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當(dāng)前位置：科德角國(guó)際生物醫(yī)學(xué)科技（北京）有限公司>>技術(shù)文章

創(chuàng)建用于內(nèi)毒素加標(biāo)研究和LAL樣品保持時(shí)間分析的內(nèi)部天然內(nèi)毒素制劑2024/07/16: 摘要檢測(cè)生物制藥產(chǎn)品中可能存在的內(nèi)毒素對(duì)患者安全至關(guān)重要。雖然內(nèi)毒素分子本身是高度穩(wěn)定的，但基質(zhì)成分、儲(chǔ)存溫度和容器組成等各種因素都會(huì)影響其在制造收集并隨后檢測(cè)內(nèi)毒素含量的樣品時(shí)的穩(wěn)定性。位于馬薩諸塞州安多弗的輝瑞制藥公司開發(fā)了一個(gè)程序，用于創(chuàng)建內(nèi)部天然內(nèi)毒素（NOE）制劑，以評(píng)估內(nèi)毒素在不同基質(zhì)、溫度和容器中的穩(wěn)定性。使用NOE比使用市售的細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）更有優(yōu)勢(shì)，如增加實(shí)驗(yàn)室的靈活性和控制，輝瑞公司已使用內(nèi)部天然內(nèi)毒素（NOE）制劑來評(píng)估內(nèi)毒素在不同基質(zhì)和溫度下的穩(wěn)定性。介紹內(nèi)

不同內(nèi)毒素破壞方法的比較研究2024/07/15: 一、介紹干熱法是制藥行業(yè)公-認(rèn)的去熱原方法。本文介紹了一系列研究，以確定除干熱法外，是否還能用其他方法成功去除熱原。去熱原是指去除或滅活熱原。在實(shí)踐中，通過證明去熱原工藝能夠?qū)⒓?xì)菌內(nèi)毒素降低到可接受的水平來對(duì)其進(jìn)行鑒定。與滅菌一樣，去熱原是一個(gè)絕對(duì)的術(shù)語，由于測(cè)試不敏感，只能在理論上進(jìn)行證明[1]。玻璃器皿的去熱原在腸胃外藥物的生產(chǎn)中非常重要，因?yàn)闅埩舻臒嵩罱K可能被注射到患者體內(nèi)，導(dǎo)致不良反應(yīng)。在實(shí)驗(yàn)室中，用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)的玻璃器皿必須進(jìn)行去熱原處理，以最-大-程-度地減少檢測(cè)污染；采樣容器

TLRs的種屬特異性表達(dá)調(diào)控：各TLRs的差異性研究2024/07/08: 內(nèi)毒素耐受現(xiàn)象指的是在脂多糖（LPS）的初始刺激后，機(jī)體或細(xì)胞對(duì)隨后同類刺激的響應(yīng)能力顯著降低的狀態(tài)。這一現(xiàn)象中，Toll樣受體（TLR）作為關(guān)鍵分子，積極參與了LPS信號(hào)的跨膜傳遞過程。TLRs介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在內(nèi)毒素耐受機(jī)制中扮演著核心角色，通過調(diào)控信號(hào)傳導(dǎo)蛋白及下游細(xì)胞因子的結(jié)構(gòu)變化與功能活性，進(jìn)而抑制了炎性因子的過量釋放。目前TLRs的研究主要集中在與配體相互作用及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面，對(duì)其基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究尚報(bào)道較少。近年來，一些研究觀察了人或小鼠組織或離體細(xì)胞內(nèi)TLRs轉(zhuǎn)錄體的基礎(chǔ)和誘導(dǎo)

揭秘脂多糖致病機(jī)制：LBP與CD14的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)2024/07/04: 在生物醫(yī)學(xué)研究的浩瀚星空中，脂多糖（LPS）及其相關(guān)的分子機(jī)制如同璀璨的星辰，帶領(lǐng)著我們深入探索機(jī)體免疫與炎癥反應(yīng)的奧秘。近年來，隨著研究的不斷深入，脂多糖結(jié)合蛋白（LBP）與脂多糖受體（CD14）作為L(zhǎng)PS致病過程中的關(guān)鍵媒介因子，逐漸揭開了它們復(fù)雜而精細(xì)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。1、脂多糖結(jié)合蛋白：LPS效應(yīng)的催化劑脂多糖結(jié)合蛋白，作為一種急性反應(yīng)蛋白，主要由肝臟合成并釋放入血，其結(jié)構(gòu)使其能夠與LPS的類脂A部分緊密結(jié)合。這種結(jié)合不僅增強(qiáng)了LPS的生物活性，還促進(jìn)了LPS在細(xì)胞間的傳遞。在低濃度LPS存在

