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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第18年
上海研域:原代細(xì)胞的定義2023/11/29
原代細(xì)胞(primaryculturecell)是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋自酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞,稱為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,一般認(rèn)為,培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了,細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)停滯,大部分細(xì)胞衰老死亡。在人工條件下使其原代細(xì)胞生存、生長(zhǎng)、繁殖和傳代,進(jìn)行細(xì)胞生命過程、細(xì)胞癌變、細(xì)胞工程等問題的研究。原代細(xì)胞是接近和最能反映體內(nèi)生長(zhǎng)
人ELISA試劑盒操作步驟2023/11/21
人ELISA試劑盒操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在一、二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100ul,然后在一、二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;然后從一孔、二孔中各取100ul分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50ul棄掉,再各取50ul分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50ul分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50
關(guān)于ELISA試劑盒試驗(yàn)時(shí)的試劑預(yù)備2023/11/15
優(yōu)質(zhì)的試劑盒,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件.但是往往實(shí)驗(yàn)中很多操作者都沒按照正確的操作來進(jìn)行!操作中稍微的一點(diǎn)點(diǎn)差池,就會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性!所以請(qǐng)規(guī)范使用ELISA試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)!ELISA試劑盒試驗(yàn)的試劑預(yù)備在臨床試驗(yàn)室,對(duì)試劑預(yù)備一般不太留意,一般的做法是,在試驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來即用,而疏忽了這種做法有也許影響后邊溫育時(shí)刻不行的疑問,其直接的結(jié)果是對(duì)一些弱陽性標(biāo)本的檢測(cè)呈現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測(cè)定中試劑的預(yù)備要害的是,在試驗(yàn)開端前,將
操作大鼠ELISA試劑盒過程中需要注意的事情2023/11/15
1.大鼠ELISA試劑盒試劑的選擇通常所使用的ELISA試劑盒或其它試劑,必須注冊(cè)批準(zhǔn)、批檢合格、臨床評(píng)估質(zhì)量?jī)?yōu)良,并且均在有效期內(nèi)使用。不同批號(hào)試劑組分不得混用,過期的試劑一律不得使用,首先提升實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。2.大鼠ELISA試劑盒樣品的采集與保存用于檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)保持新鮮,標(biāo)本的采集應(yīng)盡量避免溶血,因紅細(xì)胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質(zhì),干擾結(jié)果,會(huì)出現(xiàn)假陽性;標(biāo)本如果受細(xì)菌污染,會(huì)因菌體中含有內(nèi)源性過氧化物酶而出現(xiàn)假陽性;混濁或有沉淀的血清樣品應(yīng)離心,待澄清后方可檢測(cè),避免對(duì)結(jié)果造成影響。
ELISA試劑盒應(yīng)該如何保存?2023/10/25
ELISA實(shí)驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因索,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各域中。ELISA試劑盒應(yīng)該如何保存?保存不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致試劑失效或影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果!1、要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅索基團(tuán),其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。2、樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)
ELISA實(shí)驗(yàn)條件重要的選擇2023/10/24
在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:(1)固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。(2)ELISA試劑盒包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,
ELISA實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)假陽性結(jié)果和假陰性結(jié)果的原因2023/10/17
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。除了盒子本身質(zhì)量外,操作中很多因素都影響試驗(yàn)的正常結(jié)果。*常出現(xiàn)的問題是顯色淡,靈敏度偏低、重復(fù)性不佳、假陽性結(jié)果和假陰性結(jié)果,不管出現(xiàn)什么樣的結(jié)果,不但浪費(fèi)客戶的金錢、樣本、精力,更重要的是對(duì)臨床做出了危險(xiǎn)判斷。在這里我們分析ELISA試驗(yàn)非正常檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生的常見原因,并探討其解決辦法,以提高檢測(cè)質(zhì)量。1.標(biāo)本的采集與保存當(dāng)標(biāo)本采集保存不當(dāng)產(chǎn)生溶血時(shí),紅細(xì)胞中的血紅蛋白釋放到血清中,血紅蛋白具有過氧化物酶的性質(zhì),其通過吸附或“PP效應(yīng)”(蛋白質(zhì)間相
