(1) 照明光源燈室在顯微外的初步調(diào)整
① 首先將燈室的外殼打開,壓彈簧夾子將鹵素?zé)襞菅b入插座中,安裝時避免手指直接接觸燈泡(可用柔軟的布或紙隔住),以免燈泡上留有指紋等臟物,影響燈泡的使用壽命。
② 把燈室擺在桌面上,接通電源后,用的螺絲刀調(diào)節(jié)燈的調(diào)焦旋鈕孔(標(biāo)有"←→"),使燈絲投影在1-2m外的墻上,將燈絲成像調(diào)至清晰;然后調(diào)節(jié)燈的高低位置調(diào)節(jié)絲孔(標(biāo)有"──"),使燈絲位置高低適當(dāng);再調(diào)節(jié)燈的左右位置調(diào)節(jié)螺絲孔(標(biāo)有"──"),使燈絲左右位置合適。
2) 光源發(fā)光體(燈絲)在奧林巴斯顯微鏡內(nèi)位置的檢驗和校正:
目的是為了把發(fā)光體的像端端正正地調(diào)入物鏡的視域范圍內(nèi),從光源的角度去確保奧林巴斯顯微鏡的視域受到充分而均勻的照明,這是調(diào)整庫勒照明系統(tǒng)的前提條件。需要的基本工具:對中望遠鏡購置奧林巴斯顯微鏡時已配備。
① 拔掉燈庫內(nèi)的毛玻璃套筒,把燈室裝回奧林巴斯顯微鏡上;
② 選用10×物鏡,開亮光源程序找樣品并調(diào)焦清晰,再換用40×物鏡把樣品調(diào)焦清 晰(40×物鏡可以看清燈絲的全貌);
③ 把聚光鏡的孔徑光闌和視場光闌均開到大;
④ 拔掉其中一個目鏡,換上對中望遠鏡,抓住白色部分,另一手伸縮黑色接目鏡,就可在視野中看到燈絲像;
⑤ 如燈絲位置不合適,調(diào)"──"孔,把燈絲像沿水平方向調(diào)好,調(diào)"──"孔,把絲像沿垂直方向調(diào)好,直至將燈絲像調(diào)至剛好充滿物鏡孔徑的光圓像;
⑥ 調(diào)整完畢后,將毛玻璃套筒插回原位,拔掉對中望遠鏡,換回目鏡作下一步調(diào)整。以上所述照明光源燈室在奧林巴斯顯微鏡外的調(diào)整和光源發(fā)光體在奧林巴斯顯微鏡內(nèi)位置的校驗,只需在奧林巴斯顯微鏡初次安裝調(diào)試及更換燈泡時進行,平時使用奧林巴斯顯微鏡時不能隨意亂調(diào)亂動。萬一調(diào)亂時,可按上述步驟調(diào)回原狀。
(3) 庫勒照明(Kohler)系統(tǒng)的正確調(diào)整:
奧林巴斯顯微鏡的正確調(diào)試,主要工作之一是照明光路系統(tǒng)的調(diào)整,而其中的關(guān)鍵是庫勒照明系統(tǒng)的調(diào)整。對于每一位使用奧林巴斯顯微鏡的人員,特別是作顯微照像的人員來說,應(yīng)該對庫勒照明系統(tǒng)的原理及其調(diào)整步驟有一定的了解和掌握,才能充分發(fā)揮奧林巴斯顯微鏡應(yīng)有的功能,拍出來的照片才能在效果上比較一致而又完善。
庫勒照明系統(tǒng)的原理簡單來說就是:光源發(fā)光體上任意一點發(fā)出的光,可以照明奧林巴斯顯微鏡的視域范圍,而光源發(fā)光體上每一點所發(fā)出的光匯集起來,在奧林巴斯顯微鏡的視域中就實現(xiàn)了非常充分而又均勻的照明。
調(diào)整庫勒照明系統(tǒng)的目的,是為了使所觀察的視域能獲得均勻而又充分的照明,防止雜散光對照像系統(tǒng)造成影響或干擾,以免照像時在底片形成灰霧。