細(xì)菌內(nèi)毒素的生物學(xué)活性及其對(duì)機(jī)體的危害2024/07/04: 細(xì)菌內(nèi)毒素，即脂多糖（LPS），尤其是其中的類脂A部分，具有廣泛的生物學(xué)活性，對(duì)機(jī)體的影響可以是多方面的，從輕微的炎癥反應(yīng)到嚴(yán)重的全身性炎癥反應(yīng)綜合征（SIRS）、多器官功能障礙綜合征（MODS）甚至死亡。以下是一些主要的生物學(xué)活性和影響：一、細(xì)菌內(nèi)毒素的生物學(xué)活性及其影響1、非特異性細(xì)胞膜結(jié)合與功能干擾細(xì)菌內(nèi)毒素（如LPS）能夠與多種細(xì)胞的細(xì)胞膜非特異性結(jié)合，這種結(jié)合會(huì)干擾細(xì)胞膜的正常功能，如物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、信號(hào)傳導(dǎo)等，從而影響細(xì)胞的正常生理功能。2、線粒體損傷與能量代謝障礙線粒體作為細(xì)胞的“能量工

細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)原理與鱟試劑應(yīng)用技術(shù)詳解2024/07/02: 在確保醫(yī)藥制品安全性的征途中，細(xì)菌內(nèi)毒素檢查占據(jù)著舉足輕重的地位，尤其是對(duì)于注射液等直接進(jìn)入人體血液循環(huán)的藥品而言。這一過程的核心在于利用鱟試劑的特殊性質(zhì)來精準(zhǔn)識(shí)別并測(cè)定革蘭陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素。本文將深入探討鱟試劑的特性及其與細(xì)菌內(nèi)毒素的反應(yīng)機(jī)制，以及細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的標(biāo)準(zhǔn)方法與操作要點(diǎn)，旨在為相關(guān)領(lǐng)域的科研與實(shí)踐提供詳盡的指導(dǎo)。1、鱟試劑的特性與作用機(jī)理特性與來源：鱟試劑源自鱟科動(dòng)物（如東方鱟和美洲鱟）的變形細(xì)胞裂解液，通過凍干處理而得。這些海洋生物的血液中僅含有一種血細(xì)胞類型，即變形細(xì)胞，

TLR2在微生物識(shí)別中的角色：革蘭陽性菌、脂蛋白及LPS的受體分析2024/07/01: 早期細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)顯示，TLR2也能識(shí)別LPS，并介導(dǎo)細(xì)胞LPS反應(yīng)。后來研究發(fā)現(xiàn)，去除LPS制劑中的脂蛋白等雜質(zhì)后，純化的LPS對(duì)TLR2則失去激活作用，但對(duì)TLR4仍有激活作用。此外，TLR2基因敲除小鼠對(duì)腸道桿菌LPS的反應(yīng)與野生型小鼠相同?？筎LR2抗體能阻斷肽聚糖和熱滅活金黃色葡萄球菌對(duì)人THP-1細(xì)胞的激活作用，但對(duì)LPS無明顯影響。說明TLR2至少不是LPS的主要識(shí)別受體。但有研究顯示，TLR2能與LPS呈低親和力結(jié)合。此外，來源于Porphyromonasgingivalis和腎臟

TLR4基因：揭示其與LPS直接關(guān)聯(lián)并驗(yàn)證為L(zhǎng)ps基因的產(chǎn)物2024/07/01: 最近有兩個(gè)功能實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了Tlr4基因與Lps的直接關(guān)系。Hoshino等利用基因敲除技術(shù)制備出一種TLR4缺失（TLR4-/-）小鼠，發(fā)現(xiàn)這種小鼠的巨噬細(xì)胞，受LPS刺激時(shí)不能產(chǎn)生TNFα和NO，小鼠的脾臟B細(xì)胞對(duì)LPS也無增殖反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與C3H/HeJ小鼠的細(xì)胞相同。作者進(jìn)一步將C3H/HeJ和C3H/HeN小鼠的編碼TLR4跨膜區(qū)和胞漿區(qū)的基因序列（氨基酸殘基623~835）與編碼小鼠CD14胞外區(qū)的基因序列（氨基酸殘基1～384）融合，然后連接到哺乳動(dòng)物的表達(dá)載體pEF-BOS，

