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實(shí)戰(zhàn)分享|小鼠淋巴細(xì)胞的提取和分選之經(jīng)驗(yàn)小結(jié)2023/08/21: 脾臟是機(jī)體重要的免疫器官之一，含有大量的淋巴細(xì)胞，占全身淋巴組織總量的25%，在小鼠中，由于小鼠血液量少，從外周血液中分離大量淋巴細(xì)胞較為困難，故經(jīng)常需要從其脾臟中獲取大量的淋巴細(xì)胞。不久前，來(lái)自華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院的李老師在Biomaterials雜志上發(fā)布的文章中就用到了上述實(shí)驗(yàn)。以下為是李老師分享的一些相關(guān)經(jīng)驗(yàn)。操作步驟1材料準(zhǔn)備選取具有正常免疫功能的成年小鼠（所需的小鼠數(shù)量根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要決定，通常一只小鼠脾臟可提取的淋巴細(xì)胞數(shù)量為2~6×107），快速斷頸處死(避免脾梗死)后

原生細(xì)胞的合成之經(jīng)驗(yàn)分享2023/07/28: 近年來(lái)，合成生物學(xué)的研究如火如荼地開(kāi)展，其目的在于構(gòu)建人工分子生物系統(tǒng)并執(zhí)行定制的功能。來(lái)自湖南大學(xué)的研究團(tuán)隊(duì)使用DNA分子反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)封裝在原生細(xì)胞中，以此構(gòu)建了一種可以持續(xù)處理生物環(huán)境中波動(dòng)生物信息的分子CPU（mCPU），該研究成果發(fā)表于國(guó)際期刊ScienceAdvances（IF=14.96）。原生細(xì)胞（protocell）的合成是該領(lǐng)域的一大挑戰(zhàn)，下文為此研究團(tuán)隊(duì)中的王老師分享的一些相關(guān)經(jīng)驗(yàn)。1合成原理“原生細(xì)胞的特點(diǎn)是含有微米級(jí)大小的空腔和外部的雙層磷脂膜。本論文采用反相微乳液方法制備人

實(shí)驗(yàn)常用人肝癌細(xì)胞株(HepG2/Hep3B,HuH-7,MHCC97H,PLC/PRF/5)怎么選？2023/07/03: 肝細(xì)胞癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）是近年來(lái)發(fā)病率急劇上升的惡性腫瘤之一。肝癌細(xì)胞系廣泛應(yīng)用于各類肝癌的研究。肝癌細(xì)胞系的基因組與健康人細(xì)胞系的基因組不同。常見(jiàn)的人肝癌細(xì)胞系有PLC、Huh7、Huh7.5、Hep3B、HepG2、SMMC-7721、MHCC97-H、MHCC9-L等，每一種細(xì)胞系都有自己的特點(diǎn)，由于它們具有與原代肝癌細(xì)胞相似的生物學(xué)特性，無(wú)生物學(xué)改變、特性穩(wěn)定、無(wú)限制傳代，為肝癌研究提供了理想的體外模型，成為除動(dòng)物實(shí)驗(yàn)外肝癌疾病研究的又一熱門替代

原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法及注意事項(xiàng)2023/06/29: 原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法及注意事項(xiàng)原代細(xì)胞培養(yǎng)，也稱初代培養(yǎng)，是將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖。原代培養(yǎng)的基本過(guò)程包括取材、培養(yǎng)材料的制備、接種及培養(yǎng)等步驟，原代培養(yǎng)的方法很多，基本和常用的是組織塊培養(yǎng)法和分離細(xì)胞法。1、組織塊培養(yǎng)法基本操作過(guò)程1)用培養(yǎng)液濕潤(rùn)所取組織材料，并用鋒利的眼科剪將附在其上的脂肪和結(jié)締組織去除干凈。再用平衡液(PBS)或Hanks液漂洗;用鋒利的

6、24、96孔板接種和換液?jiǎn)栴}2023/05/31: 6、24、96孔板接種和換液?jiǎn)栴}細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536孔等，孔的底部可以選擇平的、圓的，或錐形的，這取決于細(xì)胞類型和下游應(yīng)用。對(duì)于傳統(tǒng)的2D細(xì)胞培養(yǎng)(如HeLa或MDCK細(xì)胞)，特別是需要對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行成像或分光光度測(cè)定，通常選平底(F-bottom)。對(duì)于不存在接觸抑制的細(xì)胞，弧形底(C-bottom)也不錯(cuò)。圓底(U-bottom)適合懸浮培養(yǎng)(如球體細(xì)胞培養(yǎng))，因?yàn)閳A的表面讓細(xì)胞難以附著和生長(zhǎng)。而錐形底很少用于細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，但在細(xì)胞沉淀時(shí)可能有用

