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反相色譜柱是迄今在液相色譜中應用的技術，主要是因為它適用于分析絕大多數的非性物質和多的可離子化的及離子化合物。做好反相色譜柱使用及維護工作，可可以延長色譜柱使用壽命。
1、在條件允許情況下，在使用前盡量對色譜柱按照說明書方法進行柱效測試。以確保色譜柱的正常。
2、硅膠基質色譜柱使用溫度應低于60℃。
3、樣品：盡量將樣品溶解在流動相或性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫，則需要將樣品溶解在初始流動相或性相近的溶劑中。樣品溶液不應含有任何顆粒物，盡量使用0.5μm或更小粒徑的濾膜過濾。樣品溶液如果使用溶劑(例如，流動相為水，樣品溶劑為甲醇)，為達到較好峰形，需要降低進樣量
4、流動相：流動相，是含有緩沖鹽的流動相，盡量當日實驗當日配制；如果使用了前日配制的流動相，請確保流動相pH值沒有變化，并確保流動相沒有長菌。 流動相的pH值取決于您的應用和色譜柱填料類型。我們建議在的色譜柱盡量在pH2~8范圍內使用。請盡量避免在常規(guī)流動相中使用比例的水(>95%)作為流動相，可能會造成保留時間的不穩(wěn)定或者色譜柱鍵合相的損害。
5、色譜柱平衡：在進行分析之前，請使用至少20倍柱體積的流動相沖洗色譜柱，以使色譜柱達到平衡。
6、色譜柱保護：對于“臟”的樣品以及組分未知的樣品，請盡量使用在線濾器或保護柱，如果可能，使用SPE小柱對樣品進行前處理是較好的選擇。
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