Hep-3b-GFP?細(xì)胞
規(guī)格:70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細(xì)胞一瓶
特點(diǎn):細(xì)胞代數(shù)為4代以內(nèi)
包裝:內(nèi)層無(wú)菌自封袋;專用防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說(shuō)明書(shū)
細(xì)胞來(lái)源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:2-3周
運(yùn)輸方式:快遞運(yùn)輸
售后:收到細(xì)胞后7天,如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問(wèn)題(如污染,死亡,快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí),應(yīng)出具書(shū)面質(zhì)量問(wèn)題報(bào)告并及時(shí)聯(lián)系銷售人員,我們將盡快為您解決Hep-3b-GFP??細(xì)胞
1,簽收細(xì)胞后狀態(tài)穩(wěn)定可以先凍存留種
2,傳代當(dāng)天用普通培養(yǎng)基,不要加嘌呤霉素,待細(xì)胞培養(yǎng)1-2天,密度達(dá)到40%后再加
3,階梯式加藥:待到細(xì)胞密度40%以上后,初次加1ug/ml維持觀察2天左右,細(xì)胞狀態(tài)無(wú)影響再加到1.5-2ug/ml,觀察2天無(wú)影響后,最后加到3ug/ml
4,復(fù)蘇后,待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定,密度40%以后,直接加3ug/ml,梯度加藥主要是針對(duì)第一次使用嘌呤霉素的時(shí)候,以免不同實(shí)驗(yàn)室的藥物濃度和活性差異較大,第一次直接使用高濃度把細(xì)胞狀態(tài)弄受損
5,凍存后復(fù)蘇初期,可以用15%血清,讓狀態(tài)盡快穩(wěn)定,然后再降為10%
GFP 和 RFP 分別轉(zhuǎn)染的綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白 直接在熒光顯微鏡下 即可觀察
LUC是螢火蟲(chóng)熒光素酶 需要加底物(D-熒光素鈉鹽)發(fā)光 激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為328nm和533nm
凍存操作步驟(緩凍):
凍存液成分:10%DMSO + 30%血清+基礎(chǔ)培養(yǎng)液
1、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,經(jīng)胰酶消化后,加入適量?jī)龃嬉海?用吸管吹打制成細(xì)胞懸液(1×106 ~ 5 ×106細(xì)胞/ml)
2、加入1ml細(xì)胞于凍存管中,冷凍管置于4℃ 15 分鐘→ -20℃ 30-60 分鐘→ -80℃ 16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存
復(fù)蘇操作步驟:
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃
2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。
3.在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過(guò)毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等