組織樣本是生物醫(yī)學(xué)研究中使用頻率很高的一種樣本,而從組織中提取高質(zhì)量的RNA對(duì)于許多實(shí)驗(yàn)的成功至關(guān)重要。以下的預(yù)處理注意事項(xiàng),能夠幫助您最大限度地提高組織樣本中RNA的質(zhì)量。
縮短冷缺血時(shí)間
冷缺血時(shí)間是指組織離體后到儲(chǔ)存前的時(shí)間間隔。這段時(shí)間越短,RNA降解的風(fēng)險(xiǎn)就越低。因此,應(yīng)盡可能快速地將組織樣本轉(zhuǎn)移到低溫環(huán)境中保存。
選擇合適的保存方式
低溫保存雖然能夠有效保持RNA的完整性,但在冷凍和解凍過程中可能會(huì)對(duì)組織造成機(jī)械損傷。為了減輕這種影響,可以在保存過程中添加保護(hù)劑,如二甲基亞砜(DMSO)、甘油等,以減少冰晶的形成。
二甲基亞砜(DMSO)結(jié)構(gòu)式
減少凍融循環(huán)
反復(fù)凍融組織會(huì)導(dǎo)致RNA降解加劇。因此,盡量減少組織樣本的凍融次數(shù),并在每次使用后重新冷凍剩余的樣本。
固定方法的選擇
不同的固定方法會(huì)影響組織樣本中RNA的完整性。例如,石蠟包埋雖然是一種常用的固定方法,但其提取的RNA含量較低,更適合定量PCR分析。
組織石蠟切片
遵循上述組織預(yù)處理注意事項(xiàng),可以幫助研究人員獲得更加可靠的組織RNA樣本,從而支持高質(zhì)量的科學(xué)研究。
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