，帶入細菌等，造成校正液無法繼續(xù)使用。pH緩沖液的配制及其保存：

酪蛋白的作用2023/02/27

酪蛋白是哺乳動物包括母牛，羊和人奶中的主要蛋白質(zhì)，又稱：干酪素、酪朊、乳酪素。α-酪蛋白是哺乳動物的主要蛋白，人乳中沒有α-酪蛋白，以β-酪蛋白為主要酪蛋白形式。酪蛋白對幼兒既是氨基酸的來源，也是鈣和磷的來源，酪蛋白在胃中形成凝乳以便消化。作用：酸酪蛋白主要用作涂料的基料，木、紙和布的粘合劑，食品用添加劑等。作為涂料的基料約占總消費的一半，具有優(yōu)良的耐水性，在顏料中能很好地分散，提高涂料的均勻性。此外，因流動性好，易于涂裝施工，粗制凝乳酶蛋白主要用于制造塑料鈕扣。酪蛋白鈕扣與其他樹脂鈕扣相比，染

影響細胞培養(yǎng)的有哪些因素？2023/02/23

環(huán)境因素1．無菌環(huán)境無毒和無菌是體外培養(yǎng)細胞的首要條件。細胞在活體內(nèi)，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵，但細胞在體外培養(yǎng)的過程中，缺乏機體免疫系統(tǒng)的保護而喪失對微生物的防御能力和對有害物質(zhì)的解毒能力。為保證細胞能在體外環(huán)境中生長繁殖，必須要確保無菌工作區(qū)域、良好的個人衛(wèi)生、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作。常見的微生物污染有支原體、細菌、真菌。支原體無致死毒性，可與細胞長期共存，對細胞有潛在影響，但體積小，不易鑒別，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來進行檢測。細菌增殖快

細胞培養(yǎng)可以分哪幾類？2023/02/21

細胞培養(yǎng)（cellculture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說，細胞培養(yǎng)都是一個bi不可少的過程，細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)模克隆。細胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術(shù)bi不可少的環(huán)節(jié)，而且細胞培養(yǎng)本身就是細胞的克隆。細胞培養(yǎng)技術(shù)是細胞生物學(xué)

培養(yǎng)細胞時，胎牛血清提供什么幫助？2023/02/15

1.提供細胞生長所需的天然激素或天然生長因子,如胰島素、IGFII等。2.提供天然的結(jié)合蛋白如胎球蛋白、白蛋白等，能識別氨基酸、脂質(zhì)、金屬離子和激素等，能結(jié)合并調(diào)節(jié)它們的活性。胎球蛋白（Fetuin），具有多個鈣離子結(jié)合位點，能調(diào)節(jié)血清中的鈣離子濃度。3.提供細胞外基質(zhì)成分，便于細胞粘附、貼壁、鋪展。當(dāng)然，有些細胞也能分泌部分外基質(zhì)成分，但血清中的更不可少。4.提供解毒和抗氧化功能。如牛血清中有金屬硫蛋白，銅藍蛋白等。對多種重金屬有高度親和性，并可清除細胞生長環(huán)境中的氧自由基（·O），可防止細胞