研域生物分享elisa實(shí)驗(yàn)時(shí)需要注意的問題2023/10/10
elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)以靈敏度較高﹑特異性較好的特點(diǎn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全﹑花板等結(jié)果。elisa實(shí)驗(yàn)操作所要求的條件是比較嚴(yán)格的,無論是對(duì)實(shí)驗(yàn)的硬件條件還是對(duì)實(shí)驗(yàn)的操作人員的技術(shù)要求,都是如此。下面研域生物分享10條在進(jìn)行elisa實(shí)驗(yàn)時(shí)需要注意的問題。1.要保證移液槍的準(zhǔn)確性,誤差不能超過2%??捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定。但盡量在有專業(yè)人員進(jìn)行矯正。2.要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液
ELISA試劑盒常見液體祥本處理方法2023/09/26
ELISA即酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn),是目前廣泛應(yīng)用于各種抗原抗體檢測(cè)的方法,主要有靈敏度高和特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。ELISA操作步驟看似簡(jiǎn)單,整個(gè)測(cè)定過程中卻有諸多影響因素,導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果可能與實(shí)際結(jié)果偏差較大。ELISA試劑盒常見液體祥本處理方法1、血清:用無菌管搜集,室溫血液自然凝固10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細(xì)心搜集上清,保存過程中如出現(xiàn)堆積,應(yīng)再次離心。2、尿液:用無菌管搜集,2-8C條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清,保存過程
血清影響ELISA實(shí)驗(yàn)假陽怎么辦?2023/09/19
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽性。要怎樣解決呢?請(qǐng)看以下操作。①用F(ab)2替代完整的IzG;②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63C,10nin)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效);檢測(cè)抗原時(shí),可以用2-疏基乙酸等加入到標(biāo)本稀釋液中,使RF降解。(2)補(bǔ)體ELISA&系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來,使C1q可以將二者連接起來,從
您知道ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)洗滌的重要注意事項(xiàng)嗎?2023/09/12
洗滌是ELISA實(shí)驗(yàn)中是最多次數(shù)的操作,也是非常重要的步驟。不嚴(yán)格的洗滌容易出現(xiàn)洗不干凈或交又污染現(xiàn)象,實(shí)驗(yàn)重復(fù)效果差的現(xiàn)象。不管用多道加樣器、洗瓶、吸管,還是洗板機(jī),嚴(yán)格按照說明書操作不要減少步驟洗滌的洗滌體積、洗滌時(shí)間和洗滌次數(shù)。注意標(biāo)準(zhǔn)化操作將減少實(shí)驗(yàn)誤差和不同實(shí)驗(yàn)之間的誤差。操作者常出現(xiàn)洗板不干凈現(xiàn)象,請(qǐng)比照“手工洗板小貼士”操1.洗液不要溢出孔外,以免污染相鄰的孔,特別是每次洗板的前兩遍,若高濃度的孔污染了低濃度的孔或空白孔,其造成的交叉污染的孔是洗不掉的,背景肯定會(huì)增高。2.特別注意
影響ELISA試劑盒靈敏度常出現(xiàn)的問題及解決辦法2023/09/05
ELISA試劑盒試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。上海研域生物將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)一下,以期給同行帶來—些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。1、超過有效期。試劑盒必須在有效期內(nèi)使用,超過有效期的產(chǎn)品可能會(huì)產(chǎn)生很弱的信號(hào)。2、試劑盒沒有按規(guī)定進(jìn)行保存,受高溫影響。3、試劑、樣品用前未平衡至室溫4、加入試劑的體積和時(shí)間有誤,移液器計(jì)量不準(zhǔn),吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔。5、洗板及加樣
如何挑選適合實(shí)驗(yàn)的ELISA試劑盒之實(shí)驗(yàn)類型2023/08/22
ELISA是一種廣泛應(yīng)用于大分子蛋白和小分子激素定量檢測(cè)的免疫診斷技術(shù)。ELISA實(shí)驗(yàn)操作雖然不算復(fù)雜,但也有許多需要注意的事項(xiàng)。各個(gè)環(huán)節(jié)稍有不慎,就可能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。ELISA試劑盒有多種類型,不過它們都有一個(gè)共同特點(diǎn),就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cellELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPoT是兩種特殊的類型,In-cellELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化,然后再用抗體原位檢測(cè)。ELISPoT有點(diǎn)像蛋白印跡We
上海研域-ELISA試劑實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)盤點(diǎn)2023/08/15
ELISA細(xì)節(jié)盤點(diǎn)1.樣本收集每個(gè)標(biāo)本量收集體積=100ulx檢測(cè)指標(biāo),如要做復(fù)孔,標(biāo)本量收集體積=10Oul×檢測(cè)指標(biāo)×2。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本,將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20°℃或-70°℃條件下保存,避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí),-20°℃可保存1個(gè)月。-70度可保存6個(gè)月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。如需離心的樣本,離心轉(zhuǎn)速不宜過高(2000~3000)2.ELISA加樣加樣品時(shí),單孔用量要求:≥50ul/指標(biāo),如需要做2個(gè)復(fù)孔