免疫機(jī)制的多樣性與TLR4在LPS識(shí)別中的關(guān)鍵作用2024/07/01: 在哺乳動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)至少存在10種TLRs分子，為何機(jī)體內(nèi)存在多種TLRs？現(xiàn)已研究證實(shí)，這是由于宿主識(shí)別不同微生物的需要而形成的免疫機(jī)制，如在果蠅，Toll家族不同成員參與對(duì)不同病原菌的防御作用：Toll主要介導(dǎo)抗真菌反應(yīng)，18-Wheeler拮抗細(xì)菌感染。哺乳動(dòng)物TLRs家族不同成員對(duì)微生物及其PAMPs的識(shí)別作用也存在相對(duì)的特異性。表7-3顯示TLR家族成員不僅識(shí)別脂質(zhì)和多糖（如LPS、肽聚糖），而且也與細(xì)菌或病毒DNA、RNA和蛋白質(zhì)作用。TLR4是研究最早、作用也最為明確的TLR分子。除

細(xì)菌內(nèi)毒素：革蘭陰性菌的脂多糖復(fù)合體及其生物效應(yīng)2024/06/28: 細(xì)菌內(nèi)毒素，這一術(shù)語特指來自革蘭陰性菌細(xì)胞壁的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)，是微生物死亡或裂解后釋放的一種高生物活性物質(zhì)。LPS不僅是這些細(xì)菌的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)組分，還扮演著引發(fā)宿主免疫反應(yīng)和病理狀態(tài)的重要角色。本文旨在概述LPS的化學(xué)結(jié)構(gòu)、生物活性及其對(duì)宿主的雙重影響。一、LPS的化學(xué)構(gòu)造LPS分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜，由三個(gè)主要部分構(gòu)成：O-特異性鏈、核心多糖及類脂A，這三者共同賦予了LPS特別的生物特性。O-特異性鏈位于LPS的最外層，由幾種不同的單糖單元構(gòu)成，其序列和結(jié)構(gòu)高度多樣，

內(nèi)毒素限值：保障藥品安全的關(guān)鍵計(jì)算2024/06/28: 內(nèi)毒素限值（EndotoxinLimit）是藥品或醫(yī)療產(chǎn)品中可以接受的內(nèi)毒素最大含量，它基于產(chǎn)品的給藥途徑、劑量、患者體重等因素計(jì)算得出，以確保產(chǎn)品的安全性?；?yàn)開發(fā)人員需要了解以下信息才能計(jì)算出內(nèi)毒素限值：內(nèi)毒素限值劑量（K）：這是誘發(fā)特定生物效應(yīng)（如兔子發(fā)燒）所需的內(nèi)毒素活性水平的統(tǒng)計(jì)評(píng)估。對(duì)于不同的給藥途徑（如靜脈注射、肌肉注射、鞘內(nèi)給藥等），K值會(huì)有所不同。藥物劑量（M）：這是藥物按體重（kg）和時(shí)間（h）計(jì)算的劑量。對(duì)于成人，通常使用70kg作為平均體重，但也可以根據(jù)目標(biāo)患者群體（如兒

低內(nèi)毒素回收率（LER）現(xiàn)象：生物制藥安全的潛在威脅與應(yīng)對(duì)策略2024/06/26: 低內(nèi)毒素回收率（LER）現(xiàn)象對(duì)于生物制藥行業(yè)來說是一個(gè)重大的質(zhì)量控制和安全挑戰(zhàn)，因?yàn)樗赡軐?dǎo)致內(nèi)毒素檢測(cè)方法（如鱟試劑試驗(yàn)）在某些藥物配方中低估實(shí)際的內(nèi)毒素含量。這不僅關(guān)乎到產(chǎn)品質(zhì)量控制的準(zhǔn)確性，更是直接關(guān)系到患者的安全，因?yàn)槲幢怀浞謾z測(cè)出的內(nèi)毒素可能引發(fā)發(fā)熱反應(yīng)或其他免疫介導(dǎo)的副作用，嚴(yán)重時(shí)可危及生命。LER描述的是在某些特定藥物制劑或測(cè)試條件下，使用鱟試劑（LAL）檢測(cè)內(nèi)毒素活性時(shí)，觀察到的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素（如CSE）回收率低于預(yù)期的現(xiàn)象。這可能是由于藥物制劑中的某些成分或配方與LAL試劑或內(nèi)毒素

