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實驗中抗體的具體作用功能是什么？2025/03/11
抗體是一種由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面?？贵w能識別特定外來物的一個特征，該外來目標(biāo)被稱為抗原。1.做流式的抗體和免疫組化的抗體是一樣的嗎?不一定能通用。流式是用直接標(biāo)記還是間接標(biāo)記?如果是直接標(biāo)記的話，那這個抗體一般不是FITC標(biāo)記或者就是TRITC，PE之類的。如果恰好你的免疫組化，也是想用熒光素標(biāo)記的抗體來直接標(biāo)記，那就可以通用。如果你的免疫組化要用其它的標(biāo)記的話，或者
酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）出現(xiàn)灰區(qū)結(jié)果分析2025/03/04
酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。它是應(yīng)用最多的一種免疫酶技術(shù)。ELISA測定的陽性判斷值,通常是將大量陰性和陽性人群的測定數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析后確定的,其確定依據(jù)為判斷結(jié)果的假陽性和假陰性率最di。在陽性判斷值周圍一定范圍內(nèi)之外的測定結(jié)果可歸為可疑,亦即ELISA測定的“灰區(qū)"。“灰區(qū)"的大小可用統(tǒng)計學(xué)方法確定。測定結(jié)果處于“灰區(qū)"的樣
ELISA試劑盒曲線問題解析2025/02/25
ELISA試劑盒試驗標(biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會直接影響到實驗的結(jié)果，甚至是關(guān)系到實驗的成敗。下面將影響ELISA試劑盒曲線問題的原因做了總結(jié)：一OD值不正常的可能原因是：1、試劑盒未回溫，試劑盒回溫到25℃；2、溫度控制不好，控制正確溫度；3、孵育時間不準(zhǔn)確，控制孵育時間；4、洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增加，洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干；5、陽光直射，對著風(fēng)直接吹，避風(fēng)避光；6、酶標(biāo)儀的波長錯誤，酶標(biāo)儀的波長450nm；7、抗體的稀釋錯誤，正確的稀釋抗體；8、水質(zhì)問題，用娃哈哈
聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)實驗問題解析2025/02/18
聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是在體外進(jìn)行的由引物介導(dǎo)的酶促DNA擴(kuò)增反應(yīng)。PCR的原理是在模板DNA、PCR引物、四種脫氧核糖核苷酸(dNTP)及適當(dāng)濃度的Mg2+存在的條件下，依賴于DNA聚合酶的體外酶促合成反應(yīng)。兩個引物分別位于靶序列兩端，同兩條模板的3’端互補(bǔ)，由此限定擴(kuò)增片段。PCR反應(yīng)由一系列的變性→退火→延伸反復(fù)循環(huán)構(gòu)成，即在高溫下模板雙鏈DNA變性解鏈，然后在較低溫度下同過量引物退火，再在適中溫度下由DNA聚合酶催化進(jìn)行延伸。理論上，經(jīng)過N次循環(huán)可使特定片段擴(kuò)增到2n-1，考慮到擴(kuò)增
影響ELISA檢測試劑盒實驗結(jié)果的干擾物質(zhì)有哪些？2025/02/14
血清是常用的ELISA檢測試劑盒實驗標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種。一、內(nèi)源性物質(zhì)有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。1、類風(fēng)濕因子人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕捉抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致
微生物菌種的臨時存放及活化綜述2025/02/06
菌種活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，逐級擴(kuò)大培養(yǎng)得到純而壯的培養(yǎng)物，即獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物。菌種發(fā)酵有一般需要2-3代的復(fù)壯過程，因為保存時的條件往往和培養(yǎng)時的條件不相同，所以要活化，讓菌種逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境。一、一般菌種臨時存放及活化1.低溫保存管應(yīng)存放于－20℃~－80℃之低溫條件下。2.準(zhǔn)備37℃之70﹪酒精浴槽（只能在電氣水浴槽中改放酒精，不可以火加溫，以免危險；若以37℃水浴取代，應(yīng)避免水中微生物污染），其中事先安放小試管架，液面不可高達(dá)管塞。3.將低溫保
微生物實驗室培養(yǎng)基的制備及性能測試2025/01/21
培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì)。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基自身質(zhì)量的優(yōu)劣、保存是否得當(dāng)、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。公司對微生物實驗室在培養(yǎng)基購置、貯存、制備、使用等方面應(yīng)采取的質(zhì)量控制措施進(jìn)行討論，提一些建議。希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。一、培養(yǎng)基的購置與驗收1.購置從培養(yǎng)基自身的質(zhì)量來看，不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品，甚至同一廠家不同批號的產(chǎn)品都會存在差異。依據(jù)ISO/IE
