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伊萊博生物科技(上海)有限公司
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細胞周期檢測技術(shù)

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更新時間:2023-10-30 18:15:57瀏覽次數(shù):955次

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細胞周期檢測技術(shù):細胞周期是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過程,分為間期與分烈期兩個階段。細胞周期反應(yīng)了細胞增殖速度。單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法,但它不能代表細胞群體的周期,故現(xiàn)多采用其他方法測群體周期測定細胞周期的方法很多,常用的是PI滲入測定細胞周期。

細胞周期檢測技術(shù)實驗步驟

實驗共分以下4個主要步驟:

1.細胞鋪盤

HeLa S3細胞,密度為80%左右分盤,使鋪盤密度在50%左右,為滿足流式細胞儀上機要求,細胞數(shù)目需大于1x10°/組。

2.細胞同步化處理:

a)加入終濃度2mM的Thymidine同步化18h

b) 用溫育的PBS洗4次,更換新鮮培養(yǎng)基,培養(yǎng)9h

c) 再加入2mM Thymidine再次同步化18h后

3.樣品收集 ;

a) 分別收取釋放2h(S期),6h(G2/M期)和12h(G1期)細胞樣品

b) 每個樣品收取都使用預(yù)冷的PBS洗滌4次,1000g離心5min,棄上清

c) 100uL PBS重懸沉淀,吸取出細胞懸液于移液器中,于移去細胞的管中加入900uL預(yù)冷的70%乙醇,漩渦振蕩器震蕩中滴

入細胞懸液。

d)4℃固定一小時或更長時間。

e)1500rmp,離心10min,去固定液。

f)細胞染色液配制:50xRNaseA母液:50xPI母液:PBS=20:20:960;RNaseA母液濃度1mg/mL,工作濃度20ug/mL;PI母液濃度2.5mg/mL,工作濃度50ug/mL。

g) 細胞37度染色1h。根據(jù)細胞量,加入一定體積的細胞染色液(1~1.5mL)重懸,使上機時細胞通過率為200~350Cell/s,染色液不可過多或過少,過多則細胞密度過低上機速度嚴重不足,過少則導(dǎo)致細胞粘結(jié)。

h) 300目篩網(wǎng)過濾至流式管中。

4.上機檢測;

流式細胞儀上機檢測,計數(shù)50000個細胞。

5.同步化數(shù)據(jù)分析

細胞周期檢測技術(shù)

我們擁有專業(yè)的實驗室、精良的實驗設(shè)備和經(jīng)驗豐富的科研技術(shù)人員。技術(shù)團隊包括研究員(博士后)2人,助理研究員(博士)4人,核心研究員(碩士)15人,主要致力于基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、生物化學(xué)、病理檢測、基因檢測等技術(shù)在科研中的應(yīng)用與推廣。通過高度細分、較好的的服務(wù)平臺,為廣大客戶提供了完善的技術(shù)解決方案和服務(wù)。目前,及,涉及臨床醫(yī)學(xué)、腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué)、細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等諸多領(lǐng)域。



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