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肺纖維化動物模型服務(wù)構(gòu)建

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更新時間:2024-07-31 10:04:27瀏覽次數(shù):381次

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肺纖維化動物模型服務(wù)構(gòu)建是異常修復(fù)造成不可逆損傷的一類疾病,以炎癥和細(xì)胞外基質(zhì)沉積為特征,呈進(jìn)展性和致死性的彌漫性肺間質(zhì)疾病,其中,特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)發(fā)病率最高。

肺纖維化動物模型服務(wù)構(gòu)建


一、肺纖維化背景簡介

肺纖維化(pulmonary fibrosis,PF)是肺組織異常修復(fù)造成不可逆損傷的一類疾病,以炎癥和細(xì)胞外基質(zhì)沉積為特征,呈進(jìn)展性和致死性的彌漫性肺間質(zhì)疾病,其中,特發(fā)性肺間質(zhì)肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)發(fā)病率最高。


二、肺纖維化動物模型簡介

構(gòu)建一個理想的肺纖維化模型,不僅有助于進(jìn)一步篩選肺纖維化生物標(biāo)志物,同時也為深入研究肺纖維化發(fā)病機(jī)制及動物臨床治療肺纖維化和研發(fā)新藥提供科學(xué)基礎(chǔ)。


三、肺纖維化動物模型服務(wù)構(gòu)建方法

1. 實(shí)驗(yàn)動物

C57小鼠   6周齡

2. 實(shí)驗(yàn)材料

C57小鼠,blms,注射器

3. blms誘導(dǎo)模型制備流程

1小鼠按照麻醉劑劑量麻醉后固定,呈仰臥位姿勢,氣管居中,暴露頸部,剪毛備皮,無水乙醇消毒后沿頸部中線開口(開口大小:0.5-1cm左右)緩慢鈍性分離至氣管,此時需要輕柔操作,減少因手術(shù)操作造成的氣管損傷。

2使用注射器(1ml或者微量注射器,胰島素針不失為好的選擇),針頭幾乎平行于氣管平面,經(jīng)氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端插入氣管內(nèi),回抽無阻力,則注入少量的blms溶液(不超過0.2 ml/只,肺內(nèi)大量積液會導(dǎo)致動物的死亡)。

3注射完畢后,縫合傷口,后將動物直立1-3 min,適度左右轉(zhuǎn)動,并輕輕按摩小鼠胸部,保證blms在肺內(nèi)均勻分布,動物清醒后常規(guī)飼養(yǎng)。(3天左右即可出現(xiàn)損傷,體重降低等癥狀)28d后收集樣本。


4.模型鑒定

4.1 HE染色觀察肺組織肺泡炎程度

肺組織肺泡炎評分:無肺泡炎計(jì)1 分,輕、中、重度肺泡炎分別計(jì)2、3、4 分。輕度肺泡炎主要表現(xiàn)為單核細(xì)胞浸潤,肺泡間隔增寬但結(jié)構(gòu)正常,浸潤局限于近胸膜部,受累面積小于全肺的20 %;中度肺泡炎受累面積占全肺20 % ~ 50 %;重度肺泡炎受累面積占全肺的50 % 以上,偶見肺泡腔內(nèi)有單核細(xì)胞及出血造成實(shí)變。

4.2 Masson染色觀察肺組織肺纖維化程度

肺纖維化程度評分:無纖維化計(jì)1 分,輕、中、重度肺纖維分別計(jì)2、3、4 分。輕度纖維化主要累及胸膜及胸膜下肺間質(zhì),肺泡結(jié)構(gòu)紊亂,受累面積小于20 %;中度纖維化受累面積占全肺的20 %~50 %;重度纖維化受累面積占全肺的50 % 以上,肺實(shí)質(zhì)紊亂,并有融合,可見大小不等的囊氣腔。


四、小結(jié)

在PE動物模型中,BLM造??尚行院?,研究性強(qiáng),能夠重視一般PE,其用于IPE發(fā)病機(jī)制的研究和有效治療藥物的研發(fā)具有很大的實(shí)用價值。但是BPF動物模型與臨床IPE相比仍存有一定差異,在實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)用方面也有一定局限性,因此需加強(qiáng)對BLM作用機(jī)制及IPE的研究,進(jìn)一步明確其相關(guān)性


五、參考文獻(xiàn)

[1] 張成華 ,朱慶均 一,田景振 , (1.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,濟(jì)南 250355;2.山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院,濟(jì)南 250355;3.山東省高校中醫(yī)藥抗病毒協(xié)同創(chuàng)新中心,濟(jì)南 250355)

[2]Villarreal AM,Yu H,Printz MP.Bradykinin—induced re— duction in collagen gene expression involve prostacyclin[J]. Hypertension,1998,32(1):81—84.

[3]蔡后榮 2011年特發(fā)性肺纖維化診斷和治療循證新指 南解讀 .中國呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志,2011,10(4):

[4] Lutz W ,Eva W,Alexander P,et a1.Mode ofaction of nintedanib in the treatment of idiopathic pulmonary fibro— sis[J].EurRespir J.2015,45(5):1434—1445.

[5]Hinz B,Phan SH,Thannickal VJ,et a1.Recent develop— ments in myofibroblast biology:paradigms for connec— tive tissue remodeling[J].Am J Pathol,2012,180(4): 1340—1355




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