1. 儀器安裝:
將配件中的硅膠管根據(jù)實際需求剪成不同的長度,按照上面左側(cè)示意圖連接好(注意接緊,止漏水)。蒸餾水和堿液的硅膠管另一端必須浸泡在所對應(yīng)的液面以下。蒸餾水出口和冷卻水出口的硅膠管另一端放入排水池(桶)。冷卻水連接自來水。在儀器正面左側(cè)托盤上安放空的消化管,右側(cè)放錐形瓶,插入帶橡皮塞的玻璃嘴。
2. 儀器檢測:
⑴.打開冷卻水(水開關(guān)),注意流量,控制在3-4L/分鐘。接上電源線,打開電源總開關(guān)。儀器開始自動加水,從側(cè)面燒杯水位觀測口可以看見燒杯內(nèi)的水位上升,一段時間后會自動停止加水(由系統(tǒng)內(nèi)水位探針自動控制,水位不足會持續(xù)加水)。
⑵.打開加堿按鈕,加堿量大概在30mL左右時,關(guān)閉加堿按鈕.接著打開蒸餾按鈕,儀器開始蒸餾。儀器工作10分鐘左右(錐形瓶內(nèi)液體在100-150mL左右),關(guān)閉蒸餾按鈕(燈熄滅),儀器停止蒸餾,整機檢測完成。
3. 實驗蒸餾:
在消化管托盤上換上已消化完成并冷卻稀釋后(一般加20ml蒸餾水稀釋)的樣品,右側(cè)換成準(zhǔn)備好的錐形瓶(錐形瓶內(nèi)加入50ml硼酸和4-5滴混合指示劑,具體硼酸量由各自實驗情況確定),調(diào)整氨氣回流玻璃嘴和瓶塞,使玻璃嘴浸泡在硼酸液面以下。
然后先打開加堿按鈕,加到自己所需要的堿的用量后(確保液體顏色變黑為止),關(guān)閉加堿按鈕。然后再打開蒸餾按鈕。
蒸餾即將完成時(一般蒸餾時間8-12分鐘左右,錐形瓶內(nèi)液體在150-200ml左右),提起橡皮塞,移開錐形瓶,使氨氣回流玻璃嘴離開液面,用蒸餾水沖洗玻璃嘴外壁,繼續(xù)蒸餾10秒鐘后,關(guān)閉蒸餾按鈕,取下錐形瓶待滴定用。
注意:更換樣品蒸餾時不需要關(guān)閉電源總開關(guān)。
4.滴定/計算(以下數(shù)據(jù)僅供參考,以本行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)為主)
用0.05mol/LHCL滴定接收瓶內(nèi)的溶液,滴定至(暗)灰色時為止,記下消耗HCL的毫升數(shù),按下列式子計算蛋白含量:
蛋白質(zhì)%=
式中: V1—樣品消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積,ml;
V2—試劑空白消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積,ml;
N—硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液當(dāng)量濃度;
0.014—1N硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml相當(dāng)于氮克數(shù);
m—樣品的(體積),g(ml);
F—蛋白質(zhì)系數(shù),按16%計算乘以6.25即為蛋白質(zhì)。
(空白測定:用0.1克糖代替樣品或不加樣品作空白測定)
5. 清洗/關(guān)機
先換上空的消化管和錐形瓶,把連堿的硅膠管換成新的一個硅膠管,另一端放入蒸餾水容器內(nèi),然后按蒸餾按鈕,用蒸餾水清洗堿泵,一般30秒鐘左右后取下堿進硅膠管,排空堿路里面的液體。
然后關(guān)閉冷卻水(自來水),打開蒸餾水排水開關(guān),排完蒸餾水。后關(guān)閉總電源開關(guān),拔掉電源線。(后一天實驗做完后必須進行關(guān)機清洗操作)。
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