涉及濕熱滅菌生物指示劑試驗(yàn)指將一定量的已知D值微生物耐熱孢子接種到待滅菌的產(chǎn)品中，在設(shè)定的滅菌程序條件下限滅菌，以驗(yàn)證設(shè)定的滅菌工藝程序是否確實(shí)賦予產(chǎn)品所設(shè)定的F0值，由此進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)和評(píng)價(jià)過(guò)程也稱為挑戰(zhàn)性試驗(yàn)。
濕熱滅菌生物指示劑操作步驟如下：
濕熱滅菌生物指示劑驗(yàn)證方案制定的重點(diǎn)在產(chǎn)品的熱穩(wěn)定性、產(chǎn)品的污染水平與污染菌的耐熱數(shù)據(jù)。
（1）產(chǎn)品分析（接種模擬污染水平≥生產(chǎn)污染水平）；
（2）確定菌種孢子，選擇強(qiáng)于產(chǎn)品常見(jiàn)污染菌的熱耐受菌種孢子（菌種孢子含量的準(zhǔn)確性，質(zhì)量資料具備可追溯性，在有效期內(nèi)）；
（3）選取非致病菌，且具有良好的重現(xiàn)性能；
（4）應(yīng)在接種同時(shí)留置多支陽(yáng)性對(duì)照品，試驗(yàn)過(guò)程同步采樣培養(yǎng)。
濕熱滅菌生物指示劑充分采用熱分布及熱穿透的工作數(shù)據(jù)
裝載和樣品按照熱穿透布置不變。特別關(guān)注滅菌釜的zui冷點(diǎn)、次冷點(diǎn)以及同步點(diǎn)樣品編號(hào)。
設(shè)置試驗(yàn)溫度滅菌限（也稱低限滅菌）
既低于設(shè)計(jì)值，比F0 低3 %——5%進(jìn)行滅菌。由此而設(shè)計(jì)滅菌程序時(shí)間，如滅菌值F0 產(chǎn)品計(jì)算下限為8.5，設(shè)計(jì)為8.3限。
濕熱滅菌生物指示劑按擬訂下限滅菌程序結(jié)束
（1）QC現(xiàn)場(chǎng)采樣，試驗(yàn)編號(hào)數(shù)據(jù)和對(duì)照品編號(hào)數(shù)據(jù)同步收集；
（2）樣品按照確定菌種孢子培養(yǎng)要求（一般在特定溫度和有好氧與厭氧條件區(qū)分）；
（3）實(shí)驗(yàn)樣品和陽(yáng)性品同條件分別培養(yǎng)觀測(cè)。如陽(yáng)性品正常培養(yǎng)失敗，既可判試驗(yàn)無(wú)效而失敗。因盾之不存，矛的鋒利無(wú)從談起。
濕熱滅菌生物指示劑檢測(cè)試驗(yàn)的重現(xiàn)性
每一品種規(guī)格的滅菌程序至少應(yīng)進(jìn)行3次以上的試驗(yàn)，試驗(yàn)的數(shù)據(jù)必須穩(wěn)定一致，重現(xiàn)性良好。否則，查找原因，重新開(kāi)始。
生物指示劑挑戰(zhàn)性試驗(yàn)是一項(xiàng)典型的滅菌安全性評(píng)價(jià)驗(yàn)證，需要工藝人員試驗(yàn)技師和QC方面密切的配合和的設(shè)計(jì)。達(dá)到2.6.4與2.6.5可接受的標(biāo)準(zhǔn)后，可以證實(shí)試驗(yàn)成功，它代表工藝設(shè)計(jì)的滅菌程序與參數(shù)是合理的，也賦予了產(chǎn)品足夠的安全性。另一方面，也證實(shí)前期設(shè)備的選擇是符合生產(chǎn)需要的硬件。
操作擬訂的SOP、SMP把生產(chǎn)技術(shù)操作過(guò)程置于可控范圍，至此本項(xiàng)驗(yàn)證工作可以告結(jié)束，轉(zhuǎn)入下一項(xiàng)定期再驗(yàn)證流程。這樣，為將來(lái)產(chǎn)品滅菌質(zhì)量保證鎖上了“第二把鎖” 。