細(xì)胞培養(yǎng)板如何選擇2023/05/31: 細(xì)胞培養(yǎng)板作為培養(yǎng)細(xì)胞的一種常用和重要的工具，依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型)；培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536孔等；根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細(xì)胞培養(yǎng)板，形狀、規(guī)格、用途多樣，那么如何選擇適合的培養(yǎng)板?培養(yǎng)板的選擇1.細(xì)胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型)不同形狀的培養(yǎng)板有不同用途。培養(yǎng)細(xì)胞，通常是選用平底的，這樣便于鏡下觀測(cè)、有明確的底面積、細(xì)胞培養(yǎng)液面高度相對(duì)一致。因此做MTT等實(shí)驗(yàn)時(shí)，無(wú)論是貼壁和懸浮細(xì)胞，一般選用平

貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的凍存操作步驟及注意事項(xiàng)2023/04/24: 當(dāng)我們需要運(yùn)輸或者長(zhǎng)期不用某種細(xì)胞時(shí)，通常會(huì)使用凍存的方法來(lái)保存。若未做好細(xì)胞凍存，還會(huì)直接影響后續(xù)細(xì)胞復(fù)蘇狀態(tài)，所以細(xì)胞凍存的重要性不容小覷。本期信裕細(xì)胞學(xué)堂將帶來(lái)貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的凍存操作步驟及注意事項(xiàng)，以便大家查漏補(bǔ)缺。在進(jìn)行凍存操作前，可預(yù)先配置好凍存液；若使用無(wú)血清非程序凍存液，則無(wú)需自己配制，也無(wú)需使用程序降溫盒。01貼壁細(xì)胞凍存操作◆將待操作的細(xì)胞去上清，用PBS潤(rùn)洗；◆去上清，加入胰酶消化，消化完成后加入completely培養(yǎng)基終止消化，并吹打均勻制備成細(xì)胞懸液；◆1200r

細(xì)胞因子的分類和選擇標(biāo)準(zhǔn)2023/04/17: 2017年是CAR-T細(xì)胞療法的元年，使得越來(lái)越多的人開(kāi)始關(guān)注細(xì)胞治療領(lǐng)域，包括干細(xì)胞治療、TCR-T療法等等。幾乎所有的細(xì)胞治療都有一個(gè)共同點(diǎn)，即都需要使用細(xì)胞因子來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞增殖或分化。細(xì)胞因子雖然在細(xì)胞中含量很少，但是種類豐富，并且是作用廣泛，那么，到底什么是細(xì)胞因子?細(xì)胞因子的作用是什么?怎么選擇合適的細(xì)胞因子?我們一起來(lái)看看。什么是細(xì)胞因子?為了維持機(jī)體的生理平衡，抵抗病原微生物的侵襲，防止腫瘤發(fā)生，機(jī)體的許多細(xì)胞，特別是免疫細(xì)胞合成和分泌許多種微量的小分子量可溶性蛋白與多肽類因子，這樣

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理及常用培養(yǎng)方式2023/04/10: 首先，我們來(lái)了解下動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)什么是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，就是從動(dòng)物有機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理是細(xì)胞增殖。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞（使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶），放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。細(xì)胞培養(yǎng)是指細(xì)胞在體外條件下的生長(zhǎng)，動(dòng)物細(xì)胞在單獨(dú)細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中不再形成個(gè)體。體外細(xì)胞培養(yǎng)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，例如，需要糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、促生

趙曉菁：警惕油煙致癌，做頓飯等于抽兩包煙2022/04/26: 趙曉菁：警惕油煙致癌，做頓飯等于抽兩包煙目前，中國(guó)肺癌發(fā)病率接近發(fā)達(dá)國(guó)家水平，肺癌已成為惡性腫瘤死亡*原因，其中男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的*位，女性發(fā)病率和死亡率均占第二位。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)肺癌發(fā)病率每年增長(zhǎng)26.9%，過(guò)去30年間，肺癌死亡率上升了465%，預(yù)計(jì)到2020年，我國(guó)肺癌病人將達(dá)到80萬(wàn)，死亡70萬(wàn)。從事胸外科專業(yè)近二十年，上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院胸外科主任趙曉菁擅長(zhǎng)肺、縱隔、氣管等疑難疾病的診斷和手術(shù)治療，尤其擅長(zhǎng)運(yùn)用胸腔鏡和縱隔鏡等微創(chuàng)方式診治胸疾病，他所做的微

