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人白細(xì)胞介素6ELISA檢測(cè)試劑盒操作事項(xiàng)2023/12/26: 操作步驟:實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，并盡量避免起泡。1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μL，標(biāo)準(zhǔn)品孔分別加入依次梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，待測(cè)樣品孔加待測(cè)樣品100μL，給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育60分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。2.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μL/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。立即每孔加入配好的生物素標(biāo)記的抗IL-6蛋白抗體工作液100μL（

PCR反應(yīng)特異性決定因素與提高方法2023/12/18: PCR反應(yīng)特異性主要決定因素：1引物。引物的結(jié)構(gòu)和長(zhǎng)度是PCR特異性的關(guān)鍵。此外，引物濃度過(guò)高會(huì)增大形成引物二聚體的概率，從而降低PCR特異性。2、復(fù)性溫度。在Tm值允許范圍內(nèi)，選擇較高的復(fù)性溫度可大大減少引物和模板間的非特異性結(jié)合，提高PCR反應(yīng)的特異性。3、延伸時(shí)間。延伸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增帶的出現(xiàn)。4、Mg2+濃度。Mg2+濃度對(duì)PCR擴(kuò)增的特異性有顯著影響。Mg2+濃度過(guò)高時(shí)，容易出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，使反應(yīng)特異性降低。5、DNA聚合酶的種類和數(shù)量。不同種類的酶對(duì)PCR特異性的影響程度

穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選與構(gòu)建2023/12/11: 穩(wěn)定細(xì)胞株是一種常用于基因表達(dá)、藥物篩選和蛋白質(zhì)表達(dá)等領(lǐng)域的工具。但是，穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選需要經(jīng)過(guò)一系列的步驟和實(shí)驗(yàn)，下面介紹一下穩(wěn)定細(xì)胞株篩選的兩種方法和穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選簡(jiǎn)要步驟：一、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染法先把質(zhì)粒整合到染色體上后，用相應(yīng)的質(zhì)粒DNA中的抗性標(biāo)志來(lái)篩選該細(xì)胞系，單克隆篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。1、篩選濃度測(cè)定，以10~14天細(xì)胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度；2、進(jìn)行細(xì)胞接種，轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前天接種細(xì)胞，各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種細(xì)胞的生長(zhǎng)率和細(xì)胞形狀而定。進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞密度應(yīng)達(dá)到60%~80%覆蓋；3、

ELISA試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)灰區(qū)解析2023/12/04: 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。它是應(yīng)用最多的一種免疫酶技術(shù)。ELISA測(cè)定的陽(yáng)性判斷值,通常是將大量陰性和陽(yáng)性人群的測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后確定的,其確定依據(jù)為判斷結(jié)果的假陽(yáng)性和假陰性率最di。在陽(yáng)性判斷值周圍一定范圍內(nèi)之外的測(cè)定結(jié)果可歸為可疑,亦即ELISA測(cè)定的“灰區(qū)"。“灰區(qū)"的大小可用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法確定。測(cè)定結(jié)果處于“灰區(qū)"的樣

實(shí)驗(yàn)室血清的應(yīng)用與保存2023/11/28: 血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)確的應(yīng)用及保存血清，才能使血清施展應(yīng)有的效果；現(xiàn)來(lái)了解實(shí)驗(yàn)室血清的應(yīng)用與保存：1.應(yīng)用前處理:大部分血清在應(yīng)用前必需滅活處置，即560C30分鐘。滅活的目標(biāo)是去除血清中的補(bǔ)體身分，防止補(bǔ)體對(duì)細(xì)胞發(fā)生毒性同化。血清顛末滅活也會(huì)喪失一些對(duì)細(xì)胞

