GT115 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC126-01
GT115 Competent cells 20×100µl
pUC19（0.1ng/µl） 5µl
儲存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品介紹：
GT115 菌株基因組中含有 pir 基因，能夠表達(dá)π蛋白，用于識別 R6K 復(fù)制起始子。攜帶 R6K 復(fù)制起始子的質(zhì)粒（如 pCpGL-Basic，
pCpGL-CMV/EF1 等）可在該菌株中復(fù)制擴(kuò)增。通過刪除基因組中 sbcC 和 sbcD 兩個基因，使 GT115 細(xì)胞內(nèi)不能形成識別和切割發(fā)夾結(jié)構(gòu)
的 SbcCD 復(fù)合體，增強(qiáng)含發(fā)夾結(jié)構(gòu) DNA 的質(zhì)粒在細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性。該菌株含有 rpsL（
StrA）基因，對有抗性。該菌株具有核酸酶
(endA)突變、重組酶 (recA)突變，增強(qiáng)了外源 DNA 的穩(wěn)定性。GT115 感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 檢測轉(zhuǎn)化效率>1×10 8cfu/μg DNA。
基因型: F - mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ?M15 ?lacX74 nupG recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galE15 galK16 rpsL(StrA) endA1 ?dcm
uidA(?MluI)::pir-116 ?sbcC-sbcD
菌株抗性：對氨芐，，，和四環(huán)素敏感。對有抗性。
轉(zhuǎn)化步驟：
1. 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后，加入質(zhì)粒 DNA 或 5-10μl 連接產(chǎn)物到細(xì)胞中，用手指管底，輕輕混勻；
2. 冰水浴中放置 30 分鐘，不要晃動；
3. 42℃熱擊 60 秒鐘，不要晃動；
4. 冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動；
5. 加入 500μl 無菌的 LB 培養(yǎng)基；
6. 置于 37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復(fù)蘇培養(yǎng) 60 分鐘；
7. 取 50-100 μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃過夜培養(yǎng)。
（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清，留 100μl 左右的液體，用 200μl 吸頭輕輕吹打散菌塊，取 10μl重懸的菌液分多點滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來回劃線。這個方法可以獲得更大的單克隆菌落。此方法主要適用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化用涂布法。）
（質(zhì)粒快速轉(zhuǎn)化步驟：對于氨芐抗性的質(zhì)粒，將步驟 2 的時間縮短到 5 分鐘，完成步驟 4 后，可直接涂布或劃線于含氨芐抗性的 LB 平板上。其它抗性的質(zhì)粒仍需 60 分鐘的復(fù)蘇。）


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