NASBA(Nucleic acid sequence-based amplification)技術(shù)是一項(xiàng)以RNA 為模板的快速等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),這項(xiàng)技術(shù)特別適用于RNA 分子的檢測(cè)。其特點(diǎn)是整個(gè)擴(kuò)增過程在恒溫條件下進(jìn)行,因此不需要特殊(如PCR 儀)的控溫裝置,大大避免了PCR 擴(kuò)增過程中復(fù)雜的溫度變化。
于常海教授借助NASBA技術(shù)平臺(tái),開發(fā)了世界上*個(gè)成熟而廣泛適用的禽流感早期快速診斷系統(tǒng)此系統(tǒng),包括對(duì)禽流感各亞型包括高致病性病毒的特異性檢測(cè),為世界上多個(gè)國(guó)家地區(qū)用于禽流感的早期常規(guī)篩查和疫情防控, 推動(dòng)了國(guó)內(nèi)外禽流感疫情監(jiān)控的發(fā)展。
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該技術(shù)平臺(tái)技術(shù)以NASBA病毒檢測(cè)系統(tǒng)為中心,在確保高靈敏度、高準(zhǔn)確率的前提下,使檢測(cè)周期縮短至半天;且無需特殊的昂貴儀器,檢測(cè)人員無需特殊技能;它是一個(gè)速度快、成本低并且實(shí)現(xiàn)了全自動(dòng)檢測(cè)的診斷系統(tǒng),更重要的是此靈敏的設(shè)備適用于資源有限的高感染區(qū),如:條件落后的基層偏遠(yuǎn)地區(qū)。這些地區(qū)也往往是疫情爆發(fā)的zui前沿。該技術(shù)的應(yīng)用顯著減少了大面積篩查時(shí)的工作量和成本。
由于該技術(shù)是恒溫?cái)U(kuò)增,加上標(biāo)準(zhǔn)化的操作步驟,使不同實(shí)驗(yàn)室所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有很高的可比性。
于常海開發(fā)的NASBA技術(shù)平臺(tái)的*性包括:
NASBA 不會(huì)受到抗體存在的影響,能夠區(qū)分接種疫苗的生物體中目的病毒存在與否 。
NASBA 在禽流感檢測(cè)中能夠區(qū)分致病菌株和非致病菌株
對(duì)禽流感H5N1病毒的檢測(cè),已經(jīng)充分的證明:NASBA的靈敏度可以與病毒檢測(cè)“金標(biāo)準(zhǔn)”——病毒分離法相媲美。
與NASBA相比, 病毒培養(yǎng)方法操作繁瑣、實(shí)驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng),操作嚴(yán)格。即使熟練的技術(shù)人員至少需要14天的時(shí)間完成整個(gè)過程。
使用NASBA技術(shù),在zui適實(shí)驗(yàn)條件下1.5小時(shí)能夠擴(kuò)增1012倍,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR的109倍的擴(kuò)增效果。
于常海教授研發(fā)團(tuán)隊(duì)迄今已成功開發(fā)出可檢測(cè)禽流感群特異性( H1-H15 )(NASBA-AIV)、H5 亞型(NASBA-H5)、H7 亞型(NASBA-H7)的NASBA/ECL 檢測(cè)試劑盒。
NASBA 技術(shù)操作簡(jiǎn)便,自動(dòng)化水平高,可以減少人為造成的誤差。而且還是一種高通量方法,可以同時(shí)檢測(cè)50 個(gè)樣本,非常適用于大規(guī)模樣品的篩查,節(jié)省基層使用時(shí)的檢測(cè)成本。NASBA 技術(shù)的擴(kuò)增產(chǎn)物為RNA 分子,使用者可以根據(jù)需要選擇不同的檢測(cè)方法,如電化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)法等。而且,與PCR 的產(chǎn)物DNA 分子不同,RNA 分子不易對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器和環(huán)境造成污染,避免了產(chǎn)物交叉污染實(shí)驗(yàn)儀器、操作環(huán)境導(dǎo)致的假陽性結(jié)果。適用于NASBA 技術(shù)的樣品范圍很廣,除動(dòng)物組織,血液、體液樣本外,還可對(duì)環(huán)境樣本進(jìn)行監(jiān)測(cè),如禽類飼養(yǎng)場(chǎng)所、交易場(chǎng)所、運(yùn)輸工具等等,因此為監(jiān)測(cè)和控制禽流感的傳播提 供了有效的依據(jù)和手段。
基于NASBA技術(shù)檢測(cè)平臺(tái)的禽流感診斷產(chǎn)品為世界*廣泛使用的禽流感早期快速診斷系統(tǒng),被列為中國(guó)禽流感檢測(cè)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、世界動(dòng)物衛(wèi)生組織禽流感檢測(cè)推薦方法。該產(chǎn)品通過世界糧農(nóng)組織和世界動(dòng)物衛(wèi)生組織參考實(shí)驗(yàn)室評(píng)估驗(yàn)證,為*在日本政府農(nóng)林水產(chǎn)省成功注冊(cè)的中國(guó)疫病檢測(cè)產(chǎn)品,也是日本僅有的禽流感檢測(cè)注冊(cè)產(chǎn)品。該成果在《自然-生物科技》、《柳葉刀》、《病毒學(xué)雜志》等刊物上發(fā)表12篇SCI論文,獲33項(xiàng),已應(yīng)用于檢測(cè)SARS、口蹄疫、新城疫、豬瘟等病毒。
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