人寡樹(shù)突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白抗體ELISA 檢測(cè)試劑盒
人寡樹(shù)突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白抗體ELISA 檢測(cè)試劑盒
本試劑僅供研究使用 標(biāo)本:血清或血漿
試驗(yàn)原理:
MOG-Ab試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知MOG-Ab濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將MOG-Ab和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中MOG-Ab的濃度呈比例關(guān)系。
試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標(biāo)板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品:80IU/L 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀稀
空白對(duì)照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
生物素標(biāo)記的抗MOG-Ab抗體 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
洗滌緩沖液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
標(biāo)本稀釋液 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 即用型
人寡樹(shù)突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白抗體ELISA 檢測(cè)試劑盒自備材料
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。
2. 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作注意事項(xiàng)
1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7. 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
9. 按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準(zhǔn)備
1. 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
80 IU/L (6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
40 IU/L (5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20 IU/L (4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10 IU/L (3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5.0 IU/L (2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.5 IU/L (1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 IU/L (空白對(duì)照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋?zhuān)赫麴s水50倍稀釋。
操作步驟
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8. 取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9. 在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
人寡樹(shù)突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白抗體ELISA 檢測(cè)試劑盒建議使用的實(shí)驗(yàn)方案
標(biāo)準(zhǔn)品濃度(IU/L)
A 80 80 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 40 40 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 20 20 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 10 10 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 5.0 5.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 2.5 2.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
局限
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線(xiàn)性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)無(wú)法得到的結(jié)果。
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線(xiàn)性。樣品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的MOG-Ab標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線(xiàn),樣品的MOG-Ab含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)換算出濃度。
3、檢測(cè)值范圍:0-80IU/L
4、敏感度: 0.1 IU/L
人白介素4(IL-4)ELISA試劑盒 Human Interleukin 4,IL-4 ELISA試劑盒
人白介素3(IL-3)ELISA試劑盒 Human Interleukin 3,IL-3 ELISA試劑盒
人白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ )ELISA試劑盒 Human Interleukin 2,IL-2 ELISA試劑盒
人白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒 Human soluble interleukin-2 receptor,IL-2sRα ELISA試劑盒
人白介素2(IL-2)ELISA試劑盒 Human Interleukin 2,IL-2 ELISA試劑盒
人白介素1α(IL-1α )ELISA試劑盒 Human Interleukin 1α,IL-1α ELISA試劑盒
人白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒 Human soluble interleukin-1 receptor Ⅱ,IL-1sRⅡ ELISA試劑盒
人白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒 Human soluble interleukin-1 receptor Ⅰ,IL-1sRⅠ ELISA試劑盒
人白介素16(IL-16)ELISA試劑盒 Human Interleukin 16,IL-16 ELISA試劑盒
人白介素13(IL-13)ELISA試劑盒 Human Interleukin 13,IL-13 ELISA試劑盒
人白介素12(IL-12/P70)ELISA試劑盒 Human Interleukin 12,IL-12/P70 ELISA試劑盒
人白介素12(IL-12/P40)ELISA試劑盒 Human Interleukin 12,IL-12/P40 ELISA試劑盒
人白介素11(IL-11)ELISA試劑盒 Human Interleukin 11,IL-11 ELISA試劑盒
人白介素10(IL-10)ELISA試劑盒 Human Interleukin 10,IL-10 ELISA試劑盒
人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒 Human insulin-like growth factors binding protein 4,IGFBP-4 ELISA試劑盒
人幽門(mén)螺旋桿菌IgM(Hp-IgM)ELISA試劑盒 Human Helicobacter pylori IgM,Hp-IgM ELISA試劑盒
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人胃抑素(GIP)ELISA試劑盒 Human gastric inhibitory polypeptide,GIP ELISA試劑盒
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人Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒 Human N-terminal procollagen Ⅲ propeptide,PⅢNP ELISA試劑盒
人Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試劑盒 Human Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA試劑盒
人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA試劑盒 Human Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA試劑盒
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