高調(diào)整庫勒照明系統(tǒng)的必要部件:視場光闌、可進行合軸調(diào)整的聚光鏡系統(tǒng)。
① 選用10×物鏡和10×目鏡;
② 把聚光鏡前端透鏡擺進光路中,孔徑光闌調(diào)至適中的位置上(不大不小),再把聚光鏡升到頂?shù)奈恢蒙?,聚光鏡轉(zhuǎn)盤調(diào)至明視野"J"位置;
③ 把視場光闌調(diào)至小(0。1);
④ 載物臺上放上已封片的生物樣品,開亮光源,調(diào)焦清晰;
⑤ 視域中會出現(xiàn)一個局部照明的區(qū)域或亮斑,這是視場光闌的模糊像,在其中可以清晰地看到樣品的細節(jié);在它之外是較暗的視域,不一定能把樣品的細節(jié)看得清楚;
⑥ 把聚光鏡微微地向下調(diào),使視野中的亮斑逐漸收小,慢慢變成一個清晰的多邊形象,這便是視場光闌的清晰像;
⑦ 一般情況下,多邊形象并不在視域中央,需要調(diào)整聚光鏡的一對調(diào)中螺絲,把視場光闌多邊形的像調(diào)至中央位置;
⑧ 逐漸開大視場光闌,使多邊形象成為視域的內(nèi)接多邊形,進一步核對調(diào)中的狀況,如對中不夠理想,繼續(xù)微微調(diào)對中螺絲;
⑨ 將視場光闌稍為再微微開大一些,使它的多邊形象恰好消失在視域的邊緣上,至此,庫勒照明系統(tǒng)調(diào)整完畢。庫勒照明系統(tǒng)調(diào)整好以后,整個視域照明均勻,拍攝的顯微照片明亮清晰,反差正常。
在日后使用過程中應(yīng)特別注意:
a。 視場光闌不可任意開大,但可隨物鏡倍數(shù)的增大而將視場光闌收小,隨物鏡倍數(shù)的減小而開大;
b。 聚光鏡的高低位置不準(zhǔn)亂調(diào),否則會破壞已調(diào)整好的庫勒照明系統(tǒng);
c。 使用10×以下物鏡時要將聚光鏡前端透鏡擺出光路外,使用10×或10×以上物鏡時要將前端透鏡擺入光路中;
d。 關(guān)于物鏡倍數(shù)與視場光闌大小配合問題,在實際使用過程中,作為一般觀察不一定要收小或開大視場光闌,但作顯微照相時,為了避免雜散光線對照相系統(tǒng)的干擾,以便能拍攝到較完善的照片,則應(yīng)在使用每一個倍數(shù)的物鏡時,把視場光闌調(diào)節(jié)到正好消失于所觀察的視域邊上,這是比較繁復(fù)的工作,但又非做不可。
較為簡便的方法是把與各個倍數(shù)物鏡相對應(yīng)的視場光闌事先調(diào)整好,并作好記號,以后使用時根據(jù)記號直接調(diào)至相應(yīng)的位置。
(4) 孔徑光闌的正確使用:
由于聚光鏡的孔徑光闌可以影響奧林巴斯顯微鏡的分辨率,使用時應(yīng)掌握正確的使用方法。
過去由于對孔徑光闌的認識不足,往往把它當(dāng)作是調(diào)節(jié)視野亮度的工具。雖然調(diào)節(jié)孔徑光闌在一定程度上可以改變視野的亮度,但會直接影響成像的反差、對比度及分辨率,在使用過程中應(yīng)盡可能避免。為了發(fā)揮聚光鏡孔徑光闌的作用,以便在觀察時,尤其在作顯微照相時獲得分辨率,在每換用一個倍數(shù)的物鏡時,在樣品調(diào)焦清晰后,需要調(diào)節(jié)孔徑光闌,使它的大小正好等于所用物鏡數(shù)值孔徑(物鏡孔徑像)的2/3。
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