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實時熒光定量PCR實驗時的注意事項
閱讀：3973 發(fā)布時間：2020-7-17實時熒光定量PCR實驗需要先制備混合反應(yīng)液，大劑量包裝的反應(yīng)試劑，使用前進(jìn)行分裝，盡量減少試劑的反復(fù)凍融。建議所有樣本要有三個重復(fù)。實驗操作過程時需注意以下幾點(diǎn)，有利于避免實驗污染問題。1.用稀釋的漂白劑或凈化劑擦拭凈化臺。2.在的配有紫外燈超凈式或者超靜臺中準(zhǔn)備樣品，理想的是樣品的準(zhǔn)備與PCR的擴(kuò)增分開在不同的區(qū)域完成。3.在樣品制備和配制反應(yīng)過程中要勤換手頭。4.勤用稀釋的漂白劑擦拭移液器。5.只使用PCR級的水和PCR試劑進(jìn)行PCR實驗。5. 用帶旋蓋的 EP 管稀釋和配制反應(yīng)液。6. 在進(jìn)行 PCR 實驗時，還應(yīng)準(zhǔn)備一個無模板的對照來驗證有無污染發(fā)生，而且用熱啟動酶防止反應(yīng)開始之前的非特異性擴(kuò)增。在選擇適合做熒光定量PCR試劑凍干的凍干機(jī)時，,要具有完整的PAT控制技術(shù)，可對凍干過程進(jìn)行完整的控制和分析監(jiān)控。包括預(yù)凍全過程控制、預(yù)凍結(jié)束判定、升華全過程控制、升華結(jié)束判定、解析全過程控制及凍干結(jié)束判定。板層溫度均一度±1℃。系統(tǒng)極限真空度±1Pa。系統(tǒng)真空泄露率＜3Pa.L/S。外界干擾熱量屏蔽。共晶點(diǎn)測試儀助力工藝開發(fā)。全進(jìn)口配件。建議提高熒光PCR凍干的相關(guān)性。
| 型號 | Pilot3-6T | Pilot5-8T | Pilot7-12T | Pilot10-15T |
| 凍干面積 | 0.42㎡ | 0.56㎡ | 0.84㎡ | 1.05㎡ |
| ∅22西林瓶裝量（20ML） | ≥900支 | ≥1170支 | ≥1500支 | ≥2100支 |
| ∅16西林瓶裝量（5ML） | ≥1700支 | ≥2210支 | ≥3100支 | ≥4100支 |
| 冷阱溫度（空載） | -85℃ | |||
| 真空度（空載） | ≤1Pa | |||
| 板層溫度（空載） | -55℃ | |||
| 板層制冷方式 | 硅油循環(huán) | |||
| 板層數(shù)量 | 3+1 | 4+1 | 4+1 | 5+1 |
| 板層尺寸（mm） | 350*400 | 350*400 | 350*600 | 350*600 |
| 捕水能力 | 6L | 8L | 12L | 10L |
| 凍干效率 | 3L/24H | 5L/24H | 7L/24H | 10L/24H |
| 板層間距 | 100mm | 80mm | 90mm | 100mm |
| 穿墻隔離 | √ | √ | √ | √ |
| 凍干曲線擬合度 | 100% | 100% | 100% | 100% |
| 晶型控制 | √ | √ | √ | √ |
| 蒸汽分壓控制 | √ | √ | √ | √ |
| 升華結(jié)束判定 | √ | √ | √ | √ |
| 凍干終點(diǎn)測試 | √ | √ | √ | √ |
| 壓塞 | 液壓 | |||
| 整機(jī)尺寸 （約） | W860*D1400*H1800 | W860*D1400*H1800 | W860*D1700*H1900 | W860*D1700*H1900 |
