Fragment-based drug discovery(FBDD)，是先導(dǎo)化合物發(fā)現(xiàn)的主流方法之一。它利用核磁共振技術(shù)（NMR）、X-射線單晶衍射（X-ray）以及熱遷移分析（TSA） 等方法篩選出與靶蛋白有弱相互作用的小分子片段，之后基于其結(jié)構(gòu)信息對(duì)活性片段進(jìn)行優(yōu)化，進(jìn)而得到更高活性的先導(dǎo)化合物進(jìn)行新藥的研發(fā)。

在篩選小分子片段時(shí)，NMR能在接近生理?xiàng)l件的溶液中獲得結(jié)合部位信息以及K_d，但其缺點(diǎn)為只能檢測(cè)比較小的蛋白，且樣品消耗量大。X-ray則需要先制備蛋白晶體，并且蛋白晶體和其在溶液中的構(gòu)象可能會(huì)有差異。此外，這兩種方法都需要非常昂貴的設(shè)備，通常只能在專用的平臺(tái)由專業(yè)操作人員協(xié)助開展實(shí)驗(yàn)。

TSA（Thermal shift assay）通過檢測(cè)蛋白的熔解溫度Tm變化來進(jìn)行蛋白結(jié)合配體的篩選，其檢測(cè)速度快，實(shí)驗(yàn)門檻低。因此我們可以先使用TSA進(jìn)行初級(jí)篩選,之后結(jié)合NMR或X-ray進(jìn)行驗(yàn)證。TSA的主要技術(shù)有染料法以及無標(biāo)記的nanoDSF技術(shù)。在之前的文章中我們已經(jīng)介紹過這兩種技術(shù)的原理及對(duì)比, 小編今天將和大家分享荷蘭癌癥研究所（NKI）的研究人員發(fā)表在JoVE實(shí)驗(yàn)視頻期刊基于nanoDSF技術(shù)建立的片段化合物庫篩選Protocol。

實(shí)驗(yàn)小貼士

操作演示

除了無標(biāo)記nanoDSF檢測(cè)模塊外，Prometheus蛋白穩(wěn)定性分析儀還可搭載動(dòng)態(tài)光散射（DLS），靜態(tài)光散射（SLS）和背反射（Backreflection）模塊，只需要10μl樣品就可以完成均一性，熱穩(wěn)定性，膠體穩(wěn)定性的檢測(cè)。同時(shí)我們還提供自動(dòng)化解決方案，便于客戶進(jìn)行無人值守的高通量篩選。