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逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)2024/05/20: 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction,RT-PCR）的原理是：提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，而獲得目的基因或檢測(cè)基因表達(dá)。實(shí)驗(yàn)步驟：一、總RNA的提取按照總RNA提取實(shí)驗(yàn)步驟提取組織或細(xì)胞中的總RNA。二、cDNA第一鏈的合成目前試劑公司有多種cDNA第一鏈試劑盒出售，其原理基本相同，但操作步驟不一?，F(xiàn)以

培養(yǎng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中污染途徑追蹤2024/05/13: 在培養(yǎng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中，難免培養(yǎng)的細(xì)胞被污染了，得不到想要的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，那么你知道細(xì)胞培養(yǎng)的污染來(lái)源有哪些嗎？細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中污染的來(lái)源主要有以下幾條途徑：1、不潔的動(dòng)物組織標(biāo)本很多動(dòng)物組織本該是無(wú)菌的(直接與外界相通的呼吸道和消化道、泌尿系統(tǒng)除外)，但由于取材時(shí)不小心也會(huì)有污染的機(jī)會(huì)。組織本身含有細(xì)菌，如取材時(shí)不用濃的抗生素洗液洗滌浸泡，也會(huì)帶菌，造成細(xì)胞污染。2、空氣空氣中含有大量的微生物，如果操作室與外界隔離不嚴(yán)或消毒不充分下，很容易造成污染。另外，凈化工作臺(tái)使用過(guò)久，濾板未定期更換或長(zhǎng)久不更換，

細(xì)胞污染預(yù)防措施參考2024/05/06: 細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境，氧氣、二氧化碳是細(xì)胞生存的必要條件。二氧化碳不僅是細(xì)胞生長(zhǎng)的必需成分，還與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。氧氣參與細(xì)胞的三羧酸循環(huán)，為細(xì)胞生存、代謝與合成提供能量；二氧化碳既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物，是細(xì)胞生長(zhǎng)的必需成分，又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。在開(kāi)放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳?xì)怏w比例為宜。細(xì)胞污染的預(yù)防：①實(shí)驗(yàn)用品防止污染。細(xì)胞培養(yǎng)所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要*，各種溶液滅菌要仔細(xì)，并在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)檢測(cè)陰性后才能使用。操作室及剩

微生物分離純化多種方法分述2024/04/28: 含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物（mixedculture）。如果在一個(gè)菌落中所有細(xì)胞均來(lái)自于一個(gè)親代細(xì)胞，那么這個(gè)菌落稱為純培養(yǎng)（pureculture）。在進(jìn)行菌種鑒定時(shí)，所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物。得到純培養(yǎng)的過(guò)程稱為分離純化，方法有許多種。１、傾注平板法首先把微生物懸液通過(guò)一系列稀釋，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40-50℃左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合，然后把這混合液傾注到無(wú)菌的培養(yǎng)皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng)。單一細(xì)胞經(jīng)過(guò)多次增殖后形成一個(gè)菌落，取單個(gè)

ELISA免疫分析操作要點(diǎn)2024/04/22: ELISA免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理，對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個(gè)部分組成：免疫識(shí)別，信號(hào)輸出和數(shù)據(jù)處理。操作步驟:免疫識(shí)別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體，而后利用抗體識(shí)別待測(cè)的抗原（通常是疾病的蛋白質(zhì)生物標(biāo)記物，病毒，細(xì)菌等等，從復(fù)雜待測(cè)液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根過(guò)氧化酶（HorseradishPeroxidase,HRP）、熒光或放射性標(biāo)記的抗體通過(guò)直

實(shí)驗(yàn)室菌種應(yīng)用全面解析2024/04/16: 幾種菌株概述：標(biāo)準(zhǔn)菌株：直接從菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得并至少定義到屬或種的水平的菌株。通常默認(rèn)為第0代菌株。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株：將標(biāo)準(zhǔn)菌株在實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)接一代后得到的一套相同的獨(dú)立菌株。通常為第1代或第2代菌株。儲(chǔ)備菌株：從標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株轉(zhuǎn)接一代獲得的培養(yǎng)物。通常為第2代或第3代菌株。工作菌株：由標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株、儲(chǔ)備菌株或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（經(jīng)證明或未經(jīng)證明）轉(zhuǎn)接一代獲得的菌株。通常為第3-5代菌。傳代：每一次的轉(zhuǎn)接培養(yǎng)都是一次傳代的過(guò)程，可以使用液體、固體或半固體培養(yǎng)基。注意事項(xiàng)：菌株傳代只能由上往下傳，儲(chǔ)備菌株可以做為工作

