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各種細(xì)胞培養(yǎng)基類型概述2024/05/06: 細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。常見的種類如下：1、無機(jī)鹽培養(yǎng)液中無機(jī)鹽的主要功能是幫助細(xì)胞維持滲透壓平衡。此外，通過提供鈉，鉀和鈣離子，幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。培養(yǎng)液的滲透壓是一個(gè)非常重要的因素，細(xì)胞通常可耐受260mOsm/kg320mOsm/kg。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動(dòng)。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會(huì)明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中的物質(zhì)。向培養(yǎng)液中添加HEPES時(shí)需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃

全方面闡述血清和血漿的關(guān)聯(lián)2024/04/28: 血清和血漿均是不含細(xì)胞（包括血小板）等有形成分的血液液體部分，其主要區(qū)別是血清不含凝血因子和血小板，血漿則含有凝血因子，它們的制備方法如下：1、血清的制備：獲得的血液不能抗凝，盛于離心管或可以離心的器皿中，靜置或置37℃環(huán)境中促其凝固，待血液凝固后，將其平衡后離心（一般為3000rpm，離心5～10min），得到的上清液即為血清，可小心將上清吸出（注意切勿吸出細(xì)胞成分），分裝備用。2、血漿制備：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝劑（抗凝劑：血液=1：9，將血液加到一定量后顛倒混勻，離心（離心條件

ELISA免疫檢測(cè)顯色與比色詳情2024/04/22: 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay，ELISA）是免疫學(xué)和分子生物學(xué)中廣泛使用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)ELISA檢測(cè)是一種免疫檢測(cè)方法，通常用于測(cè)量生物樣品中的抗體或抗原，包括蛋白質(zhì)或糖蛋白。像其他免疫檢測(cè)法一樣，它們依靠抗體與目標(biāo)的結(jié)合來促進(jìn)檢測(cè)。一、顯色ELISA試劑盒里的顯色液A和B成分：如果你是HRP的二抗，顯色液A、B的成分一般是H2O2和TMB（或OPD），至于具體A是那一個(gè)B是那一個(gè)你要看說明書。HRP催化過氧化物H2O2，其反應(yīng)式如下：D＝TM

PCR反應(yīng)各種類掌握指導(dǎo)2024/04/16: 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR（polymerasechainreaction），主要由高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個(gè)步驟反復(fù)的熱循環(huán)構(gòu)成：即模板DNA先經(jīng)高溫變性為單鏈，在DNA聚合酶和適宜的溫度下，兩條引物分別與兩條模板DNA鏈上的一段互補(bǔ)序列發(fā)生退火，接著在DNA聚合酶的催化下以四種脫氧核苷酸三磷酸（dNTPs）為底物，使退火引物得以延伸，如此反復(fù)，使位于兩段已知序列之間的DNA丨片段呈幾何倍數(shù)擴(kuò)增。PCR的分類：PCR有很多種，核心就是用引物擴(kuò)增特定的DNA，以指數(shù)方式倍增的DNA達(dá)到可以觀察到

雙抗夾心ELISA法重點(diǎn)分析2024/04/16: 酶聯(lián)免疫吸附分析Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay，ELISA是以體外抗原抗體反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原抗體特異性反應(yīng)與酶的高效催化作用相結(jié)合的一種檢測(cè)方法，靈敏度可達(dá)皮克(pg/mL)水平。常見的ELISA類型雙抗體夾心法，其基本原理是將定量的包被抗體以物理吸附的方法固定于微孔板表面，然后加入待檢標(biāo)本，通過加入檢測(cè)抗體，酶標(biāo)記第二抗體后用TMB底物顯色，微孔板中顏色的深淺與待測(cè)物的濃度呈正相關(guān)。1、包被抗體許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚丙酰胺和纖維素等，在進(jìn)行抗體固定化之前，

