JM108大腸桿菌 感受態(tài)細胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC125-01
JM108 Competent cells 20×100µl
pUC19（0.1ng/µl） 5µl
儲存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品介紹：
JM108 為大腸桿菌 K12 菌株。遺傳標記 gyrA96 表明 DNA 旋轉(zhuǎn)酶（拓撲異構(gòu)酶 II）有突變，突變的拓撲異構(gòu)酶 II 促進了質(zhì)粒 DNA 的
構(gòu)象超螺旋化，細胞中超螺旋質(zhì)粒占比大大提高。核酸內(nèi)切酶缺失(endA1)提高了質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型 (recA1)降低了插
入片段的同源重組概率。IS186 轉(zhuǎn)座子的插入導(dǎo)致 lon 蛋白酶表達缺陷。JM108 菌株非常適合重組質(zhì)粒構(gòu)建和高質(zhì)量超螺旋構(gòu)象質(zhì)粒的提取。
JM108 感受態(tài)細胞由特殊工藝制成，pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達 1×10 8 cfu/μg DNA。
基因型: F -endA1 recA1 gyrA96 thi-1 relA1 glnV44 Δ(lac-proAB) hsdR17 (rK- mK+)
菌株抗性：對氨芐，，，和四環(huán)素敏感。具有抗性。
轉(zhuǎn)化步驟：
1. 將感受態(tài)細胞置于冰水浴中化凍。待細胞剛化凍后，加入質(zhì)粒 DNA 或 5-10μl 連接產(chǎn)物到細胞中，用手指管底，輕輕混勻；
2. 冰水浴中放置 30 分鐘，不要晃動；
3. 42℃熱擊 60 秒鐘，不要晃動；
4. 冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動；
5. 加入 500μl 無菌的 LB 培養(yǎng)基；
6. 置于 37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復(fù)蘇培養(yǎng) 60 分鐘；
7. 取 50-100 μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃過夜培養(yǎng)。
（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清，留 100μl 左右的液體，用 200μl 吸頭輕輕吹打散菌塊，取 10μl重懸的菌液分多點滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來回劃線。這個方法可以獲得更大的單克隆菌落。此方法主要適用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化用涂布法。）
（質(zhì)?？焖俎D(zhuǎn)化步驟：對于氨芐抗性的質(zhì)粒，將步驟 2 的時間縮短到 5 分鐘，完成步驟 4 后，可直接涂布或劃線于含氨芐抗性的 LB 平板上。其它抗性的質(zhì)粒仍需 60 分鐘的復(fù)蘇。）


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