菌落總數(shù)即為食品檢樣經(jīng)過處理,在一定條件下(如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等)培養(yǎng)后,所得每g(mL)檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。菌落總數(shù)主要作為判定食品被污染程度的標(biāo)志,也可以應(yīng)用這一方法觀察細菌在食品中繁殖動態(tài),以便對被檢樣品進行衛(wèi)生學(xué)評價時提供依據(jù)。
每種細菌都有它一定的生理特性,培養(yǎng)時應(yīng)用不同的營養(yǎng)條件及其他生理條件(如溫度、培養(yǎng)時間、pH、需氧性質(zhì)等)去滿足其要求才能將各種細菌都培養(yǎng)出來。但在實際工作中,一般都只用一種常用的方法。細菌菌落總數(shù)的測定,所得結(jié)果,只包括一群能在營養(yǎng)瓊脂上發(fā)育的嗜中溫性需氧菌的菌落總數(shù)。菌落總數(shù)并不表示樣品中實際存在的所有細菌總數(shù),菌落總數(shù)并不能區(qū)分其中細菌的種類,所以有時被稱為雜菌數(shù),需氧菌數(shù)等。
菌落總數(shù)檢測一般步驟為:
采樣 — 樣品制備與稀釋 — 倒平板 — 涂布平板 — 倒置培養(yǎng) — 菌落計數(shù) — 計算菌落總數(shù)
在常見的菌落檢測過程中,有哪些產(chǎn)品是可以使用呢?我們在此梳理一下。
樣品制備,需要對樣品進行均質(zhì),根據(jù)需要檢測的樣品不同。應(yīng)用不同的均質(zhì)設(shè)備,如均質(zhì)機,拍打式均質(zhì)器等;
樣品的稀釋,國標(biāo)中采用1:10的十倍稀釋方法,各種手動精密移液器,瓶口分液器,移液管控制器為液體操作提供了保證。
倒平板,使用的培養(yǎng)基為含有瓊脂的固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基在配備的過程中需要經(jīng)過煮沸和保溫的步驟。加熱磁力攪拌器,可極大節(jié)約培養(yǎng)基制備時間。在倒平板之前,需要恒溫培養(yǎng)基46±1 ℃, 恒溫水浴鍋,可以提供的溫度控制和恒溫條件;
涂布平板,培養(yǎng)基在培養(yǎng)皿中冷卻成固態(tài)之后,將稀釋后的樣品用移液器取1mL,滴到培養(yǎng)基表面,用涂布棒涂勻。有的培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)盤,可以有效的將樣品液均勻的涂布在培養(yǎng)基表面。
倒置培養(yǎng),將涂布完畢的平板,放入恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng),一般培養(yǎng)時間約為48h。各種規(guī)格的臺式及落地式培養(yǎng)箱,非常適合規(guī)范化培養(yǎng)要求。
菌落數(shù)計算,經(jīng)過48小時的培養(yǎng)之后,在培養(yǎng)基表面會長出菌斑,每個菌斑代表一個微生物。一般在培養(yǎng)皿中菌落數(shù)為30-300個之間,為有效菌落數(shù)。低于30個,會因為樣本量不足,隨機性大;超過300個,會因為菌落數(shù)太多,過于密集產(chǎn)生菌斑重疊等現(xiàn)象,不利于準(zhǔn)確計數(shù)。菌落計數(shù)器,是帶有非閃爍式環(huán)形光源,放大鏡,壓力傳感器,計數(shù)筆等,可以讓使用者輕松計數(shù)。
計算菌落總數(shù),培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)需要通過公式換算。 菌落計數(shù)器配套軟件可以直接通過壓力傳感器進行培養(yǎng)皿中菌落計數(shù),通過軟件內(nèi)嵌程序直接計算出被檢測樣品中菌落總數(shù)。
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