活久見(jiàn)！銅死亡，登上Science2022/04/12: 眾所周zhi，多細(xì)胞生物在發(fā)育過(guò)程中，存在著多種預(yù)定的、受到精確控制的細(xì)胞程序性死亡，例如細(xì)胞凋亡（Apoptosis）、程序性壞死（Necroptosis）、細(xì)胞焦亡（Pyroptosis），以及鐵死亡（Ferroptosis）等。就在近日，2022年3月17日，哈佛-MIT博德研究所的研究人員在國(guó)際頂尖學(xué)術(shù)期刊Science上發(fā)表了題為：CopperinducescelldeathbytargetinglipoylatedTCAcycleproteins的研究論文。ToddGolub團(tuán)隊(duì)從2

【技術(shù)分享】細(xì)胞活性檢測(cè)方法大全2022/03/09: 細(xì)胞的活性鑒定在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)上具有很重要的意義。它是體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中常用的一個(gè)檢測(cè)指標(biāo)。不同的細(xì)胞活性鑒定方法有各自不同具體的反應(yīng)機(jī)理，但無(wú)論采用哪種方法，都利用了死細(xì)胞和活細(xì)胞在生理機(jī)能和性質(zhì)上的差異。常用的方法有直接染色法，克隆形成試驗(yàn)，比色法等。下面我們就簡(jiǎn)單的了解一下常用的細(xì)胞活性檢測(cè)方法的原理，特點(diǎn)，以及各自的優(yōu)缺點(diǎn)。一、染色計(jì)數(shù)法化學(xué)染色法染色計(jì)數(shù)法是細(xì)胞培養(yǎng)中檢查細(xì)胞死活zui常用的方法,直接利用死細(xì)胞和活細(xì)胞對(duì)染料的不同親和力,檢查細(xì)胞活性,能在光學(xué)顯微鏡下觀察到染色結(jié)果.可分

上手蛋白定量實(shí)驗(yàn)，我們有招兒2021/12/24: 蛋白定量是生物學(xué)研究中不可能或缺的一個(gè)步驟，根據(jù)其目的可分為蛋白質(zhì)的“總定量”和特定蛋白的“個(gè)別定量”。在蛋白質(zhì)的提取、純化和分析過(guò)程中，蛋白質(zhì)的定量隨處可見(jiàn)。比如在裂解細(xì)胞之后，應(yīng)對(duì)各個(gè)樣品中的蛋白進(jìn)行定量，確保下游實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)平行度；在電泳之前進(jìn)行定量，保證上樣量一致，這樣目的條帶含量的變化才有說(shuō)服力。蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)復(fù)雜、功能各一、分子量存在巨大差異，目前還沒(méi)有一個(gè)理想且通用的蛋白定分析方法。如今最常見(jiàn)的方法主要有以下幾種：BCA法測(cè)定bicinchoninincacid01原理BCA(bici

如何選擇合適的蛋白酶抑制劑2021/11/29: 即使蛋白酶對(duì)細(xì)胞功能很重要，但你也有不想見(jiàn)到它們的時(shí)候。比如，在純化蛋白質(zhì)的時(shí)候，你可不想讓蛋白酶大肆吞噬你的目標(biāo)蛋白吧，特別是低豐度蛋白。如今，市場(chǎng)上有多種蛋白酶抑制劑可供選擇，幫助你在必要時(shí)停止蛋白酶的活性。為了對(duì)付細(xì)胞和組織樣品中存在的各種蛋白酶，抑制劑的選擇也在不斷增加。目前，主要有四種類型的蛋白酶，根據(jù)他們活性位點(diǎn)中的氨基酸命名：絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶。蛋白酶抑制劑可以特異針對(duì)一種蛋白酶，也可以是廣譜的。人們通常根據(jù)抑制劑作用的蛋白酶類型，以及它們可逆

不會(huì)感受態(tài)細(xì)胞制備的看過(guò)來(lái)啦2021/11/29: 1.什么是感受態(tài)細(xì)胞（1）感受態(tài)細(xì)胞其實(shí)是一種暫時(shí)性改變一下細(xì)胞膜的通透性，以利于外源DNA（如質(zhì)粒）進(jìn)入細(xì)胞。這樣的活細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞。（2）主要原理其實(shí)就是通過(guò)特殊的方法處理使細(xì)胞，使細(xì)胞膜的通透性變大，直觀的說(shuō)，使得細(xì)胞膜表面出現(xiàn)一些孔洞，便于外源DNA（如重組質(zhì)粒或者運(yùn)載體）進(jìn)入感受態(tài)的細(xì)胞。2.感受態(tài)細(xì)胞制備原理在基因克隆技術(shù)中，轉(zhuǎn)化特指將質(zhì)粒DNA或以其為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入細(xì)菌體內(nèi)，使之獲得新的遺傳特性的一種方法。它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領(lǐng)域的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一

