諾博萊德 DAB法顯色試劑盒 顯色與信號(hào)檢測(cè)

NobleRyder  SW9818  DAB法顯色試劑盒（山羊IgG）,Western Blotting Goat IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：SW9818

產(chǎn)品名稱：DAB法顯色試劑盒（山羊IgG）,Western Blotting Goat IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

產(chǎn)品規(guī)格：1盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

英文名稱：Western Blotting Goat IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

中文名稱：DAB法顯色試劑盒（山羊IgG）

規(guī)格：1盒

儲(chǔ)存條件：-20℃，avoid light，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

保存：

-20℃避光密閉保存，一年有效。若經(jīng)常使用，可將封閉試劑，抗體稀釋液和 20 倍 DAB 顯色液B 存放于 2-8℃以方便使用。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

SDS-PAGE電泳后，蛋白質(zhì)按照分子量大小分離，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）后，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色以檢測(cè)電泳分離的特異性的蛋白。

操作步驟：(僅供參考)

常規(guī)電泳轉(zhuǎn)膜后:

1) 清洗轉(zhuǎn)印膜：將膜剝離下后，作好標(biāo)記，一般在左上角剪一缺口。室溫用 TBS-T 漂洗 3 次每次 5min, 以盡量洗去轉(zhuǎn)印膜上的 SDS，防止影響后面的抗體結(jié)合。

2) 按 5g 封閉試劑加100ml 雙蒸水計(jì)，配制膜封閉液，配好的膜封閉液為乳白色懸液，將漂洗過的轉(zhuǎn)印膜，封閉液內(nèi)，搖床震動(dòng)，室溫封閉 30min。用 TBS-T ，PH7.6 洗液，室溫漂洗 3 次每次 5min。

3) 將 10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成 1×（10ml 10×抗體稀釋液加入 90ml 雙蒸水，混勻，可 4℃ 保存三個(gè)月）。此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液。

4) 用 1×的抗體稀釋液稀釋抗體。根據(jù)用量以及一抗的推薦稀釋濃度來稀釋一抗。將雜交膜放入雜交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育過夜或 37℃搖動(dòng)孵育 2h。此用過的抗體一般可回收第二 天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步將膜沿電泳方向剪成條，分別作好標(biāo)記，分開孵育。

5) 用 TBS-T，PH7.6洗液，室溫漂洗 3 次每次 5min。

6) 用稀釋好的抗體稀釋液稀釋抗體。根據(jù)用量，按 10ml 抗體稀釋液加入 1-2ul HRP 標(biāo)記二抗的比例，配制二抗工作液。將雜交膜放入雜交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃搖動(dòng)孵育 1h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。

7) 用 TBS-T ，PH7.6 洗液，室溫漂洗 3 次每次 10min。

8) 配制 DAB 顯色：根據(jù)用量，取 TBS-T 4ml，加入 DAB 顯色液 A、DAB 顯色液 B 各200ul，混勻，加 在膜正面，室溫下顯色。在目標(biāo)條帶顯出后，而且背景未出時(shí)，放入水中終止顯色。

注意事項(xiàng)：

1. 請(qǐng)根據(jù)一抗來源選擇試劑盒。

2. western blotting DAB 顯色法操作簡(jiǎn)單，但其敏感性與 ECL 發(fā)光發(fā)有一定的差距，一般只適用于豐 度較高的蛋白。

3. 可以根據(jù)顯色結(jié)果來優(yōu)化實(shí)驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間。如背景過深，可延長(zhǎng)膜封閉時(shí)間，加長(zhǎng)最終漂洗次數(shù)與 時(shí)間。如果條帶過弱，可延長(zhǎng)抗體孵育時(shí)間。

4. 如果wan全沒有條帶，請(qǐng)檢查前期蛋白處理及實(shí)驗(yàn)過程， 如果確認(rèn)無誤，反復(fù)兩次依舊無結(jié)果， 請(qǐng)換用 ECL 發(fā)光法顯色。

5. TBS-T（0.01M）配制方法：稱取 NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用 800ml 的雙蒸水溶解，用鹽酸調(diào) PH 到 7.6，再加入 0.5ml Tween－20，用雙蒸水 加至 1000ml，混勻即可。（也可按照自己的配制習(xí)慣來配制）

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