免疫熒光(Immunofluorescence)又稱熒光抗體技術(shù),是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合,利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。
免疫熒光(Immunofluorescence)又稱熒光抗體技術(shù),是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合,利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。
免疫熒光原理
免疫學(xué)的基本反應(yīng)是抗原-抗體反應(yīng)。由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性,所以當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)時,只要知道其中的一個因素,就可以查出另一個因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體(或抗原)上,與其相應(yīng)的抗原(或抗體)結(jié)合后,在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。
免疫熒光主要步驟:
石蠟切片復(fù)水,或是冰凍切片;
抗原修復(fù)(需要時);
抗體封閉液封閉;
一抗反應(yīng)4度,6小時;
PBS洗滌3次;
熒光標(biāo)志的二抗,37度,30分鐘;
PBS洗滌3次;
抗熒光衰減封片劑封片。
免疫熒光主要特點(diǎn)
優(yōu)點(diǎn):
特異性強(qiáng);
敏感性高;
可進(jìn)行多色熒光共同染色
缺點(diǎn):尚存在非特異性染色的問題,技術(shù)程序比較復(fù)雜。
免疫熒光結(jié)果:
抗原存在部位帶有二抗標(biāo)志的熒光。