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提取到質(zhì)量良好的RNA方法技術(shù)2022/08/08: 提取到質(zhì)量良好的RNA（包括總RNA和mRNA，以下同），概括起來有兩種方法，總結(jié)如下：1、檢測(cè)RNA溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白等有機(jī)物的值。一般的，我們只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0時(shí)，我們認(rèn)為RNA中蛋白或者時(shí)其他有機(jī)物的污染是可以容忍的，不過要注意，當(dāng)你用Tris作為緩沖液檢測(cè)吸光度時(shí)，R值可能會(huì)大于2（一般應(yīng)該是2.2時(shí)，說明RNA已經(jīng)水解成單核酸了。如果RNA的量夠，可在260nm

介紹抗體的保存2022/08/01: 抗體的保存方法一般會(huì)直接影響抗體的活性和使用效果。在保存得當(dāng)?shù)那闆r下，大部分抗體可以存放數(shù)月甚至數(shù)年，一般情況需嚴(yán)格按照抗體說明書來進(jìn)行保存。一、抗體保存溫度和條件：1、抗體收到后，需在12000rpm離心1~5分鐘，再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存，如果抗體體積不足50ul，可延長(zhǎng)離心時(shí)間至5分鐘，從而確?？贵w全部離心下來。2、對(duì)于多數(shù)抗體而言，分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是不錯(cuò)之選。腹水形式的產(chǎn)品收到后需立即凍存，因?yàn)樵擃惍a(chǎn)品含有大量的蛋白酶，長(zhǎng)期在置于4℃條件會(huì)導(dǎo)致抗體的降解。分裝成小等

PCR對(duì)照試驗(yàn)結(jié)果好卻沒回收到目的片段參考見解2022/07/25: PCR對(duì)照試驗(yàn)一般都會(huì)加陰性對(duì)照，陽性對(duì)照。如果你只想檢控PCR操作及擴(kuò)增，就加水作為陰性對(duì)照，陽性質(zhì)?；蛘逥NA作為陽性對(duì)照。如果你想監(jiān)控整個(gè)核酸提取過程，及PCR過程的話，那就從核酸提取開始，就將水作為陰性樣本做對(duì)照，含模板DNA的菌或者病毒或者組織作為陽性對(duì)照。然而，PCR對(duì)照試驗(yàn)結(jié)果好卻沒回收到目的片段參考見解：1、連接用室溫保溫1小時(shí)，能滿足大多數(shù)克隆，為提高效率，需4oC過夜。2、插入片段帶有污染，使3`-T缺失，或抑制連接，抑制轉(zhuǎn)化。為此，將插入片段和pGEM-T正對(duì)照混合，再連接

正確溶解與稀釋ELISA標(biāo)準(zhǔn)品了解下2022/07/18: 標(biāo)準(zhǔn)品是ELISA實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵點(diǎn)。正確溶解、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品尤其重要，以下一起了解下：1.粉末標(biāo)準(zhǔn)品短暫離心，讓因運(yùn)輸沾到管蓋、管壁的標(biāo)準(zhǔn)品沉到管底。2.根據(jù)瓶標(biāo)簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末*溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白，待*溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。3.標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋:（1）標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的選擇：若血清、血漿、組織勻漿樣本，用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。若細(xì)胞上清樣本，建議用細(xì)胞培養(yǎng)基梯度稀

ELISA試劑盒檢測(cè)血清使用說明2022/07/05: ELISA試劑盒檢測(cè)血清使用說明大部分elisa檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按慣例方法收集，應(yīng)留意防止溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為符號(hào)的ELISA測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)添加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染，?菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)發(fā)生假陽性反應(yīng)。一般說來，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃。超越一周測(cè)定的需-20℃保存。凍住血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，散布不均，應(yīng)充沛混勻并防止發(fā)生氣泡。混濁或有沉積的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，弄清后再

常見的化學(xué)試劑儲(chǔ)存及原則上處理辦法2022/06/28: 很難說，一般買來的試劑打開用一次沒用完要放好，保質(zhì)期和儲(chǔ)存條件有很大關(guān)系。比如對(duì)于不耐熱的試劑特別是一些生物試劑，在冰箱冷藏又容易吸潮，往往是很不利的；有些試劑對(duì)光敏感或者對(duì)空氣敏感，所以很難找到一種*理想的儲(chǔ)存條件。原則上應(yīng)該這樣：1、對(duì)于便宜的試劑，買來用過按照瓶上建議的方式保存即可（反正壞了不心疼，有錢任性）2、價(jià)格昂貴的試劑，最要緊的是按照需要量購(gòu)買，最好一次用完，不要剩下，因?yàn)楹茈y說這種東西會(huì)受什么影響，一來價(jià)格貴，你不會(huì)有心情來試試它對(duì)光、氧、水的敏感性；二來昂貴藥品往往用在關(guān)鍵步驟

胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用2022/06/21: 胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用：1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。7.參與細(xì)胞凍存。在細(xì)胞培養(yǎng)中，胎牛血清加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基的濃度大多為5%～20%

淺析幼倉(cāng)鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)基本條件2022/06/14: 幼倉(cāng)鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)基本條件：1、合適的細(xì)胞培養(yǎng)基合適的小鼠源細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的重要的條件之一，培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。2、優(yōu)質(zhì)血清目前，大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清。血清是細(xì)胞培養(yǎng)液中重要的成分之一，含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的多種生長(zhǎng)因子及其它營(yíng)養(yǎng)成分。3、無菌無毒細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細(xì)胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。在體外培養(yǎng)的細(xì)胞由于缺乏對(duì)微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染，或者自

了解有關(guān)pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液必看2022/06/07: pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液定義：pH緩沖溶液是一種能使pH值保持穩(wěn)定的溶液。如果向這種溶液中加入少量的酸或堿，或者在溶液中的化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生少量的酸或堿，以及將溶液適當(dāng)稀釋，這個(gè)溶液的pH值基本上穩(wěn)定不變，這種能對(duì)抗少量酸堿或大或稀釋，而使pH值不變化的溶液就稱為緩沖溶液。pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖液有以下特點(diǎn)：（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的pH值是已知的，并達(dá)到規(guī)定的準(zhǔn)確度；（2）標(biāo)準(zhǔn)溶液的pH值有良好的復(fù)現(xiàn)性和穩(wěn)定性，具有較大的緩沖容量，較小的稀釋值和較小的溫度系數(shù)；（3）溶液的制備方法簡(jiǎn)單；1.如何配制pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液？對(duì)于一般p

熒光定量PCR的應(yīng)用領(lǐng)域2022/05/31: 熒光定量PCR的應(yīng)用領(lǐng)域：1、核酸定量分析:對(duì)傳染性疾病進(jìn)行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的檢測(cè),比如近期流行的甲型H1N1流感，轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物基因拷貝數(shù)的檢測(cè)，RNAi基因失活率的檢測(cè)等。2、基因表達(dá)差異分析:比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等)，特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異以及cDNA芯片或差顯結(jié)果的確證3、SNP檢測(cè):檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性對(duì)于研究個(gè)體對(duì)不同疾病的易感性或者個(gè)體對(duì)特定藥物的不同反應(yīng)有著重要的意義，因分子信標(biāo)結(jié)構(gòu)的巧妙性，一旦SNP的序

簡(jiǎn)述各類抗體主要功能2022/05/31: 抗體依據(jù)重鏈抗原性的不同分為五類：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。各類抗體主要功能有：IgG：血清中含量最高，因此是最重要的抗感染分子，包括抗菌、抗病毒、抗毒素等。IgG還能激活補(bǔ)體，結(jié)合并增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能（調(diào)理作用和ADCC效應(yīng)），穿過胎盤，保護(hù)胎兒及新生嬰兒免受感染。IgA：分單體和雙體兩種。前者存在血清中，后者存在于黏膜表面及分泌液中，是黏膜局部抗感染的重要因素。IgM：是分子量最大，體內(nèi)受感染后最早產(chǎn)生的抗體，具有很強(qiáng)的激活補(bǔ)體和調(diào)理作用，因此是重要的抗感染因子，且常用于診

ELISA試劑盒解析泛素化結(jié)構(gòu)2022/05/24: ELISA試劑盒泛素化作為一類作用方式更加復(fù)雜且作用結(jié)果更加多樣的蛋白質(zhì)修飾,在細(xì)胞生命周期各個(gè)方面扮演著同樣重要的角色。泛素化過程通常需要3種泛素酶的協(xié)同作用，其中E1泛素激活酶(ubiquitin-activatingenzyme)與E2泛素偶聯(lián)酶(ubiquitin-conjugatingenzymes)激活泛素，將其鏈接到蛋白底物上，而泛素連接酶在靶蛋白的特異性識(shí)別以及泛素化系統(tǒng)活性的調(diào)控中起著zui重要的作用。RINGE3sRING-finger家族的E3均含有相似的E2結(jié)合結(jié)構(gòu)域，作

分享免疫熒光實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)2022/05/23: 標(biāo)記免疫技術(shù)發(fā)展蕞早的一種是免疫熒光，它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)，通過將抗體與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。免疫熒光步驟包括，細(xì)胞固定和通透，封閉，孵育一抗，二抗等。除了這些基本步驟，接下來的實(shí)驗(yàn)方法希望可以幫到您。1.細(xì)胞固定和通透為達(dá)到蕞佳的檢測(cè)效果，細(xì)胞需要經(jīng)過固定和通透。步驟很重要，細(xì)胞和抗原需要保證蕞佳的結(jié)構(gòu)，并利于抗體與抗原結(jié)合。通常情況下，2.抗體特異性免疫熒光需要用到特異性非常強(qiáng)的抗體，可以避免高背景和不理想的

