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上海晅科生物科技有限公司>>技術文章>>熒光PCR試劑盒的檢測方法常見的局限性主要包括哪幾部分

熒光PCR試劑盒的檢測方法常見的局限性主要包括哪幾部分

閱讀:1014        發(fā)布時間:2022/10/26
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DNA提?。簩ι鲜鎏幚砗玫臉吮炯尤氲润w積核酸提取液(固體標本加入50μL核酸提取液),100℃恒溫處理10min,13,000rpm離心5min,取上清液轉移至新的1.5mL EP管,-20℃保存。
檢測方法的局限性:
a.樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;
b.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結果;
c.陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,會導致假陽性結果;
d.病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;
e.不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;
f.試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結果;
g.本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
結果判斷:
陽性:檢測通道Ct值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。
可疑:檢測通道Ct值>35.0,且出現(xiàn)典型擴增曲線的樣本建議重復試驗,重復試驗結果出現(xiàn)Ct值≤35.0和典型擴增曲線者為陽性,否則為陰性。
陰性:樣本檢測結果無Ct值且無明顯的擴增曲線。
質控標準:
陰性質控品:無明顯擴增曲線或無Ct值顯示;
陽性質控品:擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,且Ct值≤32;以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。

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