蛋白濃度測(cè)定三種常見(jiàn)方法操作要點(diǎn)2023/11/20: 一、酪安酸差色光譜法：1.打開分光光度劑，預(yù)熱30分鐘，是紫外燈處于穩(wěn)定發(fā)光狀態(tài)2.在2容積為1mlde微量石英比色杯中分別加入900ulPH7.4,PH12.0的0.1mol/l磷酸緩沖液，把盛有PH12.0緩沖液的比色杯放入樣品杯中放入支架上，把盛有PH7.4緩沖液的比色杯放入到參比杯的支架上，然后準(zhǔn)確的測(cè)出295nm波長(zhǎng)下的光吸收值，或用250－350nm掃描3.在上述的2個(gè)比色杯中分別加入100UL的待測(cè)樣品液，小心振蕩混勻4.重復(fù)2操作5.計(jì)算蛋白濃度：﹝(PH為12.0A295-PH

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程及注意事項(xiàng)2023/11/13: 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程：1、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等。2、取材在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過(guò)一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過(guò)程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無(wú)取材這一過(guò)程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。理論上講各種動(dòng)物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實(shí)際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個(gè)體的組織容易培養(yǎng)，分化程度低

細(xì)胞凋亡一般階段分析2023/11/06: 細(xì)胞凋亡（apoptosis）是指細(xì)胞在一定的生理或病理?xiàng)l件下，受內(nèi)在遺傳機(jī)制控制，按照自身程序主動(dòng)性、生理性的死亡過(guò)程。細(xì)胞凋亡受凋亡相關(guān)基因調(diào)控，故又稱為程序性細(xì)胞死亡（programmedcelldeath，PCD）。細(xì)胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征。在形態(tài)上，可見(jiàn)凋亡細(xì)胞與周圍細(xì)胞脫離接觸，細(xì)胞變園，細(xì)胞膜向內(nèi)皺縮、胞漿濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、細(xì)胞核固縮破裂呈團(tuán)塊狀或新月?tīng)罘植?、?nèi)質(zhì)網(wǎng)和細(xì)胞膜進(jìn)一步融合將細(xì)胞分成多個(gè)完整包裹的凋亡小體，凋亡小體最后被吞噬細(xì)胞吞噬消化。在凋亡過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)

IHC實(shí)驗(yàn)切片染色后背景太深現(xiàn)象的原因2023/10/30: 免疫組織化學(xué)（IHC）是利用抗原抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)來(lái)檢測(cè)和定位組織和細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)的一門技術(shù)。全片著色是指整個(gè)切片全都染上了顏色，著色的強(qiáng)度可深可淺，總之，分不清那些組織陽(yáng)性那些組織是陰性。切片染色后背景太深，出現(xiàn)特異性與非特異性著色。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因有：1、抗體濃度過(guò)高：一抗?jié)舛冗^(guò)高是常見(jiàn)的原因之一。解決辦法是，每次使用新抗體前應(yīng)當(dāng)對(duì)其工作濃度進(jìn)行測(cè)試，使每一抗體個(gè)體化，找到適合自己實(shí)驗(yàn)室的理想工作濃度，既使是即用型的抗體也應(yīng)如此，不能只簡(jiǎn)單的按說(shuō)明書進(jìn)行染色。2、抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或

PCR反應(yīng)開始前的準(zhǔn)備工作與操作步驟2023/10/23: PCR反應(yīng)開始前的準(zhǔn)備工作：PCR反應(yīng)開始前，你需要準(zhǔn)備好DNA模板（基因組DNA或者反轉(zhuǎn)錄制備的cDNA）,特異性的引物（手動(dòng)設(shè)計(jì)或利用軟件設(shè)計(jì)）并選擇合適的商業(yè)化DNA聚合酶（根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的不同做出決定）。1、DNA聚合酶的選擇。市面上有多種DNA聚合酶可供選擇，他們的特性也各有不同。因此你需要選擇自己實(shí)驗(yàn)需要的產(chǎn)品。通常我們將DNA聚合酶分為高保真性聚合酶和普通的Taq聚合酶。如果你希望得到?jīng)]有任何突變的PCR產(chǎn)物，那應(yīng)當(dāng)選擇高保真聚合酶。若你只是希望判斷特異性序列的存在與否，那普通的Ta

