本方法參考NY/T2071-2011,試樣中的*,玉米赤霉烯酮和T-2毒素經(jīng)乙腈溶液提取,正己烷脫脂及多功能凈化柱凈化后,氮?dú)獯蹈?,甲酸乙腈溶液溶解,液質(zhì)法測定。
本方法*與T-2毒素的檢測限為1.0ug/kg,定量限為2.0ug/kg;玉米赤霉烯酮的檢測限為5.0ug/kg,定量限為10.0ug/kg。
飼料中黃曲霉,玉米赤霉烯酮和T-2毒素的測定
---LC-MS法
1.使用對象
本方法參考NY/T2071-2011,試樣中的*,玉米赤霉烯酮和T-2毒素經(jīng)乙腈溶液提取,正己烷脫脂及多功能凈化柱凈化后,氮?dú)獯蹈桑姿嵋译嫒芤喝芙?,液質(zhì)法測定。
本方法*與T-2毒素的檢測限為1.0ug/kg,定量限為2.0ug/kg;玉米赤霉烯酮的檢測限為5.0ug/kg,定量限為10.0ug/kg。
GB13078-2017飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定:
黃 曲 霉 毒 素 B1 ug/kg | 飼料 原料 | 種類 | *(ug/kg) | 方法 |
玉米加工產(chǎn)品,花生餅(粕) | ≦50 | NY/T 2071 |
植物油脂(玉米油,花生油除外) | ≦10 |
玉米油,花生油 | ≦20 |
其他植物性飼料原料 | ≦30 |
飼料 產(chǎn)品 | 仔豬,雛禽濃縮飼料 | ≦10 |
肉用仔鴨后期,生長鴨,產(chǎn)蛋鴨濃縮飼料 | ≦15 |
其他濃縮飼料 | ≦20 |
犢牛,羔羊精料補(bǔ)充料 | ≦20 |
泌乳期精料補(bǔ)充料 | ≦10 |
其他精料補(bǔ)充料 | ≦30 |
仔豬,雛禽配合飼料 | ≦10 |
肉用仔鴨后期,生長鴨,產(chǎn)蛋鴨配合飼料 | ≦15 |
其他配合飼料 | ≦20 |
玉 米 赤 霉 烯 酮 mg/kg | 飼料 原料 | 種類 | *(mg/kg) | 方法 |
玉米及其加工產(chǎn)品(玉米皮,噴漿玉米皮,玉米漿干粉除外) | ≦0.5 | NY/T 2071 |
玉米皮,噴漿玉米皮,玉米漿干粉,玉米酒糟類產(chǎn)品 | ≦1.5 |
其他植物性飼料原料 | ≦1 |
飼料 產(chǎn)品 | 犢牛,羔羊,泌乳期精料補(bǔ)充料 | ≦0.5 |
仔豬配合飼料 | ≦0.15 |
青年母豬配合飼料 | ≦0.1 |
其他豬配合飼料 | ≦0.25 |
其他配合飼料 | ≦0.5 |
T-2 毒 素 mg/kg | 種類 | *(mg/kg) | 方法 |
植物性飼料原料 | ≦0.5 | NY/T 2071 |
豬,禽配合飼料 | ≦0.5 |
2.實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
2.1溶液配制
甲酸溶液(0.1%):準(zhǔn)確量取甲酸1ml,加水至1000ml,搖勻即得。
乙酸溶液(0.02%):準(zhǔn)確量取冰乙酸0.2ml,加水至1000ml,搖勻即得。
甲酸乙腈溶液:取甲酸溶液50ml,加乙腈至100ml,搖勻即得。
2.2混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液:
分別吸取一定量的6種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品于棕色容量瓶中,用甲醇配成濃度為1ug/ml的混合儲備液,保存于4℃冰箱中。
2.3基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液:
分別吸取一定量的真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)儲備液,添加空白樣品提取液,氮?dú)獯蹈珊?,用流?dòng)相稀釋成濃度為1.0ug/L,5.0ug/L,10.0ug/L,50ug/L,100ug/L,200ug/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液,臨用新配。
3.樣品的前處理
(1)稱取5g±0.02g飼料樣品于50ml離心管中,準(zhǔn)確加入25ml提取液(乙腈:水=84:16),渦旋混勻2min,置于超聲波清洗器中超聲提取20min,中間振蕩2-3次。
(2)取出,于8000r/min離心5min,傾出上清液至分液漏斗中,加入15ml正己烷,充分振蕩。待靜止分層后,準(zhǔn)確量取下層液5ml,待用。
(3)將上述5ml液體,過多功能凈化柱,控制流速為2ml/min,收集流出液,在60℃氮?dú)庀麓蹈伞?/span>
