氧化應(yīng)激（Oxidative Stress）是指體內(nèi)氧化與抗氧化作用失衡，傾向于氧化，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞炎性浸潤(rùn)，蛋白酶分泌增加，產(chǎn)生大量氧化中間產(chǎn)物。氧化應(yīng)激是由自由基在體內(nèi)產(chǎn)生的一種負(fù)面作用，并被認(rèn)為是導(dǎo)致衰老和疾病的一個(gè)重要因素。

細(xì)胞和組織內(nèi)蛋白巰基的氧化狀態(tài)可指示氧化應(yīng)激。然而，組織樣品中蛋白巰基氧化狀態(tài)的定量檢測(cè)還面臨一些技術(shù)障礙，譬如如何制備樣品而不影響其氧化狀態(tài)，以及如何檢測(cè)相對(duì)微小的變化。

zui近，澳大利亞西澳大學(xué)的研究人員開(kāi)發(fā)出一種新的熒光技術(shù)，能克服上述問(wèn)題，準(zhǔn)確測(cè)定蛋白巰基的氧化狀態(tài)。他們通過(guò)熒光酶標(biāo)儀可靠地測(cè)定蛋白巰基氧化狀態(tài)的整體微小變化，隨后通過(guò)SDS-PAGE檢測(cè)特定蛋白的氧化狀態(tài)。

他們開(kāi)發(fā)出的這種新技術(shù)能改善蛋白溶解，并避免樣品中蛋白被認(rèn)為氧化。在溶解步驟，還原型巰基被標(biāo)上綠色熒光的BODIPY FL馬來(lái)酰亞胺。在去除了過(guò)量的BODIPY FL馬來(lái)酰亞胺之后，剩余的氧化型蛋白巰基被TCEP還原。隨后這種新生成的還原型氧化巰基與紅色熒光的Texas Red® 馬來(lái)酰亞胺相互作用，并去除多余的染料。

由于BODIPY® FL and Texas Red® 熒光基團(tuán)顯示出極少的熒光發(fā)射重疊，因此，利用這兩種熒光染料標(biāo)記蛋白能夠?qū)崿F(xiàn)同一個(gè)樣品中氧化性和還原型蛋白巰基的定量測(cè)定，所需的儀器只是一臺(tái)熒光酶標(biāo)儀。通過(guò)測(cè)定氧化型和還原型蛋白巰基，研究人員能夠檢測(cè)到生物樣品的微小差異。

此外，這種雙標(biāo)記技術(shù)還能檢測(cè)特定蛋白的巰基氧化狀態(tài)。通過(guò)SDS-PAGE和熒光凝膠掃描儀，就能了解特定蛋白巰基的氧化狀態(tài)。