鑒別生化試劑盒是否適合實(shí)驗(yàn)要求方法大全2024/04/08: 通常生化試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑，前者特別適用于半自動(dòng)生化分析儀和小型自動(dòng)生化分析儀，使用方便，缺點(diǎn)是穩(wěn)定性較差。與單試劑相比，雙試劑提高了抗干擾能力，具有穩(wěn)定性能較好，可消除樣品自身空白等特點(diǎn)。此外還有多項(xiàng)同測(cè)組合試劑、濃縮試劑等。對(duì)新的試劑盒，我們首先要查看其資質(zhì)是否齊全，是否為合法有效試劑，是否有相關(guān)的臨床試驗(yàn)驗(yàn)證等。其次，在本實(shí)驗(yàn)室，可做以下工作來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證是否適合使用。一、試劑空白吸光度用蒸餾水做空白，用zhi定的空白液加入試劑作為樣品測(cè)試，在測(cè)試主波長(zhǎng)下，記錄測(cè)試啟動(dòng)時(shí)的吸光

微生物培養(yǎng)基滅菌方法合集2024/04/01: 培養(yǎng)基（Medium）是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有水、氮源、無(wú)機(jī)鹽（包括微量元素）、碳源、生長(zhǎng)因子（維生素、氨基酸、堿基、抗菌素、色素、激素和血清等）等。培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì)，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對(duì)一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基（如組織培養(yǎng)基），較長(zhǎng)時(shí)間的貯存，必須放在3-6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長(zhǎng)期保管，均改制成粉末。培養(yǎng)基由于富含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，

RT-PCR 實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)要素有什么?2024/03/25: RT-PCR就是逆轉(zhuǎn)錄PCR（reversetranscriptionPCR）或者稱反轉(zhuǎn)錄PCR（reversetranscription-PCR,RT-PCR），是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的一種廣泛應(yīng)用的變形。在RT-PCR中，一條RNA鏈被逆轉(zhuǎn)錄成為互補(bǔ)DNA，再以此為模板通過(guò)PCR進(jìn)行DNA擴(kuò)增。逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）是以RNA為模板合成DNA的過(guò)程，即RNA指導(dǎo)下的DNA合成，逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)包括3大要素，分別是引物、逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA模板：1.引物：逆轉(zhuǎn)錄引物主要有

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)質(zhì)量控制需考慮方面闡述2024/03/18: 實(shí)驗(yàn)室為了確保檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠，以保證檢測(cè)報(bào)告的質(zhì)量，在檢驗(yàn)檢測(cè)工作中必須有一個(gè)質(zhì)量控制的過(guò)程，必須明確質(zhì)量控制各階段可能影響檢測(cè)報(bào)告的各項(xiàng)因素。從而對(duì)這些因素采取相應(yīng)的措施加以管理和控制，以使其過(guò)程處于受控狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)室主要從實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、設(shè)備、樣品、過(guò)程四個(gè)方面進(jìn)行質(zhì)量控制：一、環(huán)境質(zhì)量的控制1.檢測(cè)場(chǎng)所的環(huán)境條件應(yīng)滿足檢測(cè)工作的需要，應(yīng)采取措施確保實(shí)驗(yàn)室的內(nèi)務(wù)良好，必要時(shí)制定專門(mén)的工作程序。對(duì)影響分析檢測(cè)質(zhì)量的區(qū)域加以控制，限制進(jìn)入或使用該區(qū)域，并根據(jù)其特定的情況確定控制的程度。將不相容活動(dòng)