(4)用1.0ml甲酸乙腈溶液溶解殘?jiān)?,渦旋30s,經(jīng)0.22um濾膜過濾后,上機(jī)檢測。
4 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法
4.1液相色譜條件
色譜柱: C18柱,3.0×150mm(3.0um);或其他等效色譜柱。
柱溫:33℃
進(jìn)樣量:20ul
流動(dòng)相,流速見下表。
a.ESI+源梯度洗脫條件
時(shí)間,min | 流速,mL/min | 甲酸溶液,% | 甲醇/乙腈(1:1) | 曲線(curve) |
0 | 0.3 | 70 | 30 | 1 |
4.0 | 0.3 | 55 | 45 | 6 |
14.0 | 0.3 | 0 | 100 | 6 |
15.0 | 0.3 | 0 | 100 | 6 |
15.1 | 0.3 | 70 | 30 | 6 |
a.ESI-源梯度洗脫條件
時(shí)間,min | 流速,mL/min | 乙酸溶液,% | 甲醇/乙腈(1:1) | 曲線(curve) |
0 | 0.3 | 70 | 30 | 1 |
8.0 | 0.3 | 10 | 90 | 6 |
13.0 | 0.3 | 10 | 90 | 6 |
13.1 | 0.3 | 70 | 30 | 6 |
20.0 | 0.3 | 70 | 30 | 6 |
4.2 質(zhì)譜條件
a離子源:電噴霧離子源。
b掃描方式:正離子掃描模式和負(fù)離子掃描模式。
c檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測。
d脫溶劑氣,錐孔氣均為高純氮?dú)?,碰撞氣為高純氬氣,使用前?yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求。
e毛細(xì)管電壓,錐孔電壓,碰撞能量等電壓值應(yīng)優(yōu)化至靈敏度。
f定性離子對,定量離子對,保留時(shí)間及對應(yīng)的錐孔電壓和碰撞能量參考值見下表
a.ESI +監(jiān)測模式
真菌毒素名稱 | 保留時(shí)間min | 定性離子對m/z | 定量離子對m/z | 錐孔電壓V | 碰撞能量eV |
hunag曲霉毒素B1 | 13.7 | 313.1>241.1 313.1>285.1 | 313.1>241.1 | 39 | 32 20 |
黃'曲霉毒素B2 | 13.2 | 315.1>259.1 315.1>287.0 | 315.1>259.1 | 44 | 28 24 |
*G1 | 12.6 | 329.0>243.1 329.0>283.1 | 329.0>243.1 | 40 | 26 24 |
hunag曲霉毒素G2 | 12.0 | 331.0>245.1 331.0>217.1 | 331.0>245.1 | 42 | 32 20 |
T-2毒素 | 16.0 | 489.1>245.2 489.1>387.1 | 4489.1>245.2 | 38 | 25 21 |
b.ESI-監(jiān)測模式
真菌毒素名稱 | 保留時(shí)間min | 定性離子對m/z | 定量離子對m/z | 錐孔電壓V | 碰撞能量eV |
玉米赤霉烯酮 | 13.4 | 317.0>175.1 317.0>273.1 | 317.0>175.1 | 40 | 26 26 |
5.定性測定
在相同實(shí)驗(yàn)條件下,樣品中待測物質(zhì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時(shí)間的偏差不超過標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時(shí)間的±2.5%,且樣品中各祖墳定性離子的相對豐度與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對應(yīng)的定性離子的相對豐度進(jìn)行比較,偏差不超過下表的范圍,可判定樣品中存在對應(yīng)的待測物。
定性確證時(shí)相對離子豐度的大允許偏差(%)
相對離子豐度 | >50 | >20-50 | >10-20 | ≦10 |
允許的大偏差 | ±20 | ±25 | ±30 | ±50 |
6.定量測定
在儀器工作條件下,混合標(biāo)準(zhǔn)工作液與試樣交替進(jìn)樣,采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液校正,外標(biāo)法定量。
品牌:科樂福clover
生產(chǎn)廠家:北京中檢維康生物技術(shù)有限公司