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DNA提取試劑盒有哪幾種？2024/08/05

DNA提取試劑盒是根據(jù)氯/化*法構(gòu)建的，能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯化/*具有能將含有纖維素等的細胞壁中的羥基芐基化，從而破壞細胞壁的特性。本制品利用了氯化*的這一特性，將植物樣品凍結(jié)融解后，再使用PipetTip將植物樣品在Microtube壁上數(shù)次按壓即可破壞細胞壁。本法與傳統(tǒng)方法相比，省去了液氮研磨等煩瑣步驟，有利于一次性處理大量樣品。而且，本制品經(jīng)過了改良，熱處理時間只需15分鐘，使用本制品從實驗開始至水相回收只需30分鐘時間。得到的基因組DNA可以進行PCR擴增及限制酶處理

針式過濾器的優(yōu)勢2024/07/30

優(yōu)勢更大的表面積：針頭過濾器通常設(shè)計有較大的表面積，這有助于增加流速和過濾量。更大的表面積不僅提升了過濾效率，還使得過濾過程變得更加容易，因為它降低了排空注射器所需的壓力。高外殼壓力：部分針頭過濾器的最大外殼壓力可達10.5bar，這意味著可以在更高的壓力下進行過濾，從而進一步提高流速。操作簡便結(jié)構(gòu)緊湊：針頭過濾器結(jié)構(gòu)緊湊，易于安裝和拆卸，使用起來非常方便。這種設(shè)計特別適用于實驗室環(huán)境，方便研究人員快速完成樣品過濾。顏色代碼：許多針頭過濾器的外殼上配有顏色外圈條，用于清楚地標明內(nèi)部濾膜的類型，便

包埋劑的操作步驟有哪些？2024/07/24

操作步驟1、冰凍制片組織常規(guī)取材。2、取材后的組織材塊用干擦布或吸水紙充分吸干表面水分。3、在冷凍切片機里預冷的組織托上滴加冷凍切片組織包埋劑。4、待包埋劑底部變白后放上組織材塊。5、迅速放上冷凍錘(低于-25℃)，待組織與包埋劑冷凍凝固后取下冷凍錘。6、將組織托夾入切片夾頭，進行切片。7、切片完成后可將組織托置于室溫下3-5分鐘解凍后變軟，用水將包埋劑沖洗干凈。8、將組織放入包埋盒，浸入中性緩沖福爾馬林固定液中進行組織固定。結(jié)果1、包埋效果良好:包埋劑均勻圍繞組織，冷凍后包埋劑和組織變白，硬度

如何選擇細胞培養(yǎng)板2024/07/17

培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384孔等。平底和圓底（U型和V型）培養(yǎng)板區(qū)別和選擇不同形狀的培養(yǎng)板有不同用途。培養(yǎng)細胞，通常是選用平底的，這樣便于鏡下觀測、有明確的底面積、細胞培養(yǎng)液面高度相對一致。因此做MTT等實驗時，無論是貼壁和懸浮細胞，一般選用平底板。測吸光值一定要使用平底的培養(yǎng)板。要特別注意材質(zhì)，標示“TissueCulture(TC)Treated”是養(yǎng)細胞用的。U型或V型板，一般在某些特殊要求時才使用。如在免疫學方面，當做兩種不同淋巴細胞混合培養(yǎng)時，需要二者相互接觸刺激，

免疫熒光染色步驟和原理2024/07/15

免疫熒光染色是一種常用的細胞和組織學研究技術(shù)，它利用特異性抗體與標記熒光染料結(jié)合，來檢測和定位細胞中的特定蛋白質(zhì)或其他分子。以下是免疫熒光染色的步驟和原理：步驟：細胞或組織樣品的固定：通常使用甲醛或乙醛來固定細胞或組織，以保持其形態(tài)和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的完整性?？贵w的孵育：將特異性抗體加入到樣品中，與目標蛋白質(zhì)結(jié)合。洗滌：用緩沖液洗去未結(jié)合的抗體。二抗的孵育：加入熒光標記的二抗，與原抗體結(jié)合。洗滌：用緩沖液洗去未結(jié)合的二抗。熒光顯微鏡觀察：使用熒光顯微鏡觀察樣品，熒光信號可顯示目標蛋白質(zhì)的位置和分布。原

