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IHC免疫組化操作步驟

⑴、石蠟切片脫蠟至水。

⑵、 3%H 2 O2 室溫孵育 5-10 分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。

⑶、蒸餾水沖洗， PBS 浸泡 5 分鐘 x2 （如需抗原修復(fù)，可在此步后進(jìn)行）。

⑷、 5-10% 正常山羊血清（PBS 稀釋）封閉，室溫孵育 10 分鐘，傾去血清，勿洗。滴加一抗工作液， 37 ℃ 孵育 1-2 小時(shí)或 4 ℃ 過夜。

⑸、 PBS 沖洗， 5 分鐘 x3 次。

⑹、滴加適量生物素標(biāo)記二抗工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。

⑺、 PBS 沖洗， 5 分鐘 x3 次。

⑻、滴加適量的辣根酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。

⑼、 PBS 沖洗， 5 分鐘 x3 次。

⑽、顯色劑顯色 3-15 分鐘（DAB 或 NBT/BCIP）

⑾、自來水充分沖洗，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片。

IHC免疫組化是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)（immunohistochemistry）
IHC免疫組化原理

免疫組織化學(xué)利用了抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。先將組織或細(xì)胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動(dòng)物后獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測(cè)組織或細(xì)胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復(fù)合物是無色的，因此還必須借助于組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來，以其達(dá)到對(duì)組織或細(xì)胞中的未知抗原進(jìn)行定性，定位或定量的研究。

IHC免疫組化結(jié)果判定：

陽性組織為棕色（DAB顯色）或是紫紅色（NBT/BCIP）著色

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