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浸泡并過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再置于無水酒清中浸泡6小時(shí)，再用三蒸水沖洗3遍（個(gè)人認(rèn)為主要目的是將酸沖洗干凈就可以了，如果不干凈的話，細(xì)胞帖壁不好），放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進(jìn)行高壓消毒。高壓后取出放入烤箱中烤干，備用?？靖珊罂煞湃氤瑑襞_(tái)中。

4.多聚賴氨酸的使用：

很多人都將玻片用此處理，以使細(xì)胞與玻片結(jié)合更牢。但我在做爬片時(shí)從來沒用過多聚賴氨酸，細(xì)胞貼壁仍然很好，且在做后續(xù)的免疫細(xì)胞化學(xué)染色、TUNEL等凋亡檢測(cè)、免疫熒光等也從未脫過片。

 

細(xì)胞爬片的操作

1.胰酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)重懸細(xì)胞于培養(yǎng)基中。

2.加細(xì)胞前，根據(jù)玻片的大小，先在每個(gè)孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基，使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起，然后放玻片，防止加細(xì)胞懸液時(shí)玻片漂起，造成雙層細(xì)胞貼片。(整個(gè)過程注意無菌操作)

3.根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度接入培養(yǎng)板內(nèi)即可。

4.待細(xì)胞貼壁后，可去上清加含藥培養(yǎng)基。

5.按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，作用一定時(shí)間后取玻片。取玻片時(shí)由于玻片與培養(yǎng)皿底結(jié)合較緊，張力較大，一般將注射器針頭針尖向背面弄個(gè)小鉤，這樣將爬片輕輕勾起，用小鑷子取出就可以了。如果要做諸如24h，48h，72h等這樣時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)的話，將所需數(shù)量的爬片取出時(shí)應(yīng)用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子。末取出的可接著繼續(xù)培養(yǎng)。

 

細(xì)胞爬片的固定

另外在保存細(xì)胞爬片的時(shí)候，一般用培養(yǎng)皿或板，先在皿底放一層面巾紙，然后再放爬片，這樣方便做實(shí)驗(yàn)時(shí)取片。

細(xì)胞爬片取出后，一般用PBS洗2遍，然后再做固定。當(dāng)然，有例外，比如做凋亡的TUNEL染色時(shí)就避免洗，因?yàn)榈蛲龅募?xì)胞在洗的過程中有可能會(huì)脫落。

然后蓋上蓋子，并在蓋子上做標(biāo)記，為避免混淆，可用透明膠帶將蓋子和皿連在一起。一般-20℃保存2-3個(gè)月的片子做免疫組化是沒有問題的。