養(yǎng)好的細胞如何凍存？2024/07/11

在不附加任何保護劑下直接凍存細胞時，細胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護劑，可使冰點降低。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細胞。貯存在﹣130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。細胞凍存時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，待復蘇時重新進入生長分裂周期。實驗開始前，將凍存管、15毫升離心管、移液管、移液槍、槍頭等放入無菌超凈工作臺，以紫外線照射30分鐘。采用通風機通風3分鐘。以

牛血清白蛋白的主要作用2024/07/09

牛血清白蛋白，英文名稱是BovineSerumAlbumin（BSA），也可稱為CohnFractionV，即第五組分。牛血清白蛋白作為牛血清中的一種白蛋白，包含583個氨基酸殘基，分子量為66.43kDa，等電點為4.7。牛血清白蛋白有著廣泛的實驗室應(yīng)用，除在細胞培養(yǎng)中作為營養(yǎng)物添加外，牛血清白蛋白主要還有以下用途：1.在酶切反應(yīng)體系中作穩(wěn)定劑，對酶起保護作用，并防止其分解和非特異性吸附。2.維持滲透壓、提供pH緩沖、起載體作用。3.作為蛋白定量檢測的標準品使用。4.常規(guī)免疫實驗中作封閉試劑使

木聚糖酶活性測定方法分享2024/07/03

木聚糖是一種存在于植物細胞壁中的多糖類物質(zhì)，是植物半纖維素的主要成分。木聚糖酶分布廣泛，可以從動物、植物及微生物體內(nèi)獲得。檢測原理：木聚糖酶可以將底物木聚糖降解為寡糖和單糖，具有還原性的寡糖和單糖在沸水浴的條件下，能夠和DNS試劑發(fā)生顯色反應(yīng)。通過反應(yīng)溶液的顏色的變化，來確定還原糖的含量。因為還原糖的生成量和反應(yīng)液的木聚糖活力是成正比的，通過分光光度法可以測定，計算出樣品中的木聚糖酶活力。檢測所用的試劑：乙酸溶液、乙酸鈉溶液、氫氧化鈉溶液、乙酸-乙酸鈉緩沖溶液、木糖溶液、木聚糖溶液、DNS試劑。

N2添加劑的使用方法2024/07/01

N2添加劑基于Bottenstein'sN-1配方，是一種化學成分確定的無血清添加劑。推薦用于支持源自外周神經(jīng)系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)和原代神經(jīng)母細胞瘤及有絲分裂后神元經(jīng)的生產(chǎn)和表達。N2添加劑作為100X濃縮液提供，可與補充生長因子（如bFGF和EGF）后的Neurobasal培養(yǎng)基配合使用。它也可以與DMEM配合使用。使用方法：N2細胞培養(yǎng)添加劑是100X濃度。用前請用基礎(chǔ)培養(yǎng)基（如Neurobasal）稀釋到1X。如準備100ml培養(yǎng)基：將1ml的N2細胞培養(yǎng)添加劑（100X）加入到99ml的基

細胞培養(yǎng)板和酶標板的區(qū)別2024/06/21

什么是酶標板，它是一種配合在酶標儀上，用來做酶聯(lián)免疫實驗的器材。雖然它看上去只是一塊普通的有孔的塑料板，但是在酶免疫測定中卻是一個的部分。酶聯(lián)免疫吸附實驗，簡稱ELISA，是酶免疫測定技術(shù)中應(yīng)用的技術(shù)。其基本方法是將已知的抗原或者抗體吸附在固相載體表面，并保持其免疫活性。然后抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形

