雙特異性抗體（Bispecific Antibodies, BsAbs）是一種新型的生物治療藥物，它們能夠同時(shí)結(jié)合兩種不同的抗原，在多種疾病治療，尤其是癌癥治療方面展現(xiàn)出巨大的潛力。然而，由于BsAbs的結(jié)構(gòu)復(fù)雜性和作用機(jī)制的多樣性，為它們的生物活性檢測和表征帶來了挑戰(zhàn)。本文將探討B(tài)sAbs的生物活性檢測策略，并結(jié)合案例研究，提供對這一領(lǐng)域的深入見解。

BsAbs的結(jié)構(gòu)多樣性與作用機(jī)制

BsAbs的設(shè)計(jì)和開發(fā)受益于對傳統(tǒng)單克隆抗體（mAbs）的深入了解。它們具有與常規(guī)mAb相似的表位特異性和可改造性，可以結(jié)合兩個(gè)不同的抗原位點(diǎn)。BsAbs的結(jié)構(gòu)非常多樣化，取決于預(yù)期的作用機(jī)制（MoA）和所需的藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)（PK/PD）特性。BsAbs的作用機(jī)制大致可分為四類：細(xì)胞橋接型、受體/配體阻斷或激活型、輔助因子模擬型和“歸巢”型。

BsAbs生物活性檢測的挑戰(zhàn)與策略

開發(fā)BsAbs的生物活性檢測方法需要深入理解其分子的作用機(jī)制，以及全面了解不同生物分析方法的原理和應(yīng)用。生物活性檢測對于生物制品的表征和控制至關(guān)重要，也是解釋臨床研究結(jié)果的關(guān)鍵。

1. 分階段檢測方法

對于生物治療藥物的生物活性檢測，行業(yè)和監(jiān)管機(jī)構(gòu)普遍接受分階段檢測的方法。在產(chǎn)品開發(fā)的早期階段，通常首-選結(jié)合方法進(jìn)行檢測。隨著產(chǎn)品開發(fā)的推進(jìn)，更復(fù)雜的、反映MoA的基于細(xì)胞的生物活性檢測方法被開發(fā)出來，并在上市申請?zhí)峤磺斑M(jìn)行驗(yàn)證。

2. 作用機(jī)制驅(qū)動(dòng)的設(shè)計(jì)

生物活性檢測策略是由藥物預(yù)期的生理MoA驅(qū)動(dòng)的。與其它分析技術(shù)不同，生物活性檢測針對每種治療藥物都是獨(dú)-一無二的。一個(gè)設(shè)計(jì)良好的生物活性檢測方法能夠準(zhǔn)確捕捉藥物候選物的生物活性。

3. 整體BsAbs表征策略

BsAbs的效力和安全性評估依賴于成功開發(fā)一個(gè)藥理學(xué)和臨床相關(guān)生物分析策略，該策略能夠反映雙特異性抗體的生物活性，并能夠區(qū)分高級結(jié)構(gòu)、效力和療效。其中重要的是開發(fā)表征和生物分析方法來研究重要的質(zhì)量屬性，包括整體穩(wěn)定性、片段化/聚集/免疫原性、抗原特異性、親和力、結(jié)合和解離速率、雙靶點(diǎn)結(jié)合的親和力（對于在同一細(xì)胞上的兩個(gè)靶點(diǎn)的分子）和MoA/生物活性。

BsAbs生物活性檢測案例研究

1. ELISA和SPR技術(shù)

ELISA和SPR技術(shù)常用于表征BsAbs的體外抗原結(jié)合特性。ELISA具有靈敏度高、開發(fā)速度快和成本相對較低等優(yōu)點(diǎn)，而SPR能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測結(jié)合事件，提供動(dòng)力學(xué)和熱力學(xué)參數(shù)。

2. 細(xì)胞表面配體結(jié)合檢測

通過流式細(xì)胞術(shù)和基于細(xì)胞的報(bào)告基因分析，可以評估BsAbs與其目標(biāo)的結(jié)合特異性和選擇性，這些信息在傳統(tǒng)的SPR或ELISA基礎(chǔ)結(jié)合分析中無法捕獲。

3. 效力檢測

針對BsAbs的效力檢測策略具有挑戰(zhàn)性，因?yàn)槠鋸?fù)雜的MoA涉及兩個(gè)靶點(diǎn)結(jié)合。效力檢測應(yīng)該根據(jù)MoA進(jìn)行定制，同時(shí)滿足QC和監(jiān)管部門的要求，成為穩(wěn)定和靈敏的方法，以檢測穩(wěn)定性中的任何結(jié)構(gòu)變化。

4. 效應(yīng)功能檢測

一些BsAbs通過靶向細(xì)胞表面蛋白或受體來增強(qiáng)ADCC效應(yīng)功能。根據(jù)MoA和其他分子特異性因素，效應(yīng)功能可能與一些安全事件相關(guān)，因此，優(yōu)選效應(yīng)功能減弱的Fc區(qū)域。

結(jié)論

BsAbs是一個(gè)極-具前景的新興治療領(lǐng)域。由于BsAbs與單特異性抗體在結(jié)構(gòu)和生物學(xué)上的差異，為BsAbs開發(fā)生物活性檢測策略帶來了獨(dú)-特的挑戰(zhàn)和考慮。本文總結(jié)了目前可用的生物分析技術(shù)平臺(tái)、生物活性檢測方法和相關(guān)的案例研究，以提供對設(shè)計(jì)BsAbs放行和表征策略的見解。了解和開發(fā)良好的生物活性檢測對于BsAbs的整體控制策略至關(guān)重要，它們將隨著BsAbs分子和現(xiàn)有分析技術(shù)的發(fā)展而不斷發(fā)展。

本文由義翹神州進(jìn)行整理，同時(shí)提供快速高效的雙特異性抗體表達(dá)服務(wù)。從抗體序列開始，我們可以表達(dá)多種雙特異性抗體形式，如BiTE、Diabody、CrossMab和DVD-IgG。

參考文獻(xiàn)：

Register AC, Tarighat SS, Lee HY. Bioassay Development for Bispecific Antibodies-Challenges and Opportunities. Int J Mol Sci. 2021;22(10):5350. Published 2021 May 19. doi:10.3390/ijms22105350