關(guān)于elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)中保存抗原的操作細(xì)節(jié)分析2023/08/01
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中每一個(gè)步驟都尤為重要,細(xì)節(jié)不容忽視,它是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵與否﹔在這里研域生物為方便各位了解,更好的完成實(shí)驗(yàn),特對(duì)ELISA試劑盒操作步驟中保存抗原做出以下分析,供大家參考:1、包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是否降解,這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別,所以保存抗原很重要。有的包被原可能不是蛋白,對(duì)于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對(duì)其改造再加以包被,方法如下:①親和素生物素:先親和素先包被載體,加入生物素化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定
洗滌是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵2023/07/25
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))是目前臨床上常用的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法,由于其試劑穩(wěn)定,易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀,既適宜于大規(guī)模篩查試驗(yàn),又可用于少量標(biāo)本的檢測(cè),既可以做定性試驗(yàn)也可以做定量分析,目前已廣泛用于微生物學(xué),寄生蟲學(xué),腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子檢測(cè)等領(lǐng)域.EUSA有敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的特點(diǎn),但其同時(shí)存在影響因素多的不足,現(xiàn)就實(shí)驗(yàn)操作中常見的影響因素進(jìn)行分析實(shí)驗(yàn),以提高ELASA的實(shí)驗(yàn)質(zhì)量.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)聚,但卻是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗
ELISA檢測(cè)試劑盒如何避免假陽性現(xiàn)象2023/07/20
ELISA檢測(cè)試劑盒如何避免假陽性現(xiàn)象。1、加樣對(duì)于間接進(jìn)口ELISA檢測(cè)試劑盒標(biāo)本一般都要進(jìn)行稀釋,如果加樣不準(zhǔn)就會(huì)造成誤差,尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時(shí),很小的絕對(duì)誤差,會(huì)導(dǎo)致較大的相對(duì)誤差,使陰性(或弱陽性)標(biāo)本呈陽性(或陰性)。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。目前,大部分血站都已使用全自動(dòng)酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本,可較好地避免以上誤差。2、洗滌在進(jìn)口ELISA檢測(cè)試劑盒中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步,應(yīng)引起操作者重視。無論是手工操作
上海研域帶您了解ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)詳細(xì)步驟2023/07/18
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。ELISA試劑盒包含預(yù)包被酶標(biāo)板、檢測(cè)抗體、鏈酶親和素標(biāo)記的HRP、標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、TMB顯色液、終止液、洗液、封板膜、檢測(cè)緩沖液等10個(gè)成分。實(shí)驗(yàn)前,請(qǐng)將試劑盒、樣本取出;室溫放置半小時(shí),恢復(fù)至室溫。第一步:ELISA緩沖液配制吸取5毫升10xAssayBuffer緩沖液,至50ml離心管,吸取50ml20x洗液至1升量筒,
ELISA實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)2023/07/11
ELISA實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng):1、固相載體選擇聚苯乙烯:具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性。聚氯乙烯:聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高溫物。良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間性能相近。2、包被①板孔的選擇:ELISA配套的微孔板。②抗體選擇:何針選擇支持ELISA實(shí)驗(yàn)的抗體,根據(jù)推薦濃度稀釋或摸索最適濃度。③包被緩沖液:pH9.6碳酸鹽緩沖液或pH7.2磷酸鹽緩沖液。④包被溫度:2-8℃過
ELISA試劑盒需把握的關(guān)鍵有哪些?2023/06/28
ELISA實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記,其中,結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。進(jìn)行檢測(cè)時(shí),樣品中的受檢物質(zhì)(抗原或抗體)與固定的抗體或抗原結(jié)合。通過洗板除去非結(jié)合物,再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,此時(shí),能固定下來的酶量與樣品中被檢物質(zhì)的量相關(guān)。通過加入與酶反應(yīng)的底物后顯色,根據(jù)顏色的深淺可以判斷樣品中物質(zhì)的含量,進(jìn)行定性或定量的分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測(cè)定方法達(dá)到很高的靈敏
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