人胰腺癌細(xì)胞培養(yǎng)基本條件2022/05/17: 人胰腺癌細(xì)胞培養(yǎng)基本條件：1、合適的細(xì)胞培養(yǎng)基合適的小鼠源細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的重要的條件之一，培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。2、優(yōu)質(zhì)血清目前，大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清。血清是細(xì)胞培養(yǎng)液中重要的成分之一，含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的多種生長(zhǎng)因子及其它營(yíng)養(yǎng)成分。3、無菌無毒細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細(xì)胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。在體外培養(yǎng)的細(xì)胞由于缺乏對(duì)微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染，或者自

清除被污染的細(xì)胞辦法2022/05/09: 培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。在細(xì)胞培養(yǎng)中如果污染細(xì)胞價(jià)值不大，宜棄之；在尋找原因后*消毒操作室，復(fù)蘇或重新購(gòu)置細(xì)胞，再進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。污染細(xì)胞價(jià)值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。1、細(xì)菌和真菌的清除抗生素對(duì)殺滅細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。預(yù)防用藥一般用雙抗生素，污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時(shí)，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期有效。2、支原體的清除(1)用MRA處理用MRA（MycoplasmaRemo

細(xì)胞不貼壁生長(zhǎng)可能原因及解決方法2022/04/24: 細(xì)胞不貼壁生長(zhǎng)可能原因及解決方法：可能原因：支原體污染。培養(yǎng)瓶瓶底不干bai凈。培養(yǎng)液pH值過堿（NaHCO3分解）。消化du液或培養(yǎng)液配制錯(cuò)誤、過期儲(chǔ)存、儲(chǔ)存不當(dāng)。細(xì)胞老化（如傳代前細(xì)胞已匯合導(dǎo)致失去貼附性）。接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。解決方法：縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度.分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體.清潔支架和培養(yǎng)箱.如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物.注意刷洗,或換用一次性塑料培養(yǎng)瓶.使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2（將培養(yǎng)液敞口放入培養(yǎng)箱也可）.重新配置消化液或培養(yǎng)液.啟用新

懸浮細(xì)胞的凍存及液氮罐使用說明2022/04/19: 懸浮細(xì)胞的凍存：1.直接將細(xì)胞收集到離心管。2.200g離心5min，棄上清。3.以生長(zhǎng)培養(yǎng)基（含20%胎牛血清）或100%胎牛血清重懸細(xì)胞至終濃度約107/ml，加入10%的DMSO。4.以每管1ml分裝至凍存管中。5.置于4oC30min，再轉(zhuǎn)入-20℃2h后，再放入-80℃冰箱冷凍過夜，次日保存到液氮罐中；或置于程序降溫盒中，按相關(guān)的操作指南進(jìn)行操作。液氮罐使用注意事項(xiàng)：1．初次使用前檢查容器內(nèi)膽是否清潔干燥，外部有無凹陷及嚴(yán)重碰傷，如有輕微凹陷及碰傷，經(jīng)試驗(yàn)其蒸發(fā)性能不變，仍可繼續(xù)使用，

PCR三個(gè)基本反應(yīng)步驟2022/04/06: 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：模板DNA經(jīng)

鋅指蛋白423抗體鑒定2022/03/29: 鋅指蛋白423抗體鑒定：1、抗體的效價(jià)鑒定鑒定效價(jià)的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng),瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價(jià),一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來鑒定。2、抗體的特異性鑒定抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力?？贵w的特異性高,它的識(shí)別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)測(cè)定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線,計(jì)算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時(shí)的濃度,并按公式計(jì)

發(fā)酵培養(yǎng)基pH值影響有哪些2022/03/23: 發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值，對(duì)微生物生長(zhǎng)具有非常明顯的影響，也是影響發(fā)酵過程中各種酶活的重要因素。pH值對(duì)微生物的生長(zhǎng)繁殖和產(chǎn)物合成的影響有以下幾個(gè)方面：①影響酶的活性，當(dāng)pH值抑制菌體中某些酶的活性時(shí)，會(huì)阻礙菌體的新陳代謝；②影響微生物細(xì)胞膜所帶電荷的狀態(tài)，改變細(xì)胞膜的通透性，影響微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和代謝產(chǎn)物的排泄；③影響培養(yǎng)基中某些組分的解離，進(jìn)而微生物對(duì)這些成分的吸收；④pH值不同，往往引起菌體代謝過程的不同，使代謝產(chǎn)物的質(zhì)量和比例發(fā)生改變。培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝，是引起pH值變化的主要原因，

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