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各種細胞培養(yǎng)基類型概述2024/05/06
細胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細胞中供給細胞營養(yǎng)和促使細胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。常見的種類如下：1、無機鹽培養(yǎng)液中無機鹽的主要功能是幫助細胞維持滲透壓平衡。此外，通過提供鈉，鉀和鈣離子，幫助細胞調(diào)節(jié)細胞膜功能。培養(yǎng)液的滲透壓是一個非常重要的因素，細胞通常可耐受260mOsm/kg320mOsm/kg。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強酸或強堿中的物質(zhì)。向培養(yǎng)液中添加HEPES時需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃
全方面闡述血清和血漿的關(guān)聯(lián)2024/04/28
血清和血漿均是不含細胞（包括血小板）等有形成分的血液液體部分，其主要區(qū)別是血清不含凝血因子和血小板，血漿則含有凝血因子，它們的制備方法如下：1、血清的制備：獲得的血液不能抗凝，盛于離心管或可以離心的器皿中，靜置或置37℃環(huán)境中促其凝固，待血液凝固后，將其平衡后離心（一般為3000rpm，離心5～10min），得到的上清液即為血清，可小心將上清吸出（注意切勿吸出細胞成分），分裝備用。2、血漿制備：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝劑（抗凝劑：血液=1：9，將血液加到一定量后顛倒混勻，離心（離心條件
ELISA免疫檢測顯色與比色詳情2024/04/22
酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay，ELISA）是免疫學(xué)和分子生物學(xué)中廣泛使用的實驗室技術(shù)ELISA檢測是一種免疫檢測方法，通常用于測量生物樣品中的抗體或抗原，包括蛋白質(zhì)或糖蛋白。像其他免疫檢測法一樣，它們依靠抗體與目標(biāo)的結(jié)合來促進檢測。一、顯色ELISA試劑盒里的顯色液A和B成分：如果你是HRP的二抗，顯色液A、B的成分一般是H2O2和TMB（或OPD），至于具體A是那一個B是那一個你要看說明書。HRP催化過氧化物H2O2，其反應(yīng)式如下：D＝TM
PCR反應(yīng)各種類掌握指導(dǎo)2024/04/16
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR（polymerasechainreaction），主要由高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個步驟反復(fù)的熱循環(huán)構(gòu)成：即模板DNA先經(jīng)高溫變性為單鏈，在DNA聚合酶和適宜的溫度下，兩條引物分別與兩條模板DNA鏈上的一段互補序列發(fā)生退火，接著在DNA聚合酶的催化下以四種脫氧核苷酸三磷酸（dNTPs）為底物，使退火引物得以延伸，如此反復(fù)，使位于兩段已知序列之間的DNA丨片段呈幾何倍數(shù)擴增。PCR的分類：PCR有很多種，核心就是用引物擴增特定的DNA，以指數(shù)方式倍增的DNA達到可以觀察到
雙抗夾心ELISA法重點分析2024/04/16
酶聯(lián)免疫吸附分析Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay，ELISA是以體外抗原抗體反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原抗體特異性反應(yīng)與酶的高效催化作用相結(jié)合的一種檢測方法，靈敏度可達皮克(pg/mL)水平。常見的ELISA類型雙抗體夾心法，其基本原理是將定量的包被抗體以物理吸附的方法固定于微孔板表面，然后加入待檢標(biāo)本，通過加入檢測抗體，酶標(biāo)記第二抗體后用TMB底物顯色，微孔板中顏色的深淺與待測物的濃度呈正相關(guān)。1、包被抗體許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚丙酰胺和纖維素等，在進行抗體固定化之前，
ELISA試驗操作過程注意點匯總2024/04/01
ELISA技術(shù)原理將抗原抗體的特異性免疫反應(yīng)與酶的催化反應(yīng)相結(jié)合的免疫檢測技術(shù)，利用酶標(biāo)技術(shù)標(biāo)記抗原或抗體，通過顯色反應(yīng)，用以檢測相應(yīng)的抗體或抗原，對其進行定性或定量分析。ELISA實驗以靈敏度較高、特異性較好的特點得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。下面一步步分析ELISA試驗操作中可能影響結(jié)果因素。1、標(biāo)本的選擇與準(zhǔn)備用于ELISA測定的臨床標(biāo)本最為常用的是血清(漿)，有時因為特定的檢測目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等
PCR引物設(shè)計詳述2024/03/25
PCR引物設(shè)計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。因此，引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否。要設(shè)計引物首先要找到DNA序列的保守區(qū)。同時應(yīng)預(yù)測將要擴增的片段單鏈?zhǔn)欠裥纬啥壗Y(jié)構(gòu)。如這個區(qū)域單鏈能形成二級結(jié)構(gòu)，就要避開它。如這一段不能形成二級結(jié)構(gòu)，那就可以在這一區(qū)域設(shè)計引物?，F(xiàn)在可以在這一保守區(qū)域里設(shè)計一對引物。一般引物長度為15~30堿基，擴增片段長度為100~600堿基對。讓我們先看看P1引物。一般引物序列中G+C含量一般為40%~60%。而且四種堿
