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細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的情況2019/12/27
細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染情況總結(jié)如下:常見的污染如下：1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細(xì)胞生長影響明顯。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理2、霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡
常見菌類污染情況圖片2019/12/18
常見菌類污染情況圖片1.桿菌常見的有大腸桿菌，長度通常在2-5um左右。2.球菌常見的有葡萄球菌，直徑通常在1-2um左右。3.霉菌常見的有毛霉，菌絲寬2-10um左右，長度短則幾十um，長則可達(dá)幾mm。以上3種是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的菌類污染，其共性是增殖快，適應(yīng)能力強，很難*，一般如果確認(rèn)培養(yǎng)細(xì)胞有以上污染，建議盡快丟棄，并檢查相關(guān)試劑和培養(yǎng)箱是否有污染，確認(rèn)沒有后再重新復(fù)蘇。那么細(xì)胞如果還是不幸污染了，那又該怎么辦呢？我把細(xì)胞污染分為早期和晚期兩種。早期污染是細(xì)胞狀態(tài)變差，但依舊能保持生長，
細(xì)胞污染防治的一些建議2019/12/11
無論新人還是熟手，細(xì)胞污染都是必須要面對的，那對于細(xì)胞污染，我覺得zui好的措施就是預(yù)防為主，因為細(xì)胞一旦污染，想救是非常困難的，即便救活，細(xì)胞狀態(tài)也會差很多。所以我先來說下我是怎么預(yù)防細(xì)胞污染的。生物安全柜是處理細(xì)胞的主要場所，也是細(xì)胞發(fā)生污染的主要場所，所以安全柜的正確使用是預(yù)防細(xì)胞污染的di一步。那么安全柜內(nèi)需要注意的小細(xì)節(jié)有哪些呢？首先，所有進入安全柜的東西在進入前都要用75%的酒精消毒。特別要注意的是我們的手，只要出了安全柜，再進入安全柜前都要噴75%的酒精消毒。實驗耗材盡量放置在合適
關(guān)于如何鑒定收到的新細(xì)胞是否有污染2019/12/05
一、肉眼觀察以下幾項：1.細(xì)胞瓶身：如果瓶身上沒有裂縫，正常；如果瓶身上有裂縫，則污染幾率非常大。2.培養(yǎng)基顏色：如果培養(yǎng)基顏色是紅色或者粉色，正常；如果是橙色，則可能是污染或者細(xì)胞過密；如果是黃色，則污染幾率非常大。3.培養(yǎng)基澄清度：如果培養(yǎng)基澄清，正常；如果有少許漂浮物，則可能是污染或者有細(xì)胞凋亡；如果培養(yǎng)基很渾濁，甚至出現(xiàn)絮狀物，則污染幾率非常大。二、進行顯微鏡下觀察（通常觀察前需先靜置細(xì)胞1-2h）顯微鏡下可以清晰觀察到細(xì)胞是否有菌類污染，菌類污染通常分為桿菌、球菌和霉菌，為了方便大家分
神經(jīng)元老化，對取出蛋白質(zhì)垃圾的影響2019/11/18
根據(jù)賓夕法尼亞大學(xué)佩雷??爾曼醫(yī)學(xué)院的一項新研究，隨著細(xì)胞老化，它們排出有害垃圾的能力下降。研究結(jié)果表明，老年神經(jīng)元中自噬的惡化-從未復(fù)制過的細(xì)胞和它們所居住的尸體一樣古老-可能是一系列神經(jīng)退行性疾病(如肌萎縮側(cè)索硬化癥，阿爾茨海默氏癥)的危險因素，和帕金森氏癥。使用來自年輕和老年小鼠的神經(jīng)元的活細(xì)胞成像，生理學(xué)教授ErikaHolzbaur博士和作者，Holzbaur實驗室的博士后研究員AndreaStavoe博士本周在eLife上發(fā)表了他們的研究。自噬的重要性在2016年被諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)
ELISA試劑盒初學(xué)者看結(jié)果2019/10/31
酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)由于其易于操作，可以簡單地回答樣本中有多少蛋白質(zhì)/多肽/抗體這一基本問題，是實驗室比較常用的一種檢測方法。而這種簡單的分析方法的核心，就是標(biāo)準(zhǔn)曲線。沒有它，我們的實驗就變成了一個二元的“是/不是”測試。有了它，我們可以深入研究生物反應(yīng)的細(xì)節(jié)。那么，是什么使得標(biāo)準(zhǔn)曲線如此強大呢?讓我們在ELISA的背景來討論這個問題。簡單地說，標(biāo)準(zhǔn)品就是一系列已知目標(biāo)蛋白數(shù)量的陽性對照。例如，如果對人類IgG進行ELISA檢測，標(biāo)準(zhǔn)曲線將包含逐漸減少的已知量的人類IgG，它會讓你立刻得
輕松看懂pcr實驗結(jié)果圖2019/10/25
