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紫外分光度法進(jìn)行蛋白定量的實(shí)驗(yàn)方法
紫外分光度法進(jìn)行蛋白定量的實(shí)驗(yàn)方法
蛋白定量是蛋白質(zhì)檢測過程中的重要環(huán)節(jié)，檢測的方法有很多，有Bradford檢測法、Bradford斑點(diǎn)試驗(yàn)法、Coomassie 斑點(diǎn)試驗(yàn)法、紫外分光度檢測法。其中、紫外分光度法是蛋白質(zhì)定量方法中比較快的一種方法。
一、紫外分光光度法進(jìn)行蛋白定量的檢測原理：
由于蛋白質(zhì)分子對于不同光度波段的吸光率也有所不同，所以紫外分光度檢測法主要通過光系統(tǒng)來檢測蛋白分子的吸光率，從而確定蛋白質(zhì)的濃度進(jìn)行的蛋白定量。比如205nm的光波波長主要吸光為肽鏈分子。280nm波長下色氨酸與酪氨酸吸光率則這兩種分子以為主。
二、蛋白定量中蛋白質(zhì)溶液濃度的確定
1、純蛋白質(zhì)溶液：
a.在濾光波長為280nm的環(huán)境下對比其吸光率。
b.其中的抗體和BSA，估算公式為：蛋白質(zhì) A280 (1mg/ml)IgG =1.35； IgM=1.2； BSA=0.7。（單位/吸光率約等于1mg/ml）
2、蛋白定量中核苷酸類的蛋白溶液濃度測定：
a.在280nm和260nm或205nm光波長環(huán)境下對照其吸光率；
b.蛋白質(zhì)濃度估算公式：
280nm波長：蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）=(1.55×A280 )-(0.76×A260 )
208nm波長：蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）= A205 /(27 + 120 A280/ A205 )
一、紫外分光光度法進(jìn)行蛋白定量的檢測原理：
由于蛋白質(zhì)分子對于不同光度波段的吸光率也有所不同，所以紫外分光度檢測法主要通過光系統(tǒng)來檢測蛋白分子的吸光率，從而確定蛋白質(zhì)的濃度進(jìn)行的蛋白定量。比如205nm的光波波長主要吸光為肽鏈分子。280nm波長下色氨酸與酪氨酸吸光率則這兩種分子以為主。
二、蛋白定量中蛋白質(zhì)溶液濃度的確定
1、純蛋白質(zhì)溶液：
a.在濾光波長為280nm的環(huán)境下對比其吸光率。
b.其中的抗體和BSA，估算公式為：蛋白質(zhì) A280 (1mg/ml)IgG =1.35； IgM=1.2； BSA=0.7。（單位/吸光率約等于1mg/ml）
2、蛋白定量中核苷酸類的蛋白溶液濃度測定：
a.在280nm和260nm或205nm光波長環(huán)境下對照其吸光率；
b.蛋白質(zhì)濃度估算公式：
280nm波長：蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）=(1.55×A280 )-(0.76×A260 )
208nm波長：蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）= A205 /(27 + 120 A280/ A205 )
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