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細(xì)胞平板克隆形成實驗

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更新時間:2023-10-30 08:21:48瀏覽次數(shù):1640次

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細(xì)胞平板克隆形成實驗是當(dāng)單個細(xì)胞在體外增殖6代以上,其后代所組成的細(xì)胞群體,稱為集落或者克隆。每個克隆含有50個以上的細(xì)胞,大小在0.3-1.0mm之間。集落形成率表示細(xì)胞的獨立生存能力。細(xì)胞接種存活率只表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞數(shù),但貼壁的細(xì)胞不一定每個都能增殖和形成克隆。

細(xì)胞平板克隆形成實驗步驟

1、細(xì)胞懸液制備:取對數(shù)生*的單層培養(yǎng)細(xì)胞,用0. 25%蛋白酶消化并吹打成單個細(xì)胞,離后用*培養(yǎng)基重懸,制成細(xì)胞懸液。

2、細(xì)胞種板:將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋,以每皿50、100、 200、 500、1000、 2000個細(xì)胞的梯度密度分別接種含1 ml 37 C預(yù)熱培養(yǎng)液的皿中,并輕輕轉(zhuǎn)動,使細(xì)胞分散均勻。置37 C 5% Co2的環(huán)境下,靜置培養(yǎng)。

3、細(xì)胞觀察:顯微鏡下觀察到單個細(xì)胞長到20個以上細(xì)胞克隆,培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時,終止培養(yǎng)。棄去.上清液,用PBS小心浸洗2次。加純甲醇1ml,固定15分鐘。然后去固定液,加適量Giemsa應(yīng)用染色液染10分鐘,然后用流水緩慢洗去染色液,空氣干燥,手記拍照采集圖像。

4、克隆計數(shù):用肉眼直接計數(shù)克隆數(shù),后計算克隆形成率。

細(xì)胞平板克隆形成實驗結(jié)果分析


伊萊博生物科技(上海)有限公司,公司總部位于上海長江軟件園。2022年1月與上海交通大學(xué)藥學(xué)院成立聯(lián)合研究中心,主要以生命科學(xué)研究為基礎(chǔ),專注于研究成果轉(zhuǎn)化及技術(shù)服務(wù)創(chuàng)新,建立了包含腫瘤生物學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)與分子生物學(xué)以及動物實驗等學(xué)科的研究服務(wù)體系,為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn)。

      伊萊博生物擁有豐富的研究經(jīng)驗,具備完善的系統(tǒng)化管理能力和科研服務(wù)體系。目前已自建細(xì)胞、分子、病理等實驗平臺近1000平方米,擁有*的儀器設(shè)備、細(xì)胞庫、樣本保存庫等。動物實驗中心近1800平方米,可滿足同時飼養(yǎng)清潔級和SPF級動物。核心實驗技術(shù)團隊主要來自中國科學(xué)院大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)等重點高校及科研機構(gòu),能夠為客戶提供研究方案策劃、項目實施及項目深度分析等方面的技術(shù)支持。公司目前參與研究項目已經(jīng)涵蓋心腦血管、腫瘤、內(nèi)分泌、生殖、免疫、神經(jīng)等諸多領(lǐng)域。

       為了響應(yīng)大力發(fā)展基礎(chǔ)研究的號召,推動生命科學(xué)領(lǐng)域的進(jìn)步,伊萊博生物充分利用積累多年的科研資源優(yōu)勢,提供培訓(xùn)服務(wù)。通過實驗理論培訓(xùn)和實踐相結(jié)合,充分了解科學(xué)研究和實驗操作的全過程,培訓(xùn)規(guī)范的實驗操作、分析問題和解決問題的能力,分層次培養(yǎng)科研人才,為其今后的科研工作奠定堅實的基礎(chǔ)。


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