細(xì)胞活躍措施方法2024/03/11: 細(xì)胞，生物學(xué)名詞，生物體的結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。一般具有細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜。植物細(xì)胞的細(xì)胞膜外還有細(xì)胞壁。體形極微，在顯微鏡下始能窺見(jiàn)。形狀多種多樣，主要由細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)構(gòu)成，表面有薄膜。動(dòng)植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)大致相同。植物細(xì)胞質(zhì)膜外有細(xì)胞壁，細(xì)胞壁中常有質(zhì)體，動(dòng)物細(xì)胞質(zhì)中常有中心體，而高等植物細(xì)胞中則無(wú)。細(xì)胞有運(yùn)動(dòng)、營(yíng)養(yǎng)和繁殖等機(jī)能。細(xì)胞是許多生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的主角。如果細(xì)胞心情不好，那么實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也不會(huì)好到哪兒去。如何讓細(xì)胞快樂(lè)？下面就仔細(xì)了解一下吧!1.確保所有實(shí)驗(yàn)室材料都無(wú)菌交叉污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大

ELISA實(shí)驗(yàn)定性測(cè)定結(jié)果判斷方法解讀2024/03/04: ELISA實(shí)驗(yàn)定性測(cè)定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出"有"或"無(wú)"的簡(jiǎn)單回答，分別用"陽(yáng)性"、"陰性"表示。"陽(yáng)性"表示該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無(wú)反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來(lái)表示反應(yīng)的強(qiáng)度，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測(cè)定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)，呈陽(yáng)性反應(yīng)的稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性具定量意義。在間接法和夾心法ELSIA中，陽(yáng)性孔呈色深于陰性孔

ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)主要檢測(cè)方法敘述2024/02/26: ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）是一種免疫測(cè)定方法，通常用于量化樣品中特定目標(biāo)的水平。常規(guī)用于ELISAs的樣本包括血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、細(xì)胞裂解液、唾液、組織裂解液和尿液。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)通常在96孔微孔板中進(jìn)行，微孔板上涂有對(duì)相關(guān)分析物的特異性捕獲抗體。在與實(shí)驗(yàn)樣品、標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌贩趸瘯r(shí)，目標(biāo)分析物被該抗體捕獲，一個(gè)共軛的檢測(cè)抗體與目標(biāo)分析物上的不同表位結(jié)合。隨后加入底物溶液，產(chǎn)生一個(gè)與分析物結(jié)合量成比例的信號(hào)。ELISA的三個(gè)主要方法是夾心法、間接法、和競(jìng)爭(zhēng)法，每種類型的ELISA都有

ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題解答2024/02/19: ELISA是一種廣泛應(yīng)用在測(cè)定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。1.產(chǎn)品有哪幾種規(guī)格？可檢測(cè)多少個(gè)樣本？產(chǎn)品規(guī)格為96T。每次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線一般設(shè)7個(gè)不同濃度，加上空白孔，標(biāo)準(zhǔn)曲線一共需要8個(gè)孔。因此，一個(gè)96T試劑盒最多可以測(cè)定88個(gè)樣本（不做重復(fù)且一次用完）。板條可拆卸，可滿足您少量多次實(shí)驗(yàn)需求。2.產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何？產(chǎn)品在研發(fā)前期已通過(guò)嚴(yán)格的穩(wěn)定測(cè)試，發(fā)貨前亦須通過(guò)檢測(cè)并提供質(zhì)檢報(bào)告，在市場(chǎng)上深受廣大客戶的贊許！3.一次ELISA實(shí)驗(yàn)需要多長(zhǎng)時(shí)間？雙抗體夾心ELISA法一次實(shí)驗(yàn)

培養(yǎng)基滅菌的原理和方法2024/02/05: 所謂滅菌就是殺死一切微生物，包括微生物的營(yíng)養(yǎng)體和芽孢，這一概念不同于消毒。滅菌的方法很多，在實(shí)驗(yàn)室可以使用干熱滅菌、對(duì)于環(huán)境可以使用化學(xué)試劑滅菌，但化學(xué)試劑的滅菌方法有很大的限制。在工業(yè)生產(chǎn)中，對(duì)于培養(yǎng)基、管道、設(shè)備的滅菌，通常采用蒸汽加熱到一定的溫度，并保溫一段時(shí)間的滅菌方法，稱之為濕熱滅菌。濕熱滅菌的顯著優(yōu)點(diǎn)是：使用方便，無(wú)污染，而且其冷凝水可以直接冷凝在培養(yǎng)基中，也可以通過(guò)管道排出。下面介紹滅菌方法：一、化學(xué)物質(zhì)滅菌原理：藥物與微生物細(xì)胞中的成分反應(yīng)，使蛋白質(zhì)變性酶失活。使用范圍：器皿、雙