ELISA試驗(yàn)操作過程注意點(diǎn)匯總2024/04/01: ELISA技術(shù)原理將抗原抗體的特異性免疫反應(yīng)與酶的催化反應(yīng)相結(jié)合的免疫檢測(cè)技術(shù)，利用酶標(biāo)技術(shù)標(biāo)記抗原或抗體，通過顯色反應(yīng)，用以檢測(cè)相應(yīng)的抗體或抗原，對(duì)其進(jìn)行定性或定量分析。ELISA實(shí)驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。下面一步步分析ELISA試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果因素。1、標(biāo)本的選擇與準(zhǔn)備用于ELISA測(cè)定的臨床標(biāo)本最為常用的是血清(漿)，有時(shí)因?yàn)樘囟ǖ臋z測(cè)目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等

PCR引物設(shè)計(jì)詳述2024/03/25: PCR引物設(shè)計(jì)的目的是為了找到一對(duì)合適的核苷酸片段，使其能有效地?cái)U(kuò)增模板DNA序列。因此，引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否。要設(shè)計(jì)引物首先要找到DNA序列的保守區(qū)。同時(shí)應(yīng)預(yù)測(cè)將要擴(kuò)增的片段單鏈?zhǔn)欠裥纬啥?jí)結(jié)構(gòu)。如這個(gè)區(qū)域單鏈能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，就要避開它。如這一段不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，那就可以在這一區(qū)域設(shè)計(jì)引物?，F(xiàn)在可以在這一保守區(qū)域里設(shè)計(jì)一對(duì)引物。一般引物長(zhǎng)度為15~30堿基，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為100~600堿基對(duì)。讓我們先看看P1引物。一般引物序列中G+C含量一般為40%~60%。而且四種堿

抗原抗體反應(yīng)反應(yīng)關(guān)鍵方面闡述2024/03/18: 抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。這種反應(yīng)既可在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行，也可以在機(jī)體外進(jìn)行。抗原抗體反應(yīng)的過程是經(jīng)過一系列的化學(xué)和物理變化，包括抗原抗體特異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個(gè)階段，以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化。由于抗體主要存在于血清中，在抗原或抗體檢測(cè)中多以血清為試驗(yàn)材料，故將體外抗原抗體的免疫學(xué)反應(yīng)也稱作血清學(xué)反應(yīng)(serologicalreaction)。該反應(yīng)既可用已知的抗原檢測(cè)未知的抗體，這是臨床上常用的血清學(xué)診斷方法；也可用已知的抗體檢測(cè)未知的抗原，如微生物及其

ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品使用說明2024/03/11: ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線是結(jié)果計(jì)算的尺子，標(biāo)準(zhǔn)品是ELISA實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵點(diǎn)。正確溶解、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品尤其重要，以下一起了解下：1.粉末標(biāo)準(zhǔn)品短暫離心，讓因運(yùn)輸沾到管蓋、管壁的標(biāo)準(zhǔn)品沉到管底。2.根據(jù)瓶標(biāo)簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末*溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白，待溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。3.標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋:（1）標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的選擇：若血清、血漿、組織勻漿樣本，用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。若細(xì)

細(xì)胞的主要組成部分詮釋2024/03/04: 一、細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)是細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、細(xì)胞膜。細(xì)胞分為動(dòng)物細(xì)胞、細(xì)菌和真菌和植物細(xì)胞。細(xì)胞是生物體基本的結(jié)構(gòu)和功能單位。已知除病毒之外的所有生物均由細(xì)胞所組成，但病毒生命活動(dòng)也必須在細(xì)胞中才能體現(xiàn)。動(dòng)物細(xì)胞結(jié)構(gòu)：動(dòng)物細(xì)胞有細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核。動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)包括細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)和細(xì)胞器。動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞器包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、高爾基體、核糖體、溶酶體、中心體。動(dòng)物細(xì)胞與植物細(xì)胞相比較，具有很多相似的地方，如動(dòng)物細(xì)胞也具有細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等結(jié)構(gòu)。但是動(dòng)物細(xì)胞與植物細(xì)胞又有一些重要的區(qū)

ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋問題解讀2024/02/26: 一個(gè)準(zhǔn)確的ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，必須包含三大要素：性能可靠的試劑盒、造模成功并準(zhǔn)確采集的樣本、可控環(huán)境且嚴(yán)謹(jǐn)實(shí)驗(yàn)操作，三者缺一不可。在操作過程中，經(jīng)常遇到樣本稀釋問題，需要進(jìn)行樣本稀釋。一、在ELISA實(shí)驗(yàn)過程中，超過試劑盒檢測(cè)范圍的，一般有這幾種情況。樣本值高的可能情況:1、樣本中待測(cè)物含量過高。一些高豐度蛋白來說，比如免疫球蛋白、脂聯(lián)素、C肽、載脂蛋白等，在樣本中本身含量就很高，有的達(dá)到mg/mL濃度。2、一些受誘導(dǎo)表達(dá)的細(xì)胞上清中，大量表達(dá)，比如小鼠細(xì)胞誘導(dǎo)后，大量表達(dá)腫瘤壞死因子α（TNF

PCR反應(yīng)的五要素剖析2024/02/18: 熒光定量PCR(realtimefluorescencequantitativePCR，RTFQPCR)是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度。PCR原理：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;剛開始時(shí),探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時(shí)，T

細(xì)胞培養(yǎng)用液具體步驟2024/02/05: 器材與試劑：干粉型培養(yǎng)基、胰蛋白酶，青霉素、鏈霉素.純凈水系統(tǒng)、電子天平、PH計(jì)、磁力攪拌器。具體步驟：一、水的制備：細(xì)胞培養(yǎng)用水必須非常純凈，不含有離子和其他的雜質(zhì)。需要用新鮮的雙蒸水、三蒸水或純凈水.二、PBS的制備與消毒(也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：1.溶解定容：將藥品（NaCl8.0g，KCl0.2g，Na2HPO4·H2O1.56g，KH2PO40.2g）倒入盛有雙蒸水的燒杯中，玻璃棒攪動(dòng)，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中準(zhǔn)確定容至1000ml，搖勻即

普通PCR和熒光定量PCR的引物設(shè)計(jì)方面對(duì)比2024/01/29: 引物，在核苷酸聚合作用的起始時(shí)，可以刺激合成另一種大分子，并與反應(yīng)物以共價(jià)鍵形式連接的序列。在核酸化學(xué)中，引物是一段短的單鏈RNA或DNA片段，可結(jié)合在核酸鏈上與之互補(bǔ)的區(qū)域，其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點(diǎn)，核酸聚合酶可由其3′端開始合成新的核酸鏈。無論是做普通PCR還是熒光定量(Realtime)PCR，設(shè)計(jì)合適的引物是非常關(guān)鍵的一步。普通PCR和熒光定量PCR的檢測(cè)方式具有較大的差別。熒光定量PCR實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)與DNA結(jié)合的熒光染料激發(fā)的熒光，普通PCR通過檢測(cè)插入DNA中核酸染料的量來測(cè)定

逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng) (RT-PCR)實(shí)驗(yàn)步驟詳述2024/01/22: 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，而獲得目的基因或檢測(cè)基因表達(dá)。實(shí)驗(yàn)步驟：一、總RNA的提取總RNA提取可以：（1）獲得高純度、高質(zhì)量的總RNA；（2）可以滿足生物學(xué)下游實(shí)驗(yàn)NorthernBlot、核酸酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)、RT-PCR、qRT-PCR和陣