LBP介導(dǎo)的脂多糖免疫激活機(jī)制及其在天然免疫防御中的多重作用2024/06/25: 脂多糖(LPS)如何通過脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)的介導(dǎo)，在宿主體內(nèi)被識(shí)別、處理并激活免疫應(yīng)答的過程，以及LBP在這一過程中的關(guān)鍵作用？1.LPS聚合物與LBP的作用機(jī)制：LPS作為革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分，其聚合狀態(tài)不易被宿主細(xì)胞直接識(shí)別。LBP因其對(duì)LPS聚合物的高親和力，能夠促使LPS由聚合狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)閱误w形式，增強(qiáng)其可識(shí)別性。LBP還扮演了脂質(zhì)轉(zhuǎn)移者的角色，幫助LPS單體與宿主體內(nèi)的其他模式識(shí)別分子（如HDL、sCD14或mCD14）結(jié)合，從而促進(jìn)免疫系統(tǒng)的有效識(shí)別和響應(yīng)。2.LBP對(duì)免

LBP：LPS信號(hào)的“放大器”及其在天然免疫中的多重作用2024/06/25: LPS（lipopolysaccharide，脂多糖）從革蘭陰性細(xì)菌釋放出來后由于其兩性結(jié)構(gòu)常以聚合物形式存在。宿主細(xì)胞對(duì)聚合物不易識(shí)別。研究表明，宿主體內(nèi)LBP（lipopolysaccharide-bindingprotein，脂多糖結(jié)合蛋白）與LPS聚合物具有高親和力，LPS進(jìn)入體內(nèi)后，首先與之結(jié)合，并在LBP的作用下可使LPS聚合物轉(zhuǎn)換為單體（圖7-2），同時(shí)，LBP具有脂質(zhì)轉(zhuǎn)移作用，進(jìn)而將LPS單體轉(zhuǎn)遞給血液內(nèi)或細(xì)胞膜上其他模式識(shí)別分子，如高密度脂蛋白（HDL）、sCD14或mCD14

脂多糖結(jié)合蛋白（LBP）：免疫防御中的關(guān)鍵角色與臨床應(yīng)用前景2024/06/24: 脂多糖結(jié)合蛋白（LBP）是一個(gè)在免疫和炎癥反應(yīng)中扮演關(guān)鍵角色的分子。以下是對(duì)LBP及其相關(guān)蛋白的詳細(xì)闡述：一、結(jié)構(gòu)和功能：LBP是一種可溶性糖蛋白，主要存在于體液中，如血漿。它通過與脂多糖（LPS）結(jié)合，促進(jìn)LPS與血漿或細(xì)胞膜上的其他模式識(shí)別分子（如HDL、sCD4和mCD14）相互作用。LBP的分子結(jié)構(gòu)顯示，其N-末端與LPS的脂質(zhì)A特異性結(jié)合，而C-末端與LBP轉(zhuǎn)移LPS給CD14相關(guān)。LBP的LPS結(jié)合區(qū)位于分子N-末端（91～100殘基間），包含賴氨酸和精氨酸殘基。二、進(jìn)化關(guān)系：LBP

脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)在免疫識(shí)別與炎癥反應(yīng)中的關(guān)鍵作用及功能機(jī)制2024/06/24: 脂多糖結(jié)合蛋白（LBP）在免疫系統(tǒng)識(shí)別和響應(yīng)細(xì)菌感染，特別是革蘭氏陰性菌感染過程中扮演著關(guān)鍵角色。這些細(xì)菌的細(xì)胞壁含有脂多糖（LPS），這是一種強(qiáng)效的免疫刺激物質(zhì)，能引發(fā)強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)。LBP的主要功能總結(jié)如下：1.LPS識(shí)別與結(jié)合：LBP能夠特異性識(shí)別并結(jié)合LPS的脂質(zhì)A部分，這是LPS毒性最-強(qiáng)的部分。這種結(jié)合能力對(duì)于啟動(dòng)后續(xù)的免疫應(yīng)答至關(guān)重要。2.增強(qiáng)LPS的生物活性：通過促進(jìn)LPS與血液中的可溶性CD14（sCD14）或者細(xì)胞膜上的膜結(jié)合型CD14（mCD14）結(jié)合，LBP實(shí)際上增強(qiáng)了免