馬血清在細胞生物學中的作用2024/06/14

馬血清是采用健康馬血液為原料，經(jīng)無菌采集、分離、微孔過濾后而成，性狀為澄清液體，無噬菌體、低內(nèi)毒素，無溶血無異物無細菌真菌支原體霉形體衣原體等，促細胞生長繁殖效果好，在細胞實驗中是常用的試劑。以下是馬血清在細胞生物學中的作用：1、馬血清可用于細胞培養(yǎng)或誘導樹突狀細胞，且細胞生長、增殖狀況良好。有研究人員分別用胎牛血清和馬血清培養(yǎng)馬單核細胞來產(chǎn)生樹突狀細胞（eqMoDC），結(jié)果發(fā)現(xiàn)，馬血清馬血清生成的eqMoDC與FBS生成的eqMoDC沒有區(qū)別。然而，與馬血清補充培養(yǎng)基一起孵育的eqMoDC在從

干型透析袋的處理和儲存2024/06/11

透析袋的處理：1、根據(jù)需要，把透析管剪截成適當長度(10-20cm)。2、在大體積的2%碳酸氫納和1mmol/LEDTA(pH8.0)中將透析管煮沸10分鐘。3、用蒸餾水清洗。4、于EDTA(1mmol/L，pH8.0)中煮沸10分鐘。5、或?qū)⑼肝龉苤檬⒂姓麴s水的燒杯內(nèi)，高壓蒸汽滅菌10分鐘。6、冷卻后，存放于4°C。透析管必須確保始終浸于溶液中。7、從此時起取用透析管時總須戴手套。8、用前將透析管用蒸餾水清洗干凈后即可使用。儲存條件1、透析袋可存放于10-29度。2、每次使用后將余下的膜放回袋

冰凍切片免疫熒光實驗2024/05/28

1、冰凍切片固定冰凍切片37℃烘烤10至20分鐘，控干水分，置于4%多聚甲醛固定30min。于PBS緩沖液中晃動洗滌3次，每次5分鐘。2、抗原修復將切片浸沒在升滿EDTA抗原修復緩沖液（PH8.0）的修復盆中，置于微波爐內(nèi)進行抗原修復，修復條件：中火8min至沸——?；?min保溫——中低火7min（整個過程需防止修復液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后，將切片置于PBS緩沖液中。然后在搖床上，晃動洗滌3次，每次5min。3、畫圈血清封閉切片稍甩干后，用組化筆在組織周圍畫圈，滴加組織自發(fā)熒光淬滅劑A

脂質(zhì)體的制備方法2024/05/24

脂質(zhì)配方的性質(zhì)取決于具體成分（陽離子、陰離子和中性脂質(zhì)）。但是，同一種制備方法適用于所有成分的脂質(zhì)囊泡。制備流程的一般要素包括制備用于水合的脂質(zhì)、攪拌水合以及減小粒徑，從而獲得均勻分布的囊泡。今天介紹制備用于水合的脂質(zhì)：當用混合脂質(zhì)成分制備脂質(zhì)體時，必須先溶解脂質(zhì)并混合于有機溶劑中，以確保獲得均勻的脂質(zhì)混合物。通常，該過程使用氯仿或氯仿:甲醇混合液完成。目的在于使脂質(zhì)混合，獲得澄清的脂質(zhì)溶液。一般情況下，脂質(zhì)溶液的制備濃度為10-20mg脂質(zhì)/ml有機溶劑，但是，在脂質(zhì)溶解度和混合程度可接受的情

免疫共沉淀實驗原理2024/05/17

(1)免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）：利用抗原抗體特異性反應(yīng)，對某個特定蛋白純化富集的方法，主要過程包括捕獲和固定。(2)免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）：CoIP是在IP實驗的基礎(chǔ)上進行的擴展，主要用于蛋白之間的互作研究，常被用于鑒定特定蛋白復合物的中已知或未知的蛋白組分。其原理是基于抗體與抗原（靶蛋白）之間的特異性結(jié)合，此時如果樣品溶液中存在能與靶蛋白相互作用的目的蛋白，會一同被拉下來，隨后利用SDS-PAGE，WesternBl