化學(xué)試劑管理注意事項(xiàng)參考2024/01/08: 實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑的種類繁多，化學(xué)藥品大多具有一定的毒性和危險(xiǎn)性，對(duì)其加強(qiáng)管理無疑是實(shí)驗(yàn)室管理人員的首要工作。接下來一起了解化學(xué)試劑管理注意事項(xiàng)參考。1、易燃易爆化學(xué)試劑一般將閃點(diǎn)在25℃以下化學(xué)試劑列入易燃化學(xué)試劑，它們多是極易揮發(fā)的液體，遇明火即可燃燒。閃點(diǎn)越低，越易燃燒。使用易燃化學(xué)試劑時(shí)絕不能使用明火，加熱也不能直接用加熱器，一般不用水浴加熱。在使用易燃化學(xué)試劑的實(shí)驗(yàn)人員，要穿好必要的防護(hù)用具，最好戴上防護(hù)眼鏡。2、有毒化學(xué)試劑一般化學(xué)試劑對(duì)人體都有毒害，在使用是一定要避免大量吸入;在使用完

小鼠ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)中血清樣本處理過程2024/01/02: 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯y(tǒng)i烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。它是應(yīng)用最多的一種免疫酶技術(shù)。ELISA試劑盒（ELISAKits）已成為藥物和植物病理學(xué)研究中的常用診斷工具，是檢測(cè)組織提取液、血清和細(xì)胞培養(yǎng)液中目標(biāo)抗體/抗原的理想工具，也是重要的質(zhì)量控制手段。通常我們可用于ELISA檢測(cè)的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同

土壤微生物（細(xì)菌、霉菌）實(shí)驗(yàn)原理步驟2023/12/26: 一、實(shí)驗(yàn)原理：1.細(xì)菌簡(jiǎn)單染色利用單一染料對(duì)菌體進(jìn)行染色的方法叫做簡(jiǎn)單染色。2.細(xì)菌的革蘭氏染色經(jīng)此法染色后，細(xì)胞保留初染劑藍(lán)紫色的細(xì)菌為革蘭氏陽性菌；細(xì)胞中初染劑被脫色劑洗脫而染上復(fù)染劑的顏色（紅色）的細(xì)菌為革蘭氏陰性菌。3.細(xì)菌芽孢染色首先用著色能力較強(qiáng)的染料，如孔雀綠（malachitegreen）或堿性品紅（basicfuchsin）在加熱條件下進(jìn)行染色時(shí)，此染料不僅可以進(jìn)入菌體，而且也可以進(jìn)入芽孢，進(jìn)入菌體的染料可經(jīng)水洗脫色，而進(jìn)入芽孢的染料則難以透出。再用對(duì)比度大的復(fù)染劑（如番紅液）

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的基本條件歸納2023/12/18: 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是以特性量值的均勻性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性等特性為主要特征的。為獲得這些基本特征，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)起碼應(yīng)滿足以下基本條件的要求。1、材質(zhì)均勻從理論上講，如果物質(zhì)的一部分（單元）的特性值與另一部分（單元）的特性值沒有顯著差異，則該物質(zhì)的該特性是均勻的。但是，全均勻的物質(zhì)是不存在的，物質(zhì)內(nèi)部和單元之問或多或少會(huì)存在有不均勻性，在貯存過程中，也會(huì)發(fā)生層析、偏析、聚集等不均勻的傾向，因而，均勻是相對(duì)的，而不均勻是絕對(duì)的。如果物質(zhì)的一部分(單元）的特性值與另一部分（單元）的特性值之間的差異不能被實(shí)驗(yàn)檢測(cè)出來，或

牛血清功能用途總結(jié)2023/12/11: 血清是指血液凝固后，去除血漿中纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色澄清液體，內(nèi)含有血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無機(jī)物等多種成分。這些成分對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、保護(hù)細(xì)胞不受損傷等起到重要作用。牛血清作為細(xì)胞培養(yǎng)中較為普遍的添加組分之一，在細(xì)胞培養(yǎng)中占據(jù)關(guān)鍵地位。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必需的營養(yǎng)成分，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供

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