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當前位置:> 供求商機> ELISA檢測,酶聯(lián)免疫吸附實驗
貨物所在地:上海上海市
更新時間:2024-11-24 21:00:06
有效期:2024年11月24日 -- 2025年5月24日
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各種ELISA檢測方法講解:
間接法ELISA檢測:
用特異性抗原包被固相載體,加入待測的抗體樣品反應(yīng)后,再加入酶標二抗,經(jīng)底物顯色后測定。間接法ELISA需要客戶提供待檢測樣本和包被用的抗原。
實驗流程:
1. 將抗原吸附于固相載體表面;
2. 加待檢抗體,形成抗原-抗體復(fù)合物;
3. 加酶標抗體(抗抗體);
4. 加入底物;
5. 結(jié)果判定:有色產(chǎn)物的生成量=抗體量。
樣品要求:
1. 客戶需提供待檢測抗體(也可由我們代購)和包被用抗原。;
2. 檢測的樣本為細胞培養(yǎng)上清、人和動物的血清、血漿時,樣本收集后應(yīng)立即-20度保存,若長期保存應(yīng)-80度保存;
3.樣本量的要求:若一個指標做復(fù)孔檢測應(yīng)不少于250ul,做單孔檢測應(yīng)不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。
夾心法ELISA檢測:
用*抗原或抗體包被固相載體,加入待測的抗體或抗原反應(yīng)后,再加入酶標的第二抗原或抗體,經(jīng)底物顯色后測定,即可計算出待測抗原的量。此方法所用抗原一般為大分子抗原,如蛋白等,不適用于多肽等半抗原。夾心法ELISA需要客戶提供待檢測標本和成對抗原或抗體(亦可由我們購買或制備抗體)。
實驗流程:
1. 將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體:洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì);
2. 加受檢標本:使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時問,讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合,形成固相抗原復(fù)合物;
3. 加酶標抗體:使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合;
4. 加底物:夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進行該抗原的定性或定量。
樣品要求:
1. 客戶需提供待檢測抗體(也可由我們代購)和包被用抗原。;
2. 檢測的樣本為細胞培養(yǎng)上清、人和動物的血清、血漿時,樣本收集后應(yīng)立即-20度保存,若長期保存應(yīng)-80度保存;
3.樣本量的要求:若一個指標做復(fù)孔檢測應(yīng)不少于250ul,做單孔檢測應(yīng)不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。
競爭法ELISA檢測:
用特異性抗體包被固相載體,同時加入酶標抗原和待測抗原的混合物樣本,待測抗原將與酶標抗原競爭與固相上抗體結(jié)合。經(jīng)底物顯色后測定,計算兩組數(shù)值之差即可推出待測抗原的量。此方法常用于測定小分子抗原。競爭法ELISA需要客戶提供待檢測標本、包被抗體和酶標抗原(亦可由我們購買或制備抗原或抗體)。
實驗流程:
1. 將抗體吸附在固相載體表面;
2. 加入酶標抗原和待測抗原;
3. 加入底物;
4. 結(jié)果判定:對照孔與樣品孔有色產(chǎn)物的生成量的差與未知抗原的量成負相關(guān)。
樣品要求:
1. 客戶需提供待檢測抗體(也可由我們代購)和包被用抗原。;
2. 檢測的樣本為細胞培養(yǎng)上清、人和動物的血清、血漿時,樣本收集后應(yīng)立即-20度保存,若長期保存應(yīng)-80度保存;
3.樣本量的要求:若一個指標做復(fù)孔檢測應(yīng)不少于250ul,做單孔檢測應(yīng)不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。
ELISA檢測的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。
ELISA檢測又稱為酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)基本原理
它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測物與酶連接,然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。
在這種測定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑) ②酶標記的抗原或抗體(標記物)③酶作用的底物(顯色劑)
ELISA檢測又稱為酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)測量時,抗原(抗體)先結(jié)合在固相載體上,但仍保留其免疫活性,然后加一種抗體(抗原)與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物(標記物),此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性,當偶聯(lián)物與固相載體上的抗原(抗體)反應(yīng)結(jié)合后,再加上酶的相應(yīng)底物,即起催化水解或氧化還原反應(yīng)而呈顏色。
其所生成的顏色深淺與欲測的抗原(抗體)含量成正比。 這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察,也可以用分光光度計(酶標儀)加以測定。其方法簡單,方便迅速,特異性強。
ELISA檢測又稱為酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)特點
1)靈敏性高
該測定法的靈敏度來自作為報告基團的酶。*, 酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng) ,產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。ELISA實現(xiàn)了在細胞或亞細胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位,或在微克、甚至納克水平上對其進行定量。
2)ELISA檢測又稱為酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)特異性強
其特異性來自抗體或抗原的選擇性??乖贵w的結(jié)合實質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補關(guān)系,所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。
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