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基于Orbitrap ID-X Tribrid MS技術(shù)的中藥柴胡體外腸內(nèi)菌代謝物分析

閱讀：451 發(fā)布時(shí)間：2020-06-19
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傳統(tǒng)中藥以口服用藥為主，其化學(xué)成分受胃腸道酸堿性、腸道微生物及代謝酶等影響常發(fā)生轉(zhuǎn)化，使其生物利用度降低，體內(nèi)除中藥原形成分外，還可能有大量代謝產(chǎn)物的存在，這些體內(nèi)吸收化學(xué)成分是闡明中藥發(fā)揮藥效機(jī)制的直接物質(zhì)基礎(chǔ)。要想揭示中藥體內(nèi)藥效物質(zhì)，代謝產(chǎn)物研究是*的重要組成部分，尤其是苷類及其他結(jié)構(gòu)易轉(zhuǎn)化的化學(xué)成分(如萜類等)，其生物利用度較低，在體內(nèi)主要以代謝產(chǎn)物的形式存在，在此種情況下，代謝產(chǎn)物可能是藥效的或主要來源。然而，由于中藥成分的代謝規(guī)律不明確、代謝產(chǎn)物含量低難以鑒定等原因，大大制約了中藥體內(nèi)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究。

為了更加深入的研究中藥體內(nèi)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，需要利用高分辨質(zhì)譜對中藥體內(nèi)代謝物進(jìn)行更深度的鑒定分析。然而由于中藥體內(nèi)的代謝物通常含量很低，且同時(shí)受到基質(zhì)背景的干擾，傳統(tǒng)LC Q-TOFMS高分辨質(zhì)譜的DDA數(shù)據(jù)采集模式難以獲得低含量代謝物的二級質(zhì)譜圖用于結(jié)構(gòu)鑒定。新-代Orbitrap ID-X Tribrid三合 -質(zhì)譜儀由于具有Acquire X智能化數(shù)據(jù)采集模式，自動迭代生成排除列表及包含列表，可以獲得極低含量組分的多級質(zhì)譜用于代謝物的深度分析。

柴胡Bupleuri Radix為傘形科植物柴胡(又稱北柴胡) Bulpeurum chinese DC.和狹葉柴胡(又稱南柴胡) Bulpeurum scorzonerifo-lium Willd的干燥根，其性味苦涼、微寒，具有解表和里、疏肝解郁、升舉陽氣之功效。柴胡化學(xué)成分復(fù)雜，其中皂苷類、揮發(fā)油類、黃酮類為柴胡的主要活性成分，具有免疫調(diào)節(jié)、抗抑郁、保肝、抗腫瘤、解熱抗炎等藥理作用。近年來，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)的成熟與發(fā)展已被應(yīng)用于柴胡皂苷類組分的代謝研究]。然而，單個活性組分的代謝研究以及部分代謝物的鑒定結(jié)果仍然無法全面綜合的評價(jià)柴胡的質(zhì)量和體內(nèi)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

本實(shí)驗(yàn)采用離體實(shí)驗(yàn)的代謝研究方法，通過具有AcquireX采集功能的Orbitrap ID-X Tribrid MS技術(shù)對柴胡代謝產(chǎn)物進(jìn)行整體分析。首先用富含腸內(nèi)菌的糞便懸浮液與柴胡提取物在厭氧條件下溫孵，利用Compound Discoverer 3.0代謝物分析軟件對采集的高分辨質(zhì)譜數(shù)
據(jù)進(jìn)行解析，終構(gòu)建柴胡的腸內(nèi)菌代謝指紋圖，以期為中藥的臨床合理應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

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