脂多糖結(jié)合蛋白（LBP）的結(jié)構(gòu)、功能及其在免疫反應(yīng)中的作用2024/06/24: 脂多糖結(jié)合蛋白（lipopolysaccharidebindingprotein，LBP）是1986年由Ulevitch實(shí)驗(yàn)室首-次發(fā)現(xiàn)的。與SR、mCD14不同，它僅存在于體液內(nèi)，是一種可溶性模式識(shí)別分子?，F(xiàn)已研究表明，LBP不僅本身結(jié)合LPS（lipopolysaccharide，脂多糖），更重要的是，促進(jìn)LPS與血漿或體液內(nèi)（如HDL和sCD4）以及細(xì)胞膜上（mCD14）的其他模式識(shí)別分子作用，從而影響機(jī)體對(duì)LPS的敏感性，在機(jī)體防御和LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞反應(yīng)中具有重要作用。LBP是一種存在于

PKF細(xì)菌內(nèi)毒素定量檢測(cè)系統(tǒng)：高效、精準(zhǔn)，滿足高標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)需求2024/06/21: PyrosKinetix®Flex細(xì)菌內(nèi)毒素定量檢測(cè)系統(tǒng)是一款專為滿足高標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)需求而設(shè)計(jì)的先進(jìn)設(shè)備。該系統(tǒng)結(jié)合了硬件和軟件的優(yōu)勢(shì)，為用戶提供了多重保障和高效解決方案。（一）多重檢測(cè)方法與波長(zhǎng)：該系統(tǒng)支持重組法、動(dòng)態(tài)顯色法和動(dòng)態(tài)濁度法等多種細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法，具有廣泛的適用性。使用雙重檢測(cè)波長(zhǎng)405nm和660nm，確保了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。（二）審計(jì)追蹤與數(shù)據(jù)完整性：Pyros®eXpress軟件嚴(yán)格遵循聯(lián)邦法規(guī)21CFRPart11標(biāo)準(zhǔn)，確保數(shù)據(jù)的安全性和可追溯性。微軟SQL

細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）：特性、應(yīng)用與使用指南2024/06/21: （一）細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）概述定義：細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）是從大腸桿菌O113:H10純化提取的細(xì)菌內(nèi)毒素，與美國(guó)藥典和歐洲藥典參考標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素（RSE）使用的菌株相同。用途：細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）廣泛用于各類細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，包括鱟試劑靈敏度復(fù)核、干擾實(shí)驗(yàn)及設(shè)置陽性對(duì)照等。（二）產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)經(jīng)濟(jì)性：CSE是RSE的經(jīng)濟(jì)替代方案，適用于各類細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。去熱原研究：CSE對(duì)去熱原研究特別有用，可用于評(píng)估產(chǎn)品的熱原性和安全性。批次特異性：每個(gè)CSE裂解物批次都配備有特定

細(xì)菌內(nèi)毒素定量光度測(cè)定法操作規(guī)程與有效性評(píng)估指南2024/06/21: 一、概述細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（定量檢測(cè)）之光度測(cè)定法是一種利用光譜分析技術(shù)來測(cè)定樣品中細(xì)菌內(nèi)毒素含量的方法。此方法依賴于鱟試劑（一種從鱟的血液中提取的生物試劑，對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素高度敏感）與內(nèi)毒素反應(yīng)產(chǎn)生的濁度變化，通過比色法量化內(nèi)毒素水平。二、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備材料準(zhǔn)備：用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素配成溶液，并制成至少3個(gè)不同濃度的稀釋液，稀釋度不得大于10，濃度不得低于所用鱟試劑的標(biāo)示檢測(cè)限。試驗(yàn)設(shè)置：每一稀釋步驟的混勻時(shí)間同凝膠法，每一濃度至少做3支平行管。同時(shí)設(shè)置2支陰性對(duì)照。數(shù)據(jù)分析：當(dāng)陰性對(duì)照在設(shè)定的時(shí)間內(nèi)不發(fā)生

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