常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了zui經(jīng)典的考馬斯亮藍(lán)R250染色和脫色方法，可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白電泳凝膠的常規(guī)染色和脫色或Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測(cè)。

NobleRyder 常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒中的染色液和脫色液經(jīng)過(guò)改良，不含有毒的甲醇，含有刺激性氣味的乙酸。采用常規(guī)染色脫色方法累計(jì)時(shí)間達(dá)到2～3h后可以觀察到蛋白條帶，采用快速染色脫色方法20min左右即可觀察到蛋白條帶。如果想觀察到更清晰的蛋白條帶則需延長(zhǎng)染色、脫色時(shí)間。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、水平搖床或側(cè)擺搖床

2、蒸餾水

3、20%甘油水溶液

常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒 凝膠染色

操作步驟(僅供參考)：

(一)常規(guī)染色脫色方法

1、PAGE電泳后取凝膠放入適量Commassie Blue Stain中，確保染色液充分覆蓋凝膠。

2、置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)，室溫染色1h或更長(zhǎng)時(shí)間。具體的染色時(shí)間取決于凝膠的厚度和染色時(shí)的溫度。凝膠較厚，溫度較低，則染色時(shí)間宜適當(dāng)延長(zhǎng)。凝膠較薄，溫度較高，則染色時(shí)間可以適當(dāng)縮短。通常染色至凝膠的顏色和染色液的顏色非常接近，在染色液中幾乎看不清凝膠時(shí)，可以認(rèn)為已染色充分。染色2～4h或更長(zhǎng)時(shí)間不會(huì)對(duì)最終的染色效果產(chǎn)生負(fù)面影響。

3、倒出染色液，該染色液可以回收重復(fù)使用2～3次。

4、加入適量Commassie Blue脫色液，確保脫色液可以充分覆蓋凝膠。

5、置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)，室溫脫色4～24h。期間更換脫色液2～4次，直至藍(lán)色背景基本上全部被脫去，并且蛋白條帶染色效果達(dá)到預(yù)期。通常蛋白條帶在脫色1～2h后即可出現(xiàn)。脫色期間可以在脫色液中加入一片吸水紙，可以使部分染料吸附在吸水紙上，加快脫色。脫色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)也會(huì)導(dǎo)致蛋白條帶的顏色變淺。

6、完成脫色后把凝膠保存在水中，用于后續(xù)的拍照等。保存在水中的凝膠會(huì)發(fā)生溶漲。如需避免溶漲，可以把膠保存在含20%甘油水溶液中，長(zhǎng)期保存可以制備干膠。

(二)快速染色脫色方法

1、PAGE電泳結(jié)束后取膠放入Commassie Blue stain中，微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰，立即停止加熱。通常對(duì)于膠濃度大于10％的膠比較堅(jiān)韌，在發(fā)生煮沸時(shí)不易破損；對(duì)于膠濃度小于10%的膠，宜盡量避免煮沸，以免出現(xiàn)膠碎裂的情況。

2、隨后在染色液溫度較高的情況下，在室溫?fù)u床上搖動(dòng)5～10min。

3、倒出染色液，染色液可以回收重復(fù)使用2～3次。

4、加入適量Commassie Blue脫色液，確保脫色液可以充分覆蓋凝膠。

5、微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰，立即停止加熱。

6、隨后在脫色液溫度較高的情況下，在搖床上搖動(dòng)5～10min。此時(shí)通?？梢杂^察到比較清楚的蛋白條帶。

7、更換新鮮的脫色液，重復(fù)步驟5和步驟6，直至藍(lán)色背景基本上全部被脫去，蛋白條帶染色效果達(dá)到預(yù)期。

8、完成脫色后，把凝膠保存在水中，用于后續(xù)的拍照等。保存在水中的凝膠會(huì)發(fā)生溶漲。如需避免溶漲，可以把膠保存在含20%甘油水溶液中，長(zhǎng)期保存可以制備干膠。

注意事項(xiàng)：

1.染色時(shí)如果把凝膠和染色液一起放置在微波爐中適當(dāng)加熱，可以大大加快染色速度。但加熱時(shí)宜盡量避免沸騰，以免出現(xiàn)因暴沸而導(dǎo)致的凝膠碎裂。

2.如果希望染色的背景更低，希望獲得更加清晰的蛋白條帶，可以加入適量的室溫蒸餾水進(jìn)行洗滌。通過(guò)蒸餾水洗滌可以進(jìn)一步降低背景。在4℃蒸餾水中浸泡過(guò)夜可以獲得背景更低，條帶更清晰的條帶。在次日對(duì)4℃蒸餾水浸泡過(guò)夜的已經(jīng)進(jìn)行了染色的凝膠再同前一天一樣進(jìn)行染色和洗滌可以進(jìn)一步改善染色效果，獲得更好的考染蛋白條帶。

3.常規(guī)染色脫色方法耗時(shí)較長(zhǎng)，但檢測(cè)靈敏度更高，染色效果更加穩(wěn)定。快速染色脫色方法通常檢測(cè)靈敏度略低，并且在微波爐加熱的過(guò)程中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)暴沸導(dǎo)致凝膠碎裂的情況，需特別注意。另外微波爐加熱導(dǎo)致的高溫會(huì)引起染色液和脫色液中的乙酸的揮發(fā)。

4.本染色液呈酸性，有輕微腐蝕性，使用時(shí)請(qǐng)作必要防護(hù)。

5.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期： 12個(gè)月有效。

常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒 凝膠染色