辛辛苦苦提完RNA，逆轉(zhuǎn)錄后一個個孔加完引物和模板，Z后進行RT-PCR，你以為這樣就可以美滋滋地坐等結(jié)果了？等到一幅下面這樣的結(jié)果圖，不知道對于剛接觸RT-PCR的你來說內(nèi)心是否是崩潰的？這是啥？怎么看？別急，讓我慢慢跟你介紹，看完后你就能準(zhǔn)確的分析出你的RT-PCR結(jié)果了?！高@里以7500軟件為例進行介紹」1.首先設(shè)置好內(nèi)參和對照組「在AnalysisSettings處」，一般我們在上機前會對應(yīng)設(shè)置好的，如果設(shè)置好的話可以直接跳至第3點。如果沒有設(shè)置好的話是需要重新進行設(shè)置。2.點擊進去后，
pcr實驗原理及步奏2019/10/14
實驗方法原理基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備；②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合；③引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的作用下，以dNTP為
巴氏芽孢桿菌如何培養(yǎng)說明2019/09/10
巴氏芽孢桿菌（Bacilluspasteurii）產(chǎn)脲酶，尿素酰胺水解酶,近來受到很多研究人員追捧,那如何培養(yǎng)這菌株成了很多大家關(guān)注的問題,下面就一一詳細(xì)介紹巴氏芽孢桿菌如何培養(yǎng)說明巴氏芽孢桿菌培養(yǎng)溫度:30℃培養(yǎng)時間:18-24小時培養(yǎng)基:.CASOAGAR+尿素（20克/升）酪蛋白胨15克大豆蛋白胨5克氯化鈉5克瓊脂20克蒸餾水1升PH7.3斜面菌種和凍干菌種應(yīng)在2-8℃保存。凍干活化,干粉要全部用完,不能保留,用0.1-0.2ml的培養(yǎng)液或者無菌水溶解，接種在2支斜面上，因凍干菌種處于休眠
PCR體系中引物占有十分重要的地位2019/09/06
在整個PCR體系中，引物占有十分重要的地位。PCR的特異性要求引物與靶DNA特異結(jié)合，不與其他非目的的DNA結(jié)合，PCR的靈敏性要求DNA聚合酶能與引物進行有效的延伸，可見引物設(shè)計好壞與PCR結(jié)果密切相關(guān)。一、PCR引物設(shè)計原則1、引物長度一般在15-30bp引物長度一般為15-30bp，常用的為18-27bp，但不應(yīng)大于38bp，因為過長會導(dǎo)致其延伸溫度大于74℃，不適于TaqDNA聚合酶進行反應(yīng)；2、引物GC含量一般為40%-60%引物GC含量一般為40%-60%，以45-55%為宜，GC含
如何看懂流式結(jié)果圖2019/08/30
流式結(jié)果圖有4種類型，分別為:1.直方圖2.散點圖3.等高線圖4.密度圖下面一一為大家介紹1.直方圖（Histograms）a.橫坐標(biāo)代表熒光信號或散射光信號相對強度，可以是線性或?qū)?shù)坐標(biāo)。b.縱坐標(biāo)一般是相對細(xì)胞數(shù)。直方圖適用于分析處理周期（如下圖）直方圖分析數(shù)據(jù)注意事項：①不能比較不同標(biāo)記之間的表達(dá)量。如一號樣本單標(biāo)記CD133、二號樣本單標(biāo)記CD44，那么CD133與CD44表達(dá)量不能用直方圖進行比較。②直方圖的形狀（直方圖的高度及寬度）取決于儀器的類型、處理軟件和樣本③檢測目的細(xì)胞非常少
實驗新手系列：關(guān)于wb實驗2019/08/16
一、實驗過程中需要注意的問題①蛋白樣品的提取及蛋白含量的檢測蛋白樣品的提取咱們*是按照試劑盒說明書來做的，步驟沒有什么講的，但是因為蛋白樣品的好壞直接決定了是否能做出來蛋白條帶，這就好比蓋房子所需要的磚頭一樣，一定要務(wù)必認(rèn)真。②儀器準(zhǔn)備清洗玻璃板：玻璃板的正確拿法應(yīng)該是拿住玻璃板的左右兩側(cè)不要用手拿上下兩端，避免手套上面的臟東西順著水流流到玻璃板上，玻璃板請一定務(wù)必清洗干凈，不干凈的玻璃板上面的殘留物可能會影響凝膠之間的化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致膠出現(xiàn)問題，對后面的結(jié)果影響很大。玻璃板放置：玻璃板底部對齊，
如何作好軟瓊脂實驗分析2019/08/01
軟瓊脂(softagar)實驗一般用來檢測細(xì)胞的集落形成能力。現(xiàn)在這種方法越來越多的用于分離癌細(xì)胞，也可以用來確認(rèn)癌細(xì)胞是否具有癌化特性，為進一步做腫瘤小鼠移植模型奠定理論基礎(chǔ)。該方法看似簡單，但如果細(xì)節(jié)掌握不好，往往導(dǎo)致實驗失敗或數(shù)據(jù)缺乏說服力。如果你曾經(jīng)在這個實驗上栽了跟頭，請不妨在如下幾個方面進行嘗試：1.要確保在整個實驗過程中所使用的瓊脂處于*液體狀態(tài)（80℃），尤其是在做基底時，如果瓊脂凝固過快會導(dǎo)致基底不均一；2.做瓊脂基底是應(yīng)避免產(chǎn)生小氣泡，一旦有小氣泡產(chǎn)生，應(yīng)該立即將氣泡趕走；3
細(xì)胞可以頻繁換液嗎?2019/07/30
