ECL化學發(fā)光法檢測試劑盒 顯色與信號檢測

NobleRyder  SW0898  ECL化學發(fā)光法檢測試劑盒（小鼠IgG）,Western blotting（小鼠IgG）

產(chǎn)品貨號：SW0898

產(chǎn)品名稱：ECL化學發(fā)光法檢測試劑盒（小鼠IgG）,Western blotting（小鼠IgG）

產(chǎn)品規(guī)格：1盒

產(chǎn)品簡介：

英文名稱：Western blotting（小鼠IgG）

中文名稱：ECL化學發(fā)光法檢測試劑盒（小鼠IgG）

規(guī)格：1盒

儲存條件：-20℃，avoid light，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder  SW0898  ECL化學發(fā)光法檢測試劑盒（小鼠IgG）,Western blotting（小鼠IgG）產(chǎn)品簡介：

SDS-PAGE電泳后，蛋白質(zhì)按照分子量大小分離，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）后，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶標記的第二抗體起反應，加入發(fā)光底物后，能讓膠片感光。經(jīng)顯影和定影后，可以在膠片上顯示出條帶（抗原所在位置）。

操作步驟：(僅供參考)

常規(guī)電泳轉膜后:

1) 清洗轉印膜：將膜剝離下后，作好標記，一般在左上角剪一缺口。室溫用 TBS-T 漂洗 3 次每次 5min,以盡量洗 去轉印膜上的 SDS，防止影響后面的抗體結合。

2) 按 5g 封閉試劑加 100ml 雙蒸水計，配制膜封閉液，配好的膜封閉液為乳白色懸液，將漂洗過的轉印膜放入封閉液內(nèi)，置搖床孵育，室溫封閉 30min。用 TBS-T 緩沖液（PH7.6）洗膜，室溫漂洗 3 次每次 5min。

3) 將10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成 1×（10ml 10×抗體稀釋液加入 90ml 雙蒸水，混勻，可 4℃保存三個月）。此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液。

4) 用 1×的抗體稀釋液稀釋一抗。根據(jù)用量以及一抗的推薦稀釋濃度來稀釋一抗。將雜交膜放入雜交袋中，加入 一抗工作液，封口，4℃孵育過夜或 37℃搖動孵育 2h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。注：如果所 加一抗不同，可在此步將膜沿電泳方向剪成條，分別作好標記，分開孵育。

5) 用 TBS-T 緩沖液（PH7.6）洗膜，室溫漂洗3次每次 5min。

6) 用 1×的抗體稀釋液稀釋二抗。根據(jù)用量，按10ml抗體稀釋液加入 1-2 ul HRP 標記二抗的比例，配制二抗工作 液。將雜交膜放入雜交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃搖動孵育 1h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用 一次。

7) 用 TBS-T 緩沖液（PH7.6）洗膜，室溫漂洗3次每次10min。

8) 根據(jù)用量，取 ECL 發(fā)光液 A、B 等量混勻，加在膜正面，暗室顯色 1-5 分種。傾去顯色液，小心用紙吸去顯色液，在上面蓋一層平整的透明紙。再取出感光膠片，做好標記，輕輕的放在膜上，顯色 30 秒到 1 分鐘，取出膠片浸入顯影液中，觀察顯色情況，再放入定影液中 1 分鐘。根據(jù)條帶強弱，再次感光時可減短或者加長感光時間（從 5 秒到 30 分鐘）以期達到理想結果。

注意事項：

1. 請根據(jù)一抗來源選擇試劑盒。

2. 可以根據(jù)顯色結果來優(yōu)化實驗反應時間。如背景過深，可延長膜封閉時間，加長最終漂洗次數(shù)與時間。如果條 帶過弱，可增加抗體濃度，可延長抗體孵育時間或加長感光時間。

3. TBS-T（0.01M，PH7.6）配制方法：稱取 NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用 800ml 的雙蒸水溶解，用鹽酸調(diào) PH 到 7.6， 再加入 0.5ml Tween－20，用雙蒸水 加至 1000ml，混勻即可。（也可按照自己的配制習慣來配制）

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