加油新學(xué)期

謹記：對抗污染，預(yù)防大于一切！

在細胞培養(yǎng)過程中，很多小伙伴兒一直受到支原體污染的困擾，我自己養(yǎng)的細胞曾經(jīng)也遇到過支原體污染，深受其害呀！針對于支原體污染來說，大家一定注意預(yù)防！如果已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一絲絲污染跡象，就要做到早發(fā)現(xiàn)、早挽救！如果細胞能夠救回來，還是可以繼續(xù)實驗的，不耽誤實驗進度。不過，確實也很難*清除啊！如果說實在救不回來，那就再買一株新的細胞吧！最后，要買細胞的同學(xué)和老師，可以電話或郵箱聯(lián)系我們哦！

支原體污染對細胞培養(yǎng)造成多方面的不良影響，已經(jīng)成為在細胞培養(yǎng)時的一個嚴(yán)重問題，嚴(yán)重干擾實驗結(jié)果的可信度。因此，定期進行支原體檢測和去除，確保無支原體存在細胞培養(yǎng)體系內(nèi)才能獲得準(zhǔn)確有效的實驗數(shù)據(jù)。

什么是支原體（Mycoplasma）

支原體是1898年Nocard等發(fā)現(xiàn)的一種類似細菌但不具有細胞壁的原核微生物，能在無生命的人工培養(yǎng)基上生長繁殖，直徑50-300nm，能通過細菌濾器。過去曾稱之為類胸膜肺炎微生物（pleuropneumonia-like organism，PPLO）。1967年正式命名為支原體。

支原體又稱霉形體，支原體細胞中可見的細胞器只有核糖體（支原體是原核細胞，原核細胞的細胞器只有核糖體）。支原體是目前發(fā)現(xiàn)的smallest、simplest的原核生物，可以輕松地通過濾膜，混入培養(yǎng)系統(tǒng)中，呈高度多形性，多數(shù)呈球形，也有桿形、絲狀、分支狀等多種形態(tài)。通常依附在細胞膜表面，支原體沒有剛性的細胞壁，因此普通的抗生素對它根本不起作用，實驗室常見的種類有：口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、發(fā)酵支原體、人型支原體、唾液支原體、肺支原體和梨支原體等。

支原體污染的后果

細菌和真菌造成的污染相對比較容易檢測、預(yù)防和去除，然而支原體造成的污染很難察覺，即使生長密度高達 10^7-10^9 CFU/mL，也很難有污染跡象（渾濁、pH變化等）。支原體污染后會導(dǎo)致細胞生長變慢，狀態(tài)變差，不會馬上使細胞致死，但會影響細胞內(nèi)的各種參數(shù)，如改變細胞膜抗原性，改變細胞新陳代謝，干擾核酸的合成，改變 DNA 轉(zhuǎn)染效率，導(dǎo)致染色體畸變等。 

支原體污染來源

1. 工作環(huán)境的污染

2. 培養(yǎng)基或其他試劑的污染

3. 污染支原體的細胞造成的交叉污染

4. 實驗器材帶來的污染

5. 操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)

6. 用來制備細胞的原始組織或器官的污染。

1. 疑似支原體污染，可通過檢測來確認是否污染；

2. 經(jīng)檢測沒有發(fā)現(xiàn)支原體污染，可采用支原體預(yù)防試劑，在平時實驗中做好環(huán)境和實驗用具的消毒工作；

3. 經(jīng)檢測確為支原體污染，使用支原體去除試劑進行挽救；如果救不回來的，只能重新復(fù)蘇一管或者引進新的細胞；如果能夠挽救回來，后續(xù)實驗中要定期采用支原體預(yù)防試劑，避免支原體的污染。

細胞系(帶STR鑒定) | 原代細胞 | 細胞培養(yǎng)基 | 血清 | 細胞培養(yǎng)添加因子 | 標(biāo)記細胞 | 耐藥細胞 | 生化檢測試劑盒 | WB試劑 | 抗體 等；ATAC-seq分析 | ChIP-seq分析 | 宏基因組測序分析 | 16S rRNA測序分析 | Pull down實驗 | RIP 實驗 | ChIP實驗 | Co-IP實驗 | 質(zhì)譜檢測 | WB檢測 | PCR檢測 | 細胞培養(yǎng)/增殖/凋亡/周期/遷移/侵襲/自噬 | 活體成像 | 免疫組化 | 電鏡檢測 | micro-CT 檢測  等。

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