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全血基因組提取試劑盒II
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒通過(guò)裂解紅細(xì)胞、裂解白細(xì)胞及細(xì)胞核、沉淀蛋白、分離基因組等過(guò)程從全血中提取基因組。試劑盒特點(diǎn)：提取的基因組DNA長(zhǎng)度大于20kb, 可用于PCR擴(kuò)增、內(nèi)切酶消化以及膜雜交等；每100ul全血樣品預(yù)期提取量1-5ug；所提基因組DNA效果好；提取過(guò)程不超過(guò)45分鐘；可室溫保存1年。與全血基因組提取試劑盒（I）不同的是裂解紅細(xì)胞及有核白細(xì)胞同時(shí)進(jìn)行，省去了多個(gè)步驟，復(fù)合裂解液中含有抑制DNA酶的成分，在加熱（65°C）狀態(tài)下，可保證完整的基因組DNA的充分裂解釋放，異丙醇沉淀時(shí)，罕見(jiàn)渾濁的蛋白質(zhì)雜質(zhì)共沉淀。本試劑盒提供100次100ul全血樣本基因組提取的足量試劑。 本試劑盒也可用于培養(yǎng)細(xì)胞，組織基因組以及培養(yǎng)細(xì)菌或真菌基因組DNA的提取。
試劑盒組成
1、細(xì)胞復(fù)合裂解液：35ml 2、蛋白沉淀液： 25ml×1瓶
3、DNA溶解液： 5ml瓶 4、說(shuō)明書(shū)： 1份
自備試劑
本試劑盒沒(méi)有提供，但*的試劑包括：異丙醇（國(guó)產(chǎn)分析醇）；70%乙醇。
樣品
1、 樣品要求：用于DNA提取的全血應(yīng)為抗凝血（EDTA, 肝素或檸檬酸鈉抗凝），抗凝血在4°C存放5天以內(nèi)（存放時(shí)間長(zhǎng)，DNA產(chǎn)量低），-20°C存放一個(gè)月以內(nèi), -80°C至少可存放2年均能純化出高質(zhì)量的DNA（凍存血較新鮮血產(chǎn)量低）。
2、 全血需求量：本試劑盒可一次提取少至20-300ul,多至10ml的全血DNA,標(biāo)準(zhǔn)提取量為100ul。
注：血液及組織標(biāo)本應(yīng)視為傳染性材料處理。
操作程序（以100ul全血為例）
1、 細(xì)胞復(fù)合裂解液置65°C水浴中使其中的結(jié)晶溶解。
2、 吸取100ul混勻的全血至1.5ml離心管中，加入結(jié)晶成分已溶解的細(xì)胞復(fù)合裂解液300ul，混璇器震蕩混勻20秒，置65°C水浴中反應(yīng)20分鐘。
3、 加入200ul蛋白沉淀液，上下顛倒5-6次使兩者混勻。
4、 13000-16000×g，離心3-5分鐘。
5、 將上清液（約500ul）轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入等體積異丙醇，此時(shí)可見(jiàn)透明的絮狀物，混勻后離心，同步驟4，傾去上清。
6、 加入200ul 70%的乙醇溶液（基因組DNA在70%乙醇中，存于-80 C，可長(zhǎng)期保存），來(lái)回倒置，清洗管壁，離心，同步驟4。
7、 移去70%乙醇，倒置離心管于干凈的濾紙上，自然干燥10-15分鐘，加入33ul DNA溶解液?？焖黉鰷u震蕩1-2秒，使DNA溶解液沖刷到所有沉淀的DNA。
8、 65 C水浴1小時(shí)，或4 C過(guò)夜使DNA充分溶解（要求不嚴(yán)格的PCR試驗(yàn)可縮短時(shí)間或省去該步），輕輕彈動(dòng)管壁有助于溶解。
各種容積全血基因組DNA提取所需的溶液組份量
| 全血量 | 復(fù)合裂解液量 | 蛋白沉淀液量 | 異丙醇量 | 70%乙醇量 | DNA溶解液量 |
| 100 ul | 300 ul | 200 ul | 500 ul | 200 ul | 33 ul |
| 300ul | 3x300 ul | 3x 200 ul | 3x500ul | 3x200ul | 3x33 ul |
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