剛復(fù)蘇的細(xì)胞狀態(tài)不好，有許多死細(xì)胞，頻繁換液好嗎？大致如題，有一些人認(rèn)為細(xì)胞剛復(fù)蘇不能狗頻繁的換液，說是細(xì)胞會自己分泌細(xì)胞因子維持自己的生存，換液的話，就會影響細(xì)胞的生長，長的不好，但是我的細(xì)胞狀態(tài)不好而且有很多細(xì)胞碎片，細(xì)胞死亡之后在培養(yǎng)基中會不會釋放很多的有毒物質(zhì)，對細(xì)胞的生長不利，所以就想要換液把死細(xì)胞和細(xì)胞碎片都洗掉，目前不知道怎么選擇，所以想請大家給一下就參考意見？能洗掉的就洗，洗不掉的也不用刻意的用力吹，正如你所說的細(xì)胞密度小，可能會損害細(xì)胞。換液的話還是2~3天換，不要每天都換液。
細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)版知識（供參考）2019/07/24
基礎(chǔ)篇-無菌操作基本技術(shù)1.實驗進行前，無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)10分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進行下一個細(xì)胞株之操作。2.無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管
細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染情況2019/07/18
近看到不少問有關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)污染的事，正好我看到了一個有關(guān)這方面的總結(jié)，很全很好很強大，跟大家分享下細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染情況總結(jié)如下:常見的污染如下：1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細(xì)胞生長影響明顯。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理
熒光免疫測定技術(shù)的概念2019/07/16
1、熒光免疫測定技術(shù)的概念：將試劑抗原或試劑抗體用熒光素進行標(biāo)記，試劑與標(biāo)本中相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)后，測定復(fù)合物中的熒光素，這種免疫技術(shù)，稱為免疫熒光素技術(shù)。2、熒光的產(chǎn)生：物質(zhì)吸收外界能量而進入激發(fā)狀態(tài)，在回復(fù)基態(tài)時多余的能量以電磁輻射的形式釋放，即發(fā)光，這種光稱為熒光。這種物質(zhì)，稱為熒光素。由光激發(fā)所引起的熒光，為光致熒光------熒光免疫技術(shù)由化學(xué)反應(yīng)所引起的熒光，為化學(xué)熒光------化學(xué)發(fā)光技術(shù)3、熒光素的熒光特性：⑴停止供能，熒光現(xiàn)象隨即終止⑵對光的吸收和熒光的發(fā)射具高度選擇性,綠
流式實驗中的抗體滴定2019/07/16
一般我們購買商品化的primaryantibody的時候，抗體的說明書中都會給我們一個推薦的抗體使用濃度。這個濃度在一定程度上來說，是過飽和的，可以滿足大多數(shù)實驗的染色需求。但是因為是過飽和的濃度，這就帶來了一定程度的抗體浪費。而過量的抗體，也會大大提高樣本的自發(fā)熒光。從另一個角度來看，因為廠家給出的推薦濃度都是基于一個特定的樣本濃度和樣本體積，所以在一些特殊的實驗中，比如樣本濃度或樣本體積過大的實驗，推薦的濃度就無法達(dá)到飽和滴加的要求。在這樣的前提下，推薦實驗用戶針對自己的實驗要求，zui好可
細(xì)胞培養(yǎng)注意事項2019/07/10
1.實驗進行前，無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)10分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進行下一個細(xì)胞株之操作。2.無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時
如何選擇合適的培養(yǎng)基2019/07/05
MEM細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)是實驗室里常見和基本的實驗了，但卻不是簡單的。別小看細(xì)胞培養(yǎng)，這里可蘊含著大學(xué)問。有時候細(xì)胞狀態(tài)不好，轉(zhuǎn)染、藥篩這些實驗根本就沒辦法做。影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素很多，讓我們先從培養(yǎng)基和血清說起。經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，Invitrogen(GIBCO)、ThermoFisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是應(yīng)用廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。◆MEM是由Eag
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