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UCF.ME® rTEV蛋白酶:無殘留精準切除蛋白標簽的高效解決方案

來源:翌圣生物科技(上海)股份有限公司   2024年12月17日 08:55  

隨著蛋白質(zhì)科學(xué)的飛速發(fā)展,蛋白純化技術(shù)在生物研究領(lǐng)域和生物技術(shù)工業(yè)中的重要性日益凸顯。這一核心技術(shù)涉及利用基因工程方法,將目標蛋白的編碼信息整合入宿主細胞,從而誘導(dǎo)它們高效地生產(chǎn)所需蛋白。隨后,通過一系列精細的體外操作步驟實現(xiàn)對蛋白質(zhì)的高純度提取。蛋白純化使得科學(xué)家能分離出單一類型的蛋白質(zhì),這對于深入研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能、開發(fā)新藥、進行疾病診斷以及推動生物技術(shù)的應(yīng)用至關(guān)重要。該技術(shù)不僅確保了科學(xué)實驗的準確性,還為生命科學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展提供了持續(xù)的動力。

1.親和層析原理圖[1]

 

在蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域,融合標簽作為一種強大的工具,通過與目標蛋白結(jié)合以促進實現(xiàn)各種實驗?zāi)康?,常見融合標簽的功能可參考下表。然而?/span>一旦這些標簽在完成其初始輔助功能后繼續(xù)殘留在融合蛋白上,可能會對后續(xù)實驗造成不良影響,如干擾動物免疫實驗或影響蛋白的生物學(xué)活性。因此,去除這些不再需要的融合標簽變得至關(guān)重要,以確保蛋白質(zhì)的正常功能和實驗的準確性。

 

1.常見融合標簽功能及酶切手段介紹

融合標簽

大小(KD)

功能

常見酶切手段

His

0.84

有利純化,能純化可溶性/包涵體蛋白。

TEV蛋白酶

Flag

1.01

融合FLAG標簽的目的蛋白,可以被抗FLAG的抗體識別,從而通過Western Blot、ELISA等方法對含有FLAG標簽的融合蛋白進行檢測、鑒定。

腸激酶

GST

26

增強蛋白可溶性,僅能純化可溶性蛋白,屏蔽毒性蛋白。

凝血酶

MBP

44.4

增強蛋白可溶性,屏蔽毒性蛋白。

TEV蛋白酶

NusA

55

增強蛋白可溶性,屏蔽毒性蛋白。

凝血酶

SUMO

11.2

增強蛋白的可溶性,促進蛋白折疊,保護蛋白免受蛋白酶水解,提高蛋白的穩(wěn)定性。

SUMO酶

 

今天,我們隆重向您推介一款高效精準去除融合標簽的產(chǎn)品——UCF.ME® rTEV Protease,憑借其簡潔易操作的實驗流程,此款酶能夠便捷地從融合蛋白中切除無需的標簽,進而獲得高純度的目標蛋白。

 

UCF.ME® rTEV Protease

TEV Protease 是一種廣泛應(yīng)用于切除重組蛋白融合標簽的蛋白酶,以其高度的位點特異性而著稱。它嚴格識別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S),在谷氨酰胺和甘氨酸或絲氨酸之間進行精確剪切,其中最常見的七氨基酸序列為:Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。這種特異性確保了蛋白加工過程中的精確性和效率。

2.TEV蛋白酶作用原理圖[2]

 

翌圣UCF.ME® rTEV Protease 是一款經(jīng)過基因工程改良和精細純化的重組蛋白酶,它不僅保留了天然TEV酶的完整功能活性,而且在更廣泛的溫度范圍內(nèi)展現(xiàn)出的穩(wěn)定性和特異性。該產(chǎn)品在rTEV Protease (Cat#20403)基礎(chǔ)上進行了工藝優(yōu)化,其純度更高、活性更強、宿主gDNA殘留更低,確保在實際應(yīng)用中對蛋白融合標簽的切割效率更高,且能有效降低引入外源物質(zhì)殘留的風(fēng)險。UCF.ME® rTEV Protease在pH 7.0和30°C的條件下表現(xiàn)出最佳活性,但即使在pH 6.0-8.5、溫度4-30°C的廣泛條件下也保持活性,以適應(yīng)不同蛋白質(zhì)加工需求。值得一提的是,UCF.ME® rTEV Protease 的N端帶有6×His標簽,可通過Ni-NTA樹脂進行高效去除,從而實現(xiàn)目標蛋白的精準純化。

 

性能展示

  1. 剪切效率高:蛋白標簽切除

以含有UCF.ME® rTEV Protease剪切位點的融合蛋白(3 μg)為底物,分別投入UCF.ME® rTEV Protease 10、5、3 U,在30℃條件下反應(yīng)1 h,瓊脂糖凝膠電泳檢測剪切效果。結(jié)果顯示翌圣的UCF.ME® rTEV Protease在投入量為3 U以上時,可高效剪切底物,剪切效率>90%。

圖2.UCF.ME® rTEV Protease剪切活性驗證

 

  1. 宿主gDNA殘留低:有效降低引入外源物質(zhì)殘留的風(fēng)險

通過對不同批次的UCF.ME® rTEV Protease進行宿主(大腸桿菌)gDNA殘留檢測,結(jié)果顯示UCF.ME® rTEV Protease宿主gDNA殘留遠低于< 1copies/U。

圖3.UCF.ME® rTEV Protease宿主gDNA殘留結(jié)果

 

  1. 適用條件廣泛:適應(yīng)不同蛋白質(zhì)加工需求

通過對UCF.ME® rTEV Protease不同條件下的剪切活性進行驗證,結(jié)果顯示UCF.ME® rTEV Protease在4-30℃條件下均有較強的活性,可適配客戶不同應(yīng)用場景需求。

反應(yīng)時間(h)

不同溫度下剪切活性(%)

4℃

16℃

21℃

30℃

1

34

58

56

85

2

58

80

78

90

3

71

99

99

99

3.5

84

99

99

99

 

翌圣融合標簽切割蛋白產(chǎn)品推薦

產(chǎn)品分類

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品貨號

TEV蛋白酶

UCF.ME® rTEV Protease

20427ES

腸激酶

Enterokinase, Recombinant

20395ES

SUMO蛋白酶

SUMO Protease

20410ES

3C Protease

3C Protease

20409ES

凝血酶

Bovine Thrombin,High Specific Activity,>2000 IU/mg 牛凝血酶

20402ES

參考文獻:

[1] Parikh I , Cuatrecasas P .Affinity Chromatography[J].Vox Sanguinis, 1972, 23(1-2):141-146.DOI:10.1159/000466530.

[2] Paththamperuma C, Page R C. Fluorescence dequenching assay for the activity of TEV protease[J]. Analytical biochemistry, 2022, 659: 114954.


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