技術(shù)指南 | 瓊脂糖凝膠電泳詳解2021/10/26: 01電泳的發(fā)展簡(jiǎn)史1809國(guó)外物理學(xué)家Рейсе發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象1909將膠體離子在電場(chǎng)中的移動(dòng)稱為電泳1937創(chuàng)造了Tiselius電泳儀，建立了研究蛋白質(zhì)的移動(dòng)界面電泳方法，并證明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白組成的。1948Wieland和Fischer重新發(fā)展了以濾紙作為支持介質(zhì)的電泳方法，對(duì)氨基酸的分離進(jìn)行過(guò)研究。1950Durrum用紙電泳進(jìn)行了各種蛋白質(zhì)的分離以后，開(kāi)創(chuàng)了利用各種固體物質(zhì)(如各種濾紙、醋酸纖維素薄膜、瓊脂凝膠、淀粉凝膠等)作為支持介質(zhì)的區(qū)帶電泳方法。1959Raym

知無(wú)不“研“ | ChIP實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)攻略2021/10/14: 對(duì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)室新手來(lái)講，提到ChIP，您可能沒(méi)聽(tīng)過(guò)這個(gè)詞，他的全稱叫染色質(zhì)免疫沉淀(ChromatinImmunoprecipitation),今天就帶大家來(lái)學(xué)習(xí)一下CHIP實(shí)驗(yàn)的相關(guān)知識(shí)，咱們主要從CHIP的定義、原理、步驟以及應(yīng)用以下幾點(diǎn)給大家分析介紹，希望能幫助大家更好的做CHIP實(shí)驗(yàn)什么叫ChIP？染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）用于分析基因組中特定染色體區(qū)域中組蛋白乙?；癄顟B(tài)的實(shí)驗(yàn)方法，被用來(lái)研究細(xì)胞內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用。是目前確定與特定蛋白結(jié)合的基因組區(qū)域或確定與特定基因組區(qū)域結(jié)合的蛋白

實(shí)驗(yàn)專欄 | 手把手教你質(zhì)粒DNA提取2021/10/14: 上面這張圖，大家有沒(méi)有一種熟悉的感覺(jué)，沒(méi)錯(cuò)，就是你想的核酸提取實(shí)驗(yàn)流程圖。相信大家作剛開(kāi)始做為實(shí)驗(yàn)小白，剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室時(shí)，學(xué)的第一個(gè)實(shí)驗(yàn)就是提質(zhì)粒了。當(dāng)時(shí)剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室，看著師兄做實(shí)驗(yàn)的樣子好酷呀！跟在師兄后面，認(rèn)真的對(duì)每一步的步驟都做好筆記，后來(lái)才發(fā)現(xiàn)你只不過(guò)是做了一份手抄版的說(shuō)明書。接下來(lái)的N年里，除了轉(zhuǎn)化、涂板、挑單克隆、搖菌、提質(zhì)粒、酶切、連接，此時(shí)此刻，只想有個(gè)提取質(zhì)粒的機(jī)器人。因?yàn)樽龆嗔酥螅憔蜁?huì)像個(gè)機(jī)器人一樣，最后甚至連提取的原理都會(huì)遺忘了。所以，今天小編就來(lái)給大家講一講提取質(zhì)粒的原理，

干貨|細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法知多少2021/08/19: 一、細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測(cè)根據(jù)凋亡細(xì)胞固有的形態(tài)特征，人們已經(jīng)設(shè)計(jì)了許多不同的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測(cè)方法。1光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡2熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡3透射電子顯微鏡觀察二、磷脂酰絲氨酸外翻分析（AnnexinV法）磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine,PS）正常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在細(xì)胞凋亡的早期，PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中(圖3)。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。將A

Western免疫印跡技術(shù)大匯總（上）2021/08/12: 各位小伙伴們，我們又見(jiàn)面了好久沒(méi)有更新一些技術(shù)性的文章了，今天我們就來(lái)講講蛋白質(zhì)技術(shù)，對(duì)，沒(méi)錯(cuò)，就是Western免疫印跡，這個(gè)實(shí)驗(yàn)相信各位小伙伴們，也是耳熟能詳了，但是呢，還是有不少下伙伴們?cè)趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中，會(huì)出現(xiàn)各種各樣的問(wèn)題，所以為了解惑各位小伙伴們，今天我們就出一期關(guān)于Western免疫印跡實(shí)驗(yàn)的知識(shí)點(diǎn)，其中包括它的概念、原理、應(yīng)用場(chǎng)景、操作步驟以及注意事項(xiàng)等。Western免疫印跡是什么Western免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)已知表達(dá)蛋

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