抗原抗體反應(yīng)反應(yīng)關(guān)鍵方面闡述2024/03/18
抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。這種反應(yīng)既可在機體內(nèi)進行，也可以在機體外進行?？乖贵w反應(yīng)的過程是經(jīng)過一系列的化學(xué)和物理變化，包括抗原抗體特異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個階段，以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化。由于抗體主要存在于血清中，在抗原或抗體檢測中多以血清為試驗材料，故將體外抗原抗體的免疫學(xué)反應(yīng)也稱作血清學(xué)反應(yīng)(serologicalreaction)。該反應(yīng)既可用已知的抗原檢測未知的抗體，這是臨床上常用的血清學(xué)診斷方法；也可用已知的抗體檢測未知的抗原，如微生物及其
ELISA實驗標(biāo)準(zhǔn)品使用說明2024/03/11
ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線是結(jié)果計算的尺子，標(biāo)準(zhǔn)品是ELISA實驗成功與否的關(guān)鍵點。正確溶解、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品尤其重要，以下一起了解下：1.粉末標(biāo)準(zhǔn)品短暫離心，讓因運輸沾到管蓋、管壁的標(biāo)準(zhǔn)品沉到管底。2.根據(jù)瓶標(biāo)簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末*溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白，待溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。3.標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋:（1）標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的選擇：若血清、血漿、組織勻漿樣本，用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。若細
細胞的主要組成部分詮釋2024/03/04
一、細胞的基本結(jié)構(gòu)：細胞的基本結(jié)構(gòu)是細胞質(zhì)、細胞核、細胞膜。細胞分為動物細胞、細菌和真菌和植物細胞。細胞是生物體基本的結(jié)構(gòu)和功能單位。已知除病毒之外的所有生物均由細胞所組成，但病毒生命活動也必須在細胞中才能體現(xiàn)。動物細胞結(jié)構(gòu)：動物細胞有細胞膜、細胞質(zhì)、細胞核。動物細胞的細胞質(zhì)包括細胞質(zhì)基質(zhì)和細胞器。動物細胞的細胞器包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、高爾基體、核糖體、溶酶體、中心體。動物細胞與植物細胞相比較，具有很多相似的地方，如動物細胞也具有細胞膜、細胞質(zhì)、細胞核等結(jié)構(gòu)。但是動物細胞與植物細胞又有一些重要的區(qū)
ELISA檢測實驗樣本稀釋問題解讀2024/02/26
一個準(zhǔn)確的ELISA檢測實驗，必須包含三大要素：性能可靠的試劑盒、造模成功并準(zhǔn)確采集的樣本、可控環(huán)境且嚴(yán)謹(jǐn)實驗操作，三者缺一不可。在操作過程中，經(jīng)常遇到樣本稀釋問題，需要進行樣本稀釋。一、在ELISA實驗過程中，超過試劑盒檢測范圍的，一般有這幾種情況。樣本值高的可能情況:1、樣本中待測物含量過高。一些高豐度蛋白來說，比如免疫球蛋白、脂聯(lián)素、C肽、載脂蛋白等，在樣本中本身含量就很高，有的達到mg/mL濃度。2、一些受誘導(dǎo)表達的細胞上清中，大量表達，比如小鼠細胞誘導(dǎo)后，大量表達腫瘤壞死因子α（TNF
PCR反應(yīng)的五要素剖析2024/02/18
熒光定量PCR(realtimefluorescencequantitativePCR，RTFQPCR)是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對PCR產(chǎn)物進行標(biāo)記跟蹤，實時在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度。PCR原理：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時,探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時，T
細胞培養(yǎng)用液具體步驟2024/02/05
器材與試劑：干粉型培養(yǎng)基、胰蛋白酶，青霉素、鏈霉素.純凈水系統(tǒng)、電子天平、PH計、磁力攪拌器。具體步驟：一、水的制備：細胞培養(yǎng)用水必須非常純凈，不含有離子和其他的雜質(zhì)。需要用新鮮的雙蒸水、三蒸水或純凈水.二、PBS的制備與消毒(也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：1.溶解定容：將藥品（NaCl8.0g，KCl0.2g，Na2HPO4·H2O1.56g，KH2PO40.2g）倒入盛有雙蒸水的燒杯中，玻璃棒攪動，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中準(zhǔn)確定容至1000ml，搖勻即
