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廣州市艾貝泰生物科技有限公司

細(xì)胞電融合儀的基本操作,新手不得不看

時(shí)間:2022-7-13 閱讀:2192
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  動(dòng)物的游離細(xì)胞以及植物或微生物去壁后的原生質(zhì)體,在電刺激下可進(jìn)行細(xì)胞融合,且融合率高、無(wú)毒性、操作簡(jiǎn)便及融合后的細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)成活率高等特點(diǎn),是細(xì)胞工程手段的又一進(jìn)展。
 
  細(xì)胞電融合儀實(shí)驗(yàn)原理將制備的游離細(xì)胞或原生質(zhì)體,置于電融合室中,在高頻交流電場(chǎng)的作用下,細(xì)胞被極化,成為偶極子,造成細(xì)胞之間相互連接,如果施加的高頻交流電壓(即正弦波的P-P值)過(guò)高或作用時(shí)間過(guò)長(zhǎng),則細(xì)胞連接成串珠狀,應(yīng)適當(dāng)控制以上條件,盡量使兩細(xì)胞處于點(diǎn)接觸狀態(tài);然后施加方波脈沖予以刺激,由于電脈沖的瞬間作用,可擊破兩細(xì)胞接觸點(diǎn)部位的質(zhì)膜,此時(shí)質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生重組,同時(shí)由于細(xì)胞表面的張力作用,使兩細(xì)胞融合逐步完成。
 
  細(xì)胞電融合儀操作:
 
  (1)開啟電源,關(guān)閉“輸出開關(guān)”,將開關(guān)搬向正弦輸出檔,此時(shí)可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,將正弦頻率選擇在1~1.3MHz,脈沖寬度為0.1ms或10Hs,脈沖幅度為150V,脈沖頻率為1次/s,并依次按下各標(biāo)定按鍵,調(diào)整正弦電壓(即正弦幅度)旋扭,使電壓表處于5-1OV;
 
  (2)將電融合池內(nèi)兩電極距離調(diào)整成1~1.5min,并用毛細(xì)吸管吸取制備的原生質(zhì)體懸液約0.1~0.2ml置融合池中,蓋上蓋片,注意在融合池中,特別是在兩電極間不能容有氣泡;
 
  (3)將融合池置于顯微鏡載物臺(tái)上,并將兩電極的輸出端與儀器的輸出電纜接通,然后用低倍鏡(10xl0)找出融合室中央兩電極間的焦面,此時(shí)可觀察到原生質(zhì)體呈平均分布狀態(tài),互不接觸;
 
  (4)打開輸出開關(guān),原生質(zhì)體在高頻交流電場(chǎng)作用下,迅速按電極垂直方向排列,此時(shí)應(yīng)控制正弦電壓大小,如果原生質(zhì)體接觸緩慢,可適當(dāng)提高正弦電壓;如果原生質(zhì)體間接觸過(guò)快,應(yīng)立即降低電壓,否則相互接觸的原生質(zhì)體很快會(huì)連接成串珠狀。

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