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青旗(上海)生物技術(shù)發(fā)展有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第5年

4006560232

HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

參  考  價(jià):360 - 1530
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號(hào)

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    上海市

規(guī)格

10x100ul 360元 9999 件 可售

50x100ul 1530元 9999 件 可售

更新時(shí)間:2022-01-20 17:50:05瀏覽次數(shù):2106次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 10x100ul/50x100ul
貨號(hào) BFNC86089 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 僅用于科研
HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞
HT115(DE3)菌株是一類特殊的RNase III缺陷型大腸桿菌菌株,可以飼喂線蟲,主要用于秀麗隱桿線蟲(C. elegans)的RNAi干擾試驗(yàn)。該菌株可以在LB或2YT培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng),Tn10轉(zhuǎn)座子的存在使其具有四環(huán)素抗性。

HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞


產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86089-01(10×100ul)/BFNC86089-02(50×100ul)


HT115(DE3):                                                    100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                           10μl

保存條件(保質(zhì)期):                                   -80℃(6個(gè)月)



基因型

F- mcrA mcrB, IN(rrnD-rrnE)1 rnc14::Tn10(DE3 lavUV5::T7 polymerase)


產(chǎn)品說(shuō)明

HT115(DE3)菌株是一類特殊的RNase III缺陷型大腸桿菌菌株,可以飼喂線蟲,主要用于秀麗隱桿線蟲(C. elegans)的RNAi干擾試驗(yàn)。該菌株可以在LB或2YT培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng),Tn10轉(zhuǎn)座子的存在使其具有四環(huán)素抗性。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶,在IPTG存在時(shí)可誘導(dǎo)T7 RNA聚合酶大量表達(dá),進(jìn)而啟動(dòng)線蟲ds RNA的表達(dá)),可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,除了用于線蟲RNAi干擾試驗(yàn),也可用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。

青旗生物生產(chǎn)的HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)0.5×108 cfu/μg DNA。


操作方法

1. HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的質(zhì)粒并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的LB無(wú)菌培養(yǎng)液,37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。


HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞


IPTG配制:

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

    by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.




注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。

3. 誘導(dǎo)時(shí),IPTG濃度可根據(jù)實(shí)驗(yàn)選擇使用(0.1-10mM)。

4. 進(jìn)行線蟲RNAi質(zhì)粒轉(zhuǎn)化時(shí),抗生素使用濃度可參考:氨芐—50ug/ml,四環(huán)素—12.5ug/ml。

5. 若進(jìn)行蛋白表達(dá),為獲得需要量的蛋白,誘導(dǎo)時(shí)間,溫度,IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。


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