普通PCR和熒光定量PCR的引物設(shè)計方面對比2024/01/29
引物，在核苷酸聚合作用的起始時，可以刺激合成另一種大分子，并與反應(yīng)物以共價鍵形式連接的序列。在核酸化學(xué)中，引物是一段短的單鏈RNA或DNA片段，可結(jié)合在核酸鏈上與之互補的區(qū)域，其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點，核酸聚合酶可由其3′端開始合成新的核酸鏈。無論是做普通PCR還是熒光定量(Realtime)PCR，設(shè)計合適的引物是非常關(guān)鍵的一步。普通PCR和熒光定量PCR的檢測方式具有較大的差別。熒光定量PCR實時監(jiān)測與DNA結(jié)合的熒光染料激發(fā)的熒光，普通PCR通過檢測插入DNA中核酸染料的量來測定
逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng) (RT-PCR)實驗步驟詳述2024/01/22
逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。實驗步驟：一、總RNA的提取總RNA提取可以：（1）獲得高純度、高質(zhì)量的總RNA；（2）可以滿足生物學(xué)下游實驗NorthernBlot、核酸酶保護實驗、RT-PCR、qRT-PCR和陣
化學(xué)試劑管理注意事項參考2024/01/08
實驗室化學(xué)試劑的種類繁多，化學(xué)藥品大多具有一定的毒性和危險性，對其加強管理無疑是實驗室管理人員的首要工作。接下來一起了解化學(xué)試劑管理注意事項參考。1、易燃易爆化學(xué)試劑一般將閃點在25℃以下化學(xué)試劑列入易燃化學(xué)試劑，它們多是極易揮發(fā)的液體，遇明火即可燃燒。閃點越低，越易燃燒。使用易燃化學(xué)試劑時絕不能使用明火，加熱也不能直接用加熱器，一般不用水浴加熱。在使用易燃化學(xué)試劑的實驗人員，要穿好必要的防護用具，最好戴上防護眼鏡。2、有毒化學(xué)試劑一般化學(xué)試劑對人體都有毒害，在使用是一定要避免大量吸入;在使用完
小鼠ELISA檢測試劑盒實驗中血清樣本處理過程2024/01/02
酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯y(tǒng)i烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。它是應(yīng)用最多的一種免疫酶技術(shù)。ELISA試劑盒（ELISAKits）已成為藥物和植物病理學(xué)研究中的常用診斷工具，是檢測組織提取液、血清和細胞培養(yǎng)液中目標(biāo)抗體/抗原的理想工具，也是重要的質(zhì)量控制手段。通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同
土壤微生物（細菌、霉菌）實驗原理步驟2023/12/26
一、實驗原理：1.細菌簡單染色利用單一染料對菌體進行染色的方法叫做簡單染色。2.細菌的革蘭氏染色經(jīng)此法染色后，細胞保留初染劑藍紫色的細菌為革蘭氏陽性菌；細胞中初染劑被脫色劑洗脫而染上復(fù)染劑的顏色（紅色）的細菌為革蘭氏陰性菌。3.細菌芽孢染色首先用著色能力較強的染料，如孔雀綠（malachitegreen）或堿性品紅（basicfuchsin）在加熱條件下進行染色時，此染料不僅可以進入菌體，而且也可以進入芽孢，進入菌體的染料可經(jīng)水洗脫色，而進入芽孢的染料則難以透出。再用對比度大的復(fù)染劑（如番紅液）
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的基本條件歸納2023/12/18
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是以特性量值的均勻性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性等特性為主要特征的。為獲得這些基本特征，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)起碼應(yīng)滿足以下基本條件的要求。1、材質(zhì)均勻從理論上講，如果物質(zhì)的一部分（單元）的特性值與另一部分（單元）的特性值沒有顯著差異，則該物質(zhì)的該特性是均勻的。但是，全均勻的物質(zhì)是不存在的，物質(zhì)內(nèi)部和單元之問或多或少會存在有不均勻性，在貯存過程中，也會發(fā)生層析、偏析、聚集等不均勻的傾向，因而，均勻是相對的，而不均勻是絕對的。如果物質(zhì)的一部分(單元）的特性值與另一部分（單元）的特性值之間的差異不能被實驗檢測出來，或
牛血清功能用途總結(jié)2023/12/11
血清是指血液凝固后，去除血漿中纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色澄清液體，內(nèi)含有血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等多種成分。這些成分對促進細胞生長、保護細胞不受損傷等起到重要作用。牛血清作為細胞培養(yǎng)中較為普遍的添加組分之一，在細胞培養(yǎng)中占據(jù)關(guān)鍵地位。牛血清是細胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必需的營養(yǎng)成分，常用于動物細胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供
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