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小鼠去甲腎上腺素(NA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

來源:上海依赫生物科技有限公司   2016年03月26日 15:32  

小鼠去甲腎上腺素(NA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

  本試劑盒僅供研究使用。

  【檢測范圍】96T

  3pg/ml-120pg/ml

  【使用目的】

  本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中去甲腎上腺素(NA)含量。

  【實(shí)驗(yàn)原理】

  本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠去甲腎上腺素(NA)水平。用純化的小鼠去甲腎上腺素(NA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入去甲腎上腺素(NA),再與HRP標(biāo)記的去甲腎上腺素(NA)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的去甲腎上腺素(NA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠去甲腎上腺素(NA)濃度。

  試劑盒組成

1     30倍濃縮洗滌液   20ml×1瓶    7   終止液           6ml×1瓶

2     酶標(biāo)試劑         6ml×1瓶     8   標(biāo)準(zhǔn)品(240pg/ml)0.5ml×1瓶

3     酶標(biāo)包被板       12孔×8條    9   標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液     1.5ml×1瓶

4     樣品稀釋液       6ml×1瓶    10  說明書           1份

5     顯色劑A液       6ml×1瓶     11  封板膜            2張

6    顯色劑B液       6ml×1/瓶   12 密封袋            1個(gè)

 

【標(biāo)本要求】

  1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

  2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

  

【操作步驟】

  

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

  120pg/ml         5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品          150的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  60pg/ml          4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品         150的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

   30pg/ml         3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品           150的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

15pg/ml         2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品            150的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

    7.5pg/ml         1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品             150的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40,然后再加待測樣品10(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

  3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

  4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

  5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

  6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50,空白孔除外。

  7. 溫育:操作同3。

  8. 洗滌:操作同5。

  9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50,再加入顯色劑B50,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

  10. 終止:每孔加終止液50,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

  11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

  【操作程序總結(jié)】

  計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

  注意事項(xiàng)

  1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

  2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

  3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

  4. 請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

  5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

  6.底物請(qǐng)避光保存。

  7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

  8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

  9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

  10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。

  保存條件及有效期

  1.試劑盒保存:;2-8℃。

  2.有效期:6個(gè)月

免責(zé)聲明

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