OmniMAX2-T1 大腸桿菌克隆感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC107-01 BC107-02
OmniMAX2-T1 Competent cells 10×100µl 20×100µl
pUC19（0.1ng/µl） 5µl 5µl
儲存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品介紹：
本公司生產(chǎn)的 OmniMAX2-T1 感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌 OmniMAX2-T1 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感
受態(tài)細(xì)胞，可用于 DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 10 8 cfu/µg，-70℃保存幾個月轉(zhuǎn)化
效率不發(fā)生改變。每支感受態(tài)可以酌情分裝使用，降低了實驗的成本。質(zhì)量穩(wěn)定，使用方便，質(zhì)優(yōu)價廉。
基因型：
F′{proAB+lacIqlacZΔM15Tn10(TetR)Δ(ccdAB)}mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80(lacZ)ΔM15Δ(lacZYA-argF)U
169endA1recA1supE44thi-1gyrA96relA1tonApanD
抗生素耐藥性：細(xì)胞具有四環(huán)素抗性。
產(chǎn)品特點：
1. 消除了mcrA，mrr，mcrBC和hsdRMS限制系統(tǒng), 高效克隆甲基化DNA，可用于文庫構(gòu)建；
2. 具有T1、T5噬菌體抗性，保護(hù)樣品免受噬菌體的污染；優(yōu)化的基因型，避免DNA重排；
3. 可用于藍(lán)、白斑篩選；
4. 制備單鏈DNA。
操作步驟（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）：
提示
?
感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
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進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
?
為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到。
1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
（一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。應(yīng)注意所用 DNA 體積
不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。)以下實驗以 100μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。
2. 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA ( 100μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被 1ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA所飽和），輕
輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置 30 分鐘。
3. 將離心管置于 42℃水浴中放置 60 秒鐘，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻 2 分鐘，該過程不
要搖動離心管。（此步驟也可將離心管置于室溫進(jìn)行，時間不需十分準(zhǔn)確，夏季或室溫較高時，可放
置
5-8 分鐘左右；如果室溫較低，可延長時間至 8-15 分鐘左右。條件允許建議使用 42℃熱激方法。）
4. 向每個離心管中加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃,150rpm，搖
床振蕩培養(yǎng) 60 分鐘，目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
5. 無菌條件下，取適量菌液加到含相應(yīng)抗生素的 LB 固體培養(yǎng)基平板上，用無菌的細(xì)菌涂布器或玻璃珠
將細(xì)胞均勻涂開。等平板中的液體吸收后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時。（涂布用量可根據(jù)
具體實驗來調(diào)整。轉(zhuǎn)化質(zhì)粒在 10ng 左右，90mm 平皿涂布 100µl，55mm 平皿涂布 50µl；連接產(chǎn)物的
轉(zhuǎn)化菌液建議離心后倒掉大部分上清，余 200µl，取 100µl 用于涂布。）
6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，視平板上菌落生長情況決定去留。
相關(guān)試劑及培養(yǎng)基的制備方法：
1. LB 液體培養(yǎng)基：稱取 10g Tryptone，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 燒杯中。加入約 800ml 的
去離子水，溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。加去離子水定容至 1L。分裝
后，121℃高壓滅菌 20 分鐘。
2. SOB 和 SOC 培養(yǎng)基：稱取 20g Tryptone，5g Yeast Extract，0.5g NaCl 置于 1L 燒杯中加入約 800ml 的
去離子水，溶解后再補(bǔ)加 10ml 250mM KCl 溶液，滴加 5M NaOH（約 0.2ml）調(diào) pH 至 7.0。加
入去離子水將培養(yǎng)基定容至 1L。121℃滅菌 20 分鐘。使用時加入 5ml 滅菌的 2M MgCl2溶液（此種
培養(yǎng)基稱為 SOB）。再補(bǔ)加經(jīng) 0.22µm 過濾除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml（此種培養(yǎng)基為 SOC）。
3. 轉(zhuǎn)化復(fù)蘇細(xì)菌用的液體 LB 培養(yǎng)基或 SOC 培養(yǎng)基：可以一次高壓 50ml 液體培養(yǎng)基，無菌狀態(tài)按 1ml
每管分裝于高壓滅菌的 1.5ml 離心管中，裝于自封袋中，凍存于-20℃中，每次用一支?？梢詷O大地避
免培養(yǎng)基污染和減少勞動量。
4. LB 固體選擇培養(yǎng)基：100ml LB 液體培養(yǎng)基中加入 1.5g 瓊脂粉，搖勻后，121℃高壓滅菌 20 分鐘。
冷卻至 50℃左右時加入相應(yīng)濃度的抗生素（如 AMP 濃度通常為 100µg/ml），混勻后倒在細(xì)菌用的無
菌培養(yǎng)皿中，等瓊脂凝固后即可使用。
5. IPTG：稱量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于 40ml 滅菌水，濃度為 200mmol/L。用無菌
0.22μm過濾膜過濾除菌。小份分裝后，-20℃保存。
6. X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml，小份分裝（1ml/份）后，-20℃避光保存。


南京萬木春生物科技有限公司（Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向國內(nèi)外市場專業(yè)研發(fā)、生產(chǎn)和銷售細(xì)胞、 外泌體、ELISA 試劑盒、 抗體、重組蛋白及相關(guān)試劑。產(chǎn)品在免疫學(xué)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、代謝、 神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域內(nèi)都有科學(xué)文獻(xiàn)發(fā)表，被國內(nèi)外多所大學(xué)、研究機(jī)構(gòu)和藥學(xué)平臺使用并發(fā)表文獻(xiàn)多達(dá)1000多次。我公司憑借優(yōu)異的產(chǎn)品和完善的服務(wù) 體系現(xiàn)已受到廣大國內(nèi)外用戶的青睞和認(rèn)可。
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抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富，一抗 1 萬余種，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項發(fā)明，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白 1000 余種。


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