微生物培養(yǎng)基滅菌方法介紹2025/01/14
培養(yǎng)基是將微生物生長繁殖所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)，用人工方法配制而成的各種營養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基為微生物的生長提供營養(yǎng)物質(zhì)和生存空間。滅菌的方法，通?？梢苑譃樗拇箢悾?、加熱滅菌：包括直接灼燒滅菌、干熱滅菌、加壓蒸汽滅菌、間歇滅菌和煮沸消毒；2、過濾去菌；3、射線滅菌和消毒；4、化學(xué)藥劑滅菌和消毒。在本實驗中，介紹與培養(yǎng)基和玻璃器材滅菌有關(guān)的部份滅菌方法。1.干熱滅菌法（即熱空氣滅菌法）干熱滅菌一般是利用電熱烘箱作為干熱滅菌器。前面所包裝好的玻璃器皿，如帶棉塞的三角瓶，試管、包裝好的吸管、培養(yǎng)皿等，放入電
RT-PCR反應(yīng)體系靈敏度及特異性提高指導(dǎo)2025/01/07
RT-PCR(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction)，也稱為逆轉(zhuǎn)錄PCR，是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。RT-PCR實驗需要追求一致性（穩(wěn)定性），不管RNA上樣量如何，反轉(zhuǎn)錄的效率都保持一致，確保cDNA的差異能夠真實反映mRNA的差異。在進(jìn)行RT反應(yīng)之前，考慮以下幾個方面，可以更好地進(jìn)行RT-PCR實驗。一、增加反應(yīng)體系的靈敏度：1.分離高質(zhì)量RNA：成功的cDNA合成來自高質(zhì)量的RNA。高質(zhì)量的
抗體在各個實驗中的應(yīng)用2024/12/24
抗體是一種由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面?？贵w能識別特定外來物的一個特征，該外來目標(biāo)被稱為抗原。1.做流式的抗體和免疫組化的抗體是一樣的嗎?不一定能通用。流式是用直接標(biāo)記還是間接標(biāo)記?如果是直接標(biāo)記的話，那這個抗體一般不是FITC標(biāo)記或者就是TRITC，PE之類的。如果恰好你的免疫組化，也是想用熒光素標(biāo)記的抗體來直接標(biāo)記，那就可以通用。如果你的免疫組化要用其它的標(biāo)記的話，或者
雙抗體夾心法檢測抗原的操作步驟及靈敏度提高方法2024/12/17
雙抗體夾心法檢測抗原的操作步驟：1、包被抗體：將特異性抗體（捕獲抗體）包被在固相載體（如酶標(biāo)板）表面，通常在4℃過夜，使抗體通過物理吸附固定在固相表面。2、封閉：用封閉液（如1%-5%的牛血清白蛋白溶液）封閉固相載體表面未被抗體占據(jù)的位點，以減少后續(xù)檢測中的非特異性結(jié)合。在37℃孵育1-2小時。3、加樣：將待測樣品加入到已包被和封閉好的固相載體孔中，在37℃孵育一定時間，使樣品中的抗原與固相載體上的捕獲抗體結(jié)合。4、洗滌：用洗滌液洗去未結(jié)合的物質(zhì)，重復(fù)多次以確保洗干凈。5、加檢測抗體（酶標(biāo)抗體）
RT-PCR反轉(zhuǎn)錄酶與合成 cDNA 引物的選擇2024/12/09
逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，而獲得目的基因或檢測基因表達(dá)。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數(shù)量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。一、反轉(zhuǎn)錄酶的選擇1．Money鼠白血病病毒（MMLV）反轉(zhuǎn)錄酶：有強(qiáng)的聚合酶活性，RNA酶H活
PCR電泳原理與分析2024/12/03
PCR電泳原理：PCR電泳PCR電泳主要是瓊脂糖凝膠電泳。電泳儀有正負(fù)極的，而DNA是帶負(fù)電荷的。故而向正方向移動。然后DNA里是有堿基的。堿基可以吸收紫外光。最重要的是有染色劑，常用的有溴化乙錠等等。一般在配制凝膠的時候會加進(jìn)去，或者跑完電泳然后將凝膠浸在含有染色劑的溶液里，染色劑可以插入DNA鏈中。在可見光下是看不見條帶的，但在紫外光照射下就能出現(xiàn)條帶。PCR擴(kuò)增后一般進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析，電泳后一般有以下幾種條帶：1、引物帶。引物濃度過高或是擴(kuò)增效率不是特別高時都會有，一般不呈現(xiàn)為細(xì)帶，
雞酸性磷酸酶（ACP）ELISA試劑盒樣本處理要求2024/11/25
雞酸性磷酸酶（ACP）酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中酸性磷酸酶（ACP）含量。實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中雞酸性磷酸酶（ACP）水平。用純化的雞酸性磷酸酶（ACP）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入酸性磷酸酶（ACP），再與HRP標(biāo)記的酸性磷酸酶（ACP）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹di洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的酸性
逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)實驗過程詳解2024/11/18
逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR）可以：(1）分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物；（2）獲取目的基因；（3）合成cDNA探針；（4）構(gòu)建RNA高效轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)。實驗方法原理:逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再
酶聯(lián)免疫吸附ELISA實驗檢測目的抗原方法講解2024/11/13
ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗是一種廣泛應(yīng)用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗的標(biāo)準(zhǔn)程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（captureAb）固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體（primarydetectionAb），形成一個抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶（enzyme）標(biāo)記了，即可用來直接測定抗原的量，若無，則可利用另一個酶標(biāo)記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)（substrate），作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深
血清的作用功能及其鑒別方法2024/10/28
血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和生長因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。血清是指在凝固后，血漿中所剩下的液體部分。血清中含有多種生物活性物質(zhì)，具有以下幾個重要的作用功能：1、免疫功能：血清中含有免疫球蛋白（抗體），可以識別和中和病原體，參與機(jī)體的免疫應(yīng)答。通過血清中的抗體，機(jī)體可以對抗感染，保護(hù)身體免受疾病的侵襲。2
各類聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)特性及缺點2024/10/21
PCR(polymerasechainreaction)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是體外DNA擴(kuò)增技術(shù)之一，至今已經(jīng)超過30年的歷史。PCR基本原理：PCR可以將目標(biāo)DNA片段擴(kuò)增一百萬倍以上，其原理是在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過程。標(biāo)準(zhǔn)PCR過程分為三步：1.變性（Denaturation）：利用高溫使DNA雙鏈分離。DNA雙鏈之間的氫鍵在高溫下（93-98℃）被打斷。2.退火（Annealin
豬磷脂酰絲氨酸合酶-1(PTDSS1) 酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒實驗操作介紹2024/10/14
豬磷脂酰絲氨酸合酶-1(PTDSS1)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中磷脂酰絲氨酸合酶-1(PTDSS1)含量。一、實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豬磷脂酰絲氨酸合酶-1(PTDSS1)水平。用純化的豬磷脂酰絲氨酸合酶-1(PTDSS1)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入磷脂酰絲氨酸合酶-1(PTDSS1)，再與HRP標(biāo)記的磷脂酰絲氨酸合酶-1(PTDSS1)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹di洗滌后加底物TM
細(xì)胞活躍快樂有效方法策略2024/10/08
細(xì)胞是生物體的結(jié)構(gòu)和功能的基本單位生物學(xué)名詞。一般具有細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜。植物細(xì)胞的細(xì)胞膜外還有細(xì)胞壁。體形極微，在顯微鏡下始能窺見。形狀多種多樣，主要由細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)構(gòu)成，表面有薄膜。動植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)大致相同。植物細(xì)胞質(zhì)膜外有細(xì)胞壁，細(xì)胞壁中常有質(zhì)體，動物細(xì)胞質(zhì)中常有中心體，而高等植物細(xì)胞中則無。細(xì)胞有運動、營養(yǎng)和繁殖等機(jī)能。細(xì)胞是許多生物學(xué)實驗的主角。如果細(xì)胞心情不好，那么實驗的結(jié)果也不會好到哪兒去。如何讓細(xì)胞快樂？下面就仔細(xì)了解一下吧!1.確保所有實驗室材料都無菌交叉污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大敵
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