PCR反應(yīng)結(jié)果問(wèn)題分析研究2023/10/16: 聚合酶鏈?zhǔn)絇CR反應(yīng)是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制。PCR反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制備，②引物的質(zhì)量與特異性，③酶的質(zhì)量，④PCR循環(huán)條件。PCR反應(yīng)出現(xiàn)假陰性，不出現(xiàn)擴(kuò)增條帶原因亦應(yīng)針對(duì)上述環(huán)節(jié)進(jìn)行分析研究。一、模板：①模板中含有雜蛋白質(zhì)，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質(zhì)沒(méi)有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白，④在提取制備模板時(shí)丟失過(guò)多，或吸入酚。⑤模板核酸變性不徹di。在酶和引物質(zhì)量好時(shí)，不出現(xiàn)擴(kuò)增帶，極有可能是標(biāo)本的消化處

ELISA試驗(yàn)包被抗體抗原選取敘述2023/10/08: ELISA試劑盒包被用抗原或抗體的濃度，包被的溫度和時(shí)間，包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)的特點(diǎn)和材料的性質(zhì)而選定?？贵w和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置過(guò)夜，37℃中保溫2小時(shí)被認(rèn)為具有同等的包被效果。包被的zui適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化，每批材料需通過(guò)實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為100ng/ml-20u

校準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品使用闡明2023/10/03: 校準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品三者同為參考物質(zhì)。參考物質(zhì)是一種材料或者物質(zhì)，某一種或多種特性值只夠均勻并被良好確定，用于校準(zhǔn)測(cè)量系統(tǒng)，評(píng)價(jià)測(cè)量程序或?yàn)椴牧腺x值。但三者并非用一個(gè)概念，他們有各自不同的應(yīng)用場(chǎng)合。臨床上常常有很多錯(cuò)誤的應(yīng)用，例如將不同廠商的校準(zhǔn)品應(yīng)用于檢測(cè)系統(tǒng)；使用給定值的質(zhì)控品評(píng)價(jià)檢測(cè)系統(tǒng)；使用質(zhì)控品來(lái)校準(zhǔn)檢測(cè)系統(tǒng)等等。校準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品的來(lái)源及定值方式，得出正確使用三種參考物質(zhì)的方法。1、傳統(tǒng)的方法的缺點(diǎn)傳統(tǒng)的檢驗(yàn)項(xiàng)目，要使得檢驗(yàn)結(jié)果可靠或者有依據(jù)，往往會(huì)使用一個(gè)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品同樣

分享細(xì)胞復(fù)蘇傳代與凍存注意事項(xiàng)2023/09/25: 1、細(xì)胞復(fù)蘇將凍存細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動(dòng)促進(jìn)其融化。移人15ml離心管中，加入10ml預(yù)熱的DMEMwan全培養(yǎng)基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。加入10mlDMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入10mlDMEMwan全培養(yǎng)基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2、細(xì)胞傳代細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí)．去培養(yǎng)基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人細(xì)胞培養(yǎng)箱3min。加人1mlDMEMwan全

核酸、抗原及抗體檢測(cè)PCR技術(shù)探究2023/09/22: PCR技術(shù)從原本的實(shí)驗(yàn)室走向大眾視野。伴隨著疫情狀況的不斷改變，核酸檢測(cè)這種技術(shù)逐漸為大眾所熟知，再一次被大眾知道的，是抗原檢測(cè)。但是這些檢測(cè)方法到底是檢測(cè)什么，又有什么聯(lián)系和區(qū)別呢？在搞清楚這幾種檢測(cè)方法之前，我們要先搞清楚病毒的結(jié)構(gòu)。病毒基本是由核酸和外層的蛋白質(zhì)外殼構(gòu)成。核酸就是DNA或者RNA，是病毒的遺傳物質(zhì)，外部蛋白質(zhì)外殼又叫衣殼，起到保護(hù)核酸和作為抗原引起免疫的作用。核酸檢測(cè)作為最早被大眾熟知的檢測(cè)方法，核酸檢測(cè)即是通過(guò)PCR方法擴(kuò)增病毒的RNA對(duì)應(yīng)的DNA序列，在擴(kuò)增體系中加入特