PCR反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物出問(wèn)題分析2024/01/29: 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是在體外進(jìn)行的由引物介導(dǎo)的酶促DNA擴(kuò)增反應(yīng)。PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中擴(kuò)增產(chǎn)物常出現(xiàn)各種問(wèn)題，以下列舉解決方案供參考：一、擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠中涂布或成片狀條帶彌散（1）酶量過(guò)高。減少酶量；酶的質(zhì)量差，調(diào)換另一來(lái)源的酶。（2）dNTP濃度過(guò)高。減少dNTP的濃度。（3）MgCl2濃度過(guò)高?？蛇m當(dāng)降低其用量。（4）模板量過(guò)多。質(zhì)粒DNA的用量應(yīng)（5）引物濃度不夠優(yōu)化。對(duì)引物進(jìn)行梯度稀釋重復(fù)PCR反應(yīng)。（6）循環(huán)次數(shù)過(guò)多；增加模板量減少循環(huán)次數(shù)至30，縮短退火時(shí)間及延伸時(shí)間，或改用二種溫

血清的作用及血清的篩選方法步驟2024/01/22: 血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用主要有以下幾點(diǎn)：1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，特別是基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，還包括一些主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物；2.提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力；3.血清中含有一些微量元素，有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用；4.細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源；5.血清蛋白形成了血清

PCR反應(yīng)條件的選擇技巧總結(jié)2024/01/15: PCR反應(yīng)條件的選擇技巧主要體現(xiàn)在溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)上，溫度過(guò)高，延伸時(shí)間不夠都會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有很大的影響，以下看實(shí)戰(zhàn)總結(jié)方法技巧。一、溫度和時(shí)間溫度與時(shí)間的設(shè)置：基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三個(gè)溫度點(diǎn)。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結(jié)合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對(duì)于較短靶基因(長(zhǎng)度為100～300bp時(shí))可采用二溫度點(diǎn)法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合

原代培養(yǎng)技術(shù)的重點(diǎn)關(guān)注事項(xiàng)2024/01/08: 原代培養(yǎng)：字面意思即第1次培養(yǎng)，但實(shí)際上，通常把第1代至第10代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代培養(yǎng)技術(shù)的重點(diǎn)關(guān)注事項(xiàng)：一、注意污染1、嚴(yán)格進(jìn)行動(dòng)物皮膚消毒，使用三套器械取材。新生動(dòng)物皮膚先用2%碘酒液消毒，成年鼠先用3%~5%碘酒液消毒后用75%酒精消毒。2、嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，防止細(xì)菌、霉菌、支原體污染，避免化學(xué)物質(zhì)污染。自取材開(kāi)始，保持所有組織細(xì)胞處于無(wú)菌條件。細(xì)胞計(jì)數(shù)可在有菌環(huán)境中進(jìn)行。3、吸取液體前，瓶口和吸管進(jìn)行火焰消毒；吸取液體時(shí)，避免瓶口和吸管碰撞。4、離心管入臺(tái)前，管口、管

PCR反應(yīng)的基本條件溫度循環(huán)參數(shù)淺析2024/01/02: PCR反應(yīng)的基本條件溫度循環(huán)參數(shù)：1．變性溫度與時(shí)間PCR反應(yīng)中模板DNA的變性十分重要。只有全性的模板DNA和PCR產(chǎn)物雙鏈全解開(kāi)，才能有效的和引物結(jié)合。這種結(jié)合是PCR擴(kuò)增的基礎(chǔ)。變性溫度越高，時(shí)間越長(zhǎng)變性就越充分。但溫度過(guò)高、時(shí)間過(guò)長(zhǎng)又會(huì)影響TaqDNA聚合酶的活性，所以通常選用變性溫度為95℃30s為宜。在PCR反應(yīng)中第一個(gè)循環(huán)變性最重要，需時(shí)間較長(zhǎng)，因模板DNA的鏈比較長(zhǎng)。2．復(fù)性溫度與時(shí)間變性溫度是PCR反應(yīng)成敗的關(guān)鍵，復(fù)性溫度決定著PCR的特異性。溫度越低復(fù)性越好，但是容易出現(xiàn)引物

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