ACK紅細胞裂解液的原理及使用2024/05/14

原理：氯化銨是紅細胞裂解液的主要效應(yīng)物質(zhì)，氨根離子不能通過細胞膜，而其他離子可以通過，造成細胞內(nèi)外的離子濃度差異，形成了滲透壓差，外部的水分會擴散至細胞內(nèi)，使紅細胞膨脹，達到裂解的效果。使用說明：組織細胞樣品：1.新鮮組織經(jīng)胰酶或膠原酶等消化分散成單個細胞懸液，離心棄去上清液；2.從4℃冰箱中取出ELS裂解液，按1:3-5的比例向細胞沉淀中加入ELS裂解液（1ml細胞壓積加入3-5ml裂解液），輕輕吹打混勻；3.800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液；4.收集沉淀部分，加入H

透析袋的使用技巧2024/05/08

1）除鹽透析時將高鹽的樣本加入透析袋中，夾緊，用你選擇的保存液進行透析，一般在2-8度透析過夜，中間要更換一到兩次透析液，另外透析液體積盡量大些。先把透析液放進容器中（容器的直徑小于透析袋長度），再將夾好的透析袋豎直放進去，這樣透析袋與透析液的接觸面積是最大的，幾乎整個透析袋都與透析液接觸，溶液的置換面積最大，置換速度最快。如果夾子很穩(wěn)，那就夾好，先把透析液放進容器中（容器的直徑小于透析袋長度），再將夾好的透析袋豎直放進去，這樣透析袋與透析液的接觸面積是最大的，幾乎整個透析袋都與透析液接觸，溶液

膠原酶I型的配置方法2024/05/06

膠原酶儲存液的配制：向每管100mg的膠原酶中加入100µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS(Hank’s平衡鹽溶液,含Ca2+、Mg2+)，輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，制備成1g/ml(即1000×)的儲存液。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22μm的濾膜過濾除菌，分裝成小份量，然后于-20℃避光凍存。使用前于冰上解凍，避免反復凍融。膠原酶工作液的配制：根據(jù)需要的濃度，將膠原酶I型溶解在適當?shù)娜軇┲校鏒MEM或PBS。對于I型膠原酶，一般使用濃度為0.075%至0.1%。如果使用DMEM作為溶劑，可以

免疫熒光實驗原理2024/04/30

免疫熒光實驗的主要步驟包括細胞片制備、固定及通透（或稱為透化）、封閉、抗體孵育及熒光檢測等。細胞片制備（通俗的說法是細胞爬片）是免疫熒光實驗的第一步，細胞片的質(zhì)量對實驗的成敗至關(guān)重要，原因很簡單，如果發(fā)生細胞掉片，一切都無從談起。這一步關(guān)鍵的是玻片（SlidesorCoverslips）的處理以及細胞的活力，有人根據(jù)成功經(jīng)驗總結(jié)出許多有益的細節(jié)或小竅門，非常值得借鑒。固定和通透步驟最重要的是根據(jù)所研究抗原的性質(zhì)選擇適當?shù)墓潭ǚ椒?，合適的固定劑和固定程序?qū)τ讷@得好的實驗結(jié)果是非常重要的。免疫熒光中

細胞凋亡檢測實驗原理2024/04/25

細胞死亡根據(jù)其性質(zhì)、起源及生物學意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個體和生存中起著非常重要的作用。它是細胞在一定生理條件下一系列順序發(fā)生事件的組合，是細胞遵循一定規(guī)律自己結(jié)束生命的自主控制過程。細胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學和生物化學特征。在形態(tài)上可見凋亡細胞與周圍細胞脫離接觸，細胞變園，細胞膜向內(nèi)皺縮、胞漿濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀或新月狀分布、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細胞膜進一步融合將細胞分成多個完整包裹的凋亡小體，凋亡小體最后被吞噬細胞吞噬消化。在凋亡過程中細胞內(nèi)容物