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細(xì)胞周期檢測技術(shù)

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更新時(shí)間:2023-10-30 18:15:57瀏覽次數(shù):956次

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細(xì)胞周期檢測技術(shù):細(xì)胞周期是指細(xì)胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過程,分為間期與分烈期兩個(gè)階段。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。單個(gè)細(xì)胞的周期測定可采用縮時(shí)攝影的方法,但它不能代表細(xì)胞群體的周期,故現(xiàn)多采用其他方法測群體周期測定細(xì)胞周期的方法很多,常用的是PI滲入測定細(xì)胞周期。

細(xì)胞周期檢測技術(shù)實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)共分以下4個(gè)主要步驟:

1.細(xì)胞鋪盤

HeLa S3細(xì)胞,密度為80%左右分盤,使鋪盤密度在50%左右,為滿足流式細(xì)胞儀上機(jī)要求,細(xì)胞數(shù)目需大于1x10°/組。

2.細(xì)胞同步化處理:

a)加入終濃度2mM的Thymidine同步化18h

b) 用溫育的PBS洗4次,更換新鮮培養(yǎng)基,培養(yǎng)9h

c) 再加入2mM Thymidine再次同步化18h后

3.樣品收集 ;

a) 分別收取釋放2h(S期),6h(G2/M期)和12h(G1期)細(xì)胞樣品

b) 每個(gè)樣品收取都使用預(yù)冷的PBS洗滌4次,1000g離心5min,棄上清

c) 100uL PBS重懸沉淀,吸取出細(xì)胞懸液于移液器中,于移去細(xì)胞的管中加入900uL預(yù)冷的70%乙醇,漩渦振蕩器震蕩中滴

入細(xì)胞懸液。

d)4℃固定一小時(shí)或更長時(shí)間。

e)1500rmp,離心10min,去固定液。

f)細(xì)胞染色液配制:50xRNaseA母液:50xPI母液:PBS=20:20:960;RNaseA母液濃度1mg/mL,工作濃度20ug/mL;PI母液濃度2.5mg/mL,工作濃度50ug/mL。

g) 細(xì)胞37度染色1h。根據(jù)細(xì)胞量,加入一定體積的細(xì)胞染色液(1~1.5mL)重懸,使上機(jī)時(shí)細(xì)胞通過率為200~350Cell/s,染色液不可過多或過少,過多則細(xì)胞密度過低上機(jī)速度嚴(yán)重不足,過少則導(dǎo)致細(xì)胞粘結(jié)。

h) 300目篩網(wǎng)過濾至流式管中。

4.上機(jī)檢測;

流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測,計(jì)數(shù)50000個(gè)細(xì)胞。

5.同步化數(shù)據(jù)分析

細(xì)胞周期檢測技術(shù)

我們擁有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室、精良的實(shí)驗(yàn)設(shè)備和經(jīng)驗(yàn)豐富的科研技術(shù)人員。技術(shù)團(tuán)隊(duì)包括研究員(博士后)2人,助理研究員(博士)4人,核心研究員(碩士)15人,主要致力于基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、生物化學(xué)、病理檢測、基因檢測等技術(shù)在科研中的應(yīng)用與推廣。通過高度細(xì)分、較好的的服務(wù)平臺,為廣大客戶提供了完善的技術(shù)解決方案和服務(wù)。目前,及,涉及臨床醫(yī)學(xué)、腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等諸多領(lǐng)域。



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