細(xì)胞凍存?實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)2023/09/11: 隨著溫度降低，細(xì)胞內(nèi)的酶活性會(huì)逐漸降低，到-70℃左右，酶活性幾乎為0，代謝活動(dòng)停止，可以實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期保存。然而，隨著溫度降低，細(xì)胞內(nèi)外的水分也會(huì)“結(jié)冰”并形成冰晶，冰晶能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白變性等，能引起細(xì)胞死亡。因此常加入冷凍保護(hù)劑甘油或二甲基亞砜（DMSO）。DMSO能快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，降低冰點(diǎn)，延緩凍存過(guò)程，同時(shí)增加細(xì)胞膜的通透性，提高細(xì)胞內(nèi)離子濃度，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。實(shí)驗(yàn)步驟：1.制備凍存液，凍存液比例：本實(shí)

ELISA檢測(cè)試劑盒適用范圍及樣品收集2023/09/08: 適用范圍：1．適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；2．可檢測(cè)動(dòng)物類型豐富：人、猴、大鼠、小鼠、兔、豬、犬、牛、綿羊、雞等3．可檢測(cè)指標(biāo)齊全：白介素，干擾素，血管緊張素，肺炎衣原體，趨化因子、生長(zhǎng)因子基質(zhì)金屬蛋白酶、炎癥因子、血管生成素等等指標(biāo)。樣品收集:1.血清：全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無(wú)熱原，無(wú)內(nèi)毒素試管。2.血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離

生物消息: 細(xì)胞因子共同作用特點(diǎn)2023/08/28: 細(xì)胞因子(cytokine，CK)是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì)，具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長(zhǎng)、APSC多能細(xì)胞以及損傷組織修復(fù)等多種功能。細(xì)胞因子可被分為白細(xì)胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子超家族、集落刺激因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子等。眾多的細(xì)胞因子有以下共同的作用特點(diǎn)：1、絕大多數(shù)細(xì)胞因子為質(zhì)量小于25kDa的糖蛋白，質(zhì)量低者如IL-8僅8kDa。多數(shù)細(xì)胞因子以單體形式存在，少數(shù)細(xì)胞因子如IL-5、IL-12、M-CSF和TGF-β等以雙體

資訊推送：微生物培養(yǎng)基配制和滅菌2023/08/21: 微生物培養(yǎng)基是供微生物生長(zhǎng)、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。由于微生物具有不同的營(yíng)養(yǎng)類型，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同，加之研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營(yíng)養(yǎng)角度分析，微生物培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)素以及水分等。另外，培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。為了達(dá)到特定要求的研究，需要進(jìn)行培養(yǎng)基配制和滅菌。1.配制溶液向容器內(nèi)加入所需水量的一部分，按照培養(yǎng)基配方，稱取各種原料，依次加入使其溶解，最后補(bǔ)足所需

實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)知識(shí)合集2023/08/16: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitativePCR,qPCR）通過(guò)對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中的每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的定性及定量分析。1.在qPCR技術(shù)中重要的參數(shù)指標(biāo)有哪些？擴(kuò)增及溶解曲線：擴(kuò)增曲線是PCR過(guò)程中，以循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo)，以熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)所繪制的曲線。主要用于反映qPCR的動(dòng)態(tài)進(jìn)程；溶解曲線是用來(lái)驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物特異性的，如果產(chǎn)物是單一條帶，溶解曲線就會(huì)出現(xiàn)單峰，如果有引物二聚體或其它非特異性擴(kuò)增，就會(huì)出現(xiàn)至少兩個(gè)峰。熒光域值（threshold